ICS65.020

CCSB30

52

貴州省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB52/T1677—2022

板栗印度塊菌菌根苗培育技術(shù)術(shù)規(guī)程

TechnicalRegulationforProductionofCastaneamollissima-Tuberindicum

MycorrhizalSeedlings

2022-06-23發(fā)布2022-10-01實(shí)施

貴州省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB52/T1677—2022

板栗印度塊菌菌根苗培育技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了板栗印度塊菌菌根苗培育、接種前準(zhǔn)備、接種、接種后管理、病害防治、檢驗(yàn)與判斷、

質(zhì)量等要求。

本文件適用于板栗印度塊菌菌根苗的培育及檢驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

DB52/T294-2007主要造林樹種苗木質(zhì)量等級(jí)

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

板栗castaneamollissima

在植物分類學(xué)上隸屬于雙子葉植物綱（DDicotyledoneae）山毛櫸目（Fagales）殼斗科（Fagaceae）

栗屬（Castanea）落葉喬木或灌木，成熟果實(shí)實(shí)兩側(cè)為平面形，或內(nèi)側(cè)平面性、外側(cè)為半圓形，或呈近圓

形，果皮紅褐色、灰褐色至深褐色，長(zhǎng)1.8cm～3.5cm，寬1.0cm～2.5cm，高1.5cm～3cm。果實(shí)營(yíng)養(yǎng)

豐富，是我國(guó)記載最早的著名食用堅(jiān)果之一。板栗作為塊菌的共生宿主，根部形成菌根。

3.2

印度塊菌tuberindicum

真菌分類學(xué)中隸屬于子囊菌門(Ascomyycota)塊菌目(Tubrales)塊菌科(Tuberaceae)塊菌屬(Tuber)，子

實(shí)體生于地表下，球形、近球形、橢圓形或不不規(guī)則性塊狀，幼時(shí)紫紅褐色，成熟后紫褐色、黑褐色或黑

色；表面有明顯的金字塔形或多角形尖頂瘤突；產(chǎn)孢組織幼時(shí)白色或灰白色，隨著成熟逐漸變?yōu)辄S褐色、

褐色、黑褐色或黑色，由無(wú)色薄壁的交織菌絲組成；有白色、分枝、迷路狀細(xì)菌脈。子囊球形、橢圓形

或不規(guī)則形，無(wú)色，常無(wú)柄；子囊孢子14.3um~45um×12um~40um，深褐色，卵圓形、長(zhǎng)橢圓形，表

面有離散的刺。子實(shí)體成熟時(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，有特殊芳香氣味，與宿主共生。

3.3

宿主host

為菌根真菌提供依附和形成共生關(guān)系的植物體。

1

DB52/T1677—2022

3.4

外生菌根ectomycorrhizae

菌根真菌菌絲體侵染宿主植物尚未木栓化的營(yíng)養(yǎng)根，并且菌根真菌菌絲體僅在植植物根的皮層細(xì)胞壁

之間延伸生長(zhǎng)并不穿透到細(xì)胞內(nèi)部，而形成的一種共生結(jié)構(gòu)。主要特征是菌絲在植物物營(yíng)養(yǎng)幼根表面形成

菌套(mantle)，同時(shí)侵入到根的皮層組織細(xì)胞間形成哈氏網(wǎng)(Hartignet)。

3.5

菌根性食用菌ediblemycorrhizalfungi

外生菌根真菌與植物根系建立共生關(guān)系后，能產(chǎn)生人類可食用的子實(shí)體的大型真菌的統(tǒng)稱。

3.6

無(wú)外生菌根菌幼苗ectomycorrhizal-freeseedling

相對(duì)于全無(wú)菌潔凈空間而言，在包含空間、容器、基質(zhì)、樹種、水等在內(nèi)的必須條件中沒(méi)有能與宿

主樹種形成共生關(guān)系的大型真菌孢子（菌種）的育苗環(huán)境里，培育出的根系沒(méi)有共生菌根的幼苗。

3.7

孢種液sporefluid

指用成熟塊菌子實(shí)體組織研磨得到的孢子懸浮液。

3.8

菌根苗mycorrhizalseedling

塊菌與板栗共培育形成的菌根苗。

3.9

單株菌根率mycorrhizalrateperplant

單株菌根苗中，培育形成的菌根量占菌根苗全部根系的百分比。

3.10

煉苗hardening-seedling

在專用溫室（棚）培育的菌根苗木，先采取適當(dāng)控溫、控水措施，再將幼苗移移至室外，對(duì)幼苗強(qiáng)行

鍛煉，提高其抗逆性，使其適應(yīng)野外環(huán)境條件，刺激菌根活力，縮短緩苗時(shí)間的過(guò)程。

4培育無(wú)外生菌根菌幼苗

4.1種子保存

4.1.1印度塊菌菌種保存：成熟的印度塊菌子實(shí)體。

4.1.2帶濕潤(rùn)泥土或洗凈泥沙晾至子實(shí)體表面無(wú)水漬裝入自封袋，用手排除空氣或抽真空后置于

0℃～6℃低溫保存≤30d。

2

DB52/T1677—2022

4.1.3板栗種子保存：選擇新鮮、成熟、飽滿，無(wú)蟲蛀板栗。

4.1.4無(wú)菌水清洗后用濃度為5‰的高錳酸鉀溶液浸泡種子10min，進(jìn)行表面消毒，采用滅菌沙，一

層種子覆一層沙進(jìn)行層積貯儲(chǔ)。

4.2育苗設(shè)施

在專用育苗溫室或大棚培育菌根苗，育育苗室（棚）門、窗應(yīng)具有防蟲網(wǎng)，有頂窗通風(fēng)條件；育苗室

（棚）外頂應(yīng)有可開關(guān)的遮光率≥80%的遮陽(yáng)網(wǎng)，內(nèi)應(yīng)有可開關(guān)的保溫膜；有空中噴灌設(shè)施，噴頭距育

苗床床面150cm～180cm；育苗床床面距地面≥60cm高。

4.3基質(zhì)準(zhǔn)備

育苗基質(zhì)草炭：珍珠巖：河沙（或山砂）按體積比6:3:1混合，加入無(wú)菌水拌均勻，含水率25%～30%，

裝袋，在121℃、110kPa的高溫高壓下滅菌2h后冷卻到室溫待用。

4.4育苗盤及盆缽消毒

用5‰高錳酸鉀溶液浸泡2h，取出后用無(wú)菌水洗去浸泡液。

4.5種子消毒及播種

板栗種子用無(wú)菌水選法除去泥沙和霉?fàn)€種子后放入30%雙氧水中3min～5min或潔爾滅中30min～40

min消毒，撈起用無(wú)菌水洗凈藥液，播入消毒后盆缽或育苗盤中，表面覆土2cm～3cm，用無(wú)菌水澆灌。

4.6培育無(wú)外生菌根菌幼苗

播種后的容器置于溫室（棚）中培育60d～150d，幼苗長(zhǎng)至3片～5片真葉，主根系長(zhǎng)度≥5cm或擁

有3條～5條側(cè)根，無(wú)外生菌根菌幼苗達(dá)到接種要求。

5接種前準(zhǔn)備

5.1制種用塊菌子實(shí)體消毒

印度塊菌成熟子實(shí)體于常溫室內(nèi)，洗凈表面，置于75％酒精中3s～5s,用濾紙吸干表面的酒精，

用無(wú)菌小刀削去子實(shí)體表皮，切成約1cm×1cm小方塊。

5.2配制孢種原液

攪拌機(jī)用75%酒精擦拭后，用無(wú)菌水沖洗，反復(fù)3次，每次稱取切成小塊的子實(shí)體65g放入準(zhǔn)備好的

攪拌機(jī)，加入無(wú)菌水400mL～500mL，攪拌機(jī)8000rpm/min～19000rpm/min粉碎10s～30s，加入無(wú)菌

水配制成濃度為10%的孢種原液，裝入已滅菌的瓶中密封，宜隨制隨用或容器密封置于0℃～4℃低溫

保存，5d內(nèi)用完。

5.3配制接種基質(zhì)

將準(zhǔn)備好的基質(zhì)加入無(wú)菌水拌均勻，用石灰或Ca(OH)2將pH值調(diào)到pH6.5～pH7.5，含水率25%～30%。

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6接種

6.1配制接種用孢種液

將制備的10%孢種原液用冷卻無(wú)菌水稀釋到1%～3%，pH值調(diào)到pH6.5～pH7.5,置于敞口容器。

6.2接種

板栗無(wú)外生菌根菌幼苗根部置于稀釋的孢種液中沒(méi)過(guò)莖基部，浸泡15min～25min；配制好的基質(zhì)

裝入底徑≥8.5cm、口徑≥10cm、高度≥18cm容器，基質(zhì)總量占容器的1/2～2/3，孢種液浸根的苗木

植于容器中，覆土，土層距容器口2cm～3cm，定根水澆無(wú)菌水，置于育苗溫室內(nèi)培養(yǎng)。

7接種后管理

7.1水

培養(yǎng)初期應(yīng)用無(wú)菌水澆灌，保持基質(zhì)濕潤(rùn)，基質(zhì)濕度最適25%～28%；接種培養(yǎng)30d～70d隨機(jī)抽檢，

目測(cè)有菌根形成,澆灌的水即可換為潔凈自來(lái)水至棚外煉苗。

7.2溫度

室內(nèi)溫度最適20℃～25℃，夏季控溫≤32℃；冬季控溫≥1℃。

7.3濕度

室內(nèi)相對(duì)濕度最適60%～70%。

8病蟲害防治

菌根苗初發(fā)白粉病時(shí)，用0.5mol/L濃度石灰水噴灑有病植株或移除病株。

9檢驗(yàn)

9.1抽樣

9.1.1采取隨機(jī)抽樣方法，用DB52/T294-200074.1.2方法，按表1規(guī)則抽樣。

表1苗木檢測(cè)抽樣數(shù)量

苗木株數(shù)檢測(cè)株數(shù)

500～100050

1001～10000100

10001～50000250

50001～100000350

100001～500000500

500001及以上750

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DB52/T1677—2022

9.2抽檢時(shí)間

9.2.1第一次抽檢：苗木接種后30d～60d開始進(jìn)行檢查，感染其他雜菌應(yīng)立即移除。

9.2.2第二次抽檢：接種后120d～180d，檢驗(yàn)菌根量的多少，菌根率＜40%或無(wú)菌根的應(yīng)在第二年2

月～4月或7月～8月兩個(gè)時(shí)間段進(jìn)行第二次接種。

9.2.3第三次抽檢：定植前的抽檢，檢驗(yàn)菌根發(fā)育情況，菌根發(fā)育良好，菌根率≥40%的菌根苗可野外

移栽定植。

9.3檢測(cè)方法與判斷

9.3.1隨機(jī)抽檢：育苗期間不定期隨機(jī)抽檢，目測(cè)帶土苗木生長(zhǎng)到基質(zhì)表面的根部，有菌根時(shí)，再用

≥20倍手持放大鏡觀察菌根的發(fā)育形態(tài)正常、無(wú)污染，放回容器繼續(xù)培育；無(wú)菌根形成或菌根量少補(bǔ)

接孢種，污染的則移除、廢棄。

9.3.2鏡檢：每隔30d～60d隨機(jī)抽取菌根苗，取菌根切片顯微鏡檢測(cè)菌根，切片應(yīng)具有塊菌菌根的形

態(tài)結(jié)構(gòu)。

9.3.3分子檢測(cè)：剪切鏡檢合格菌根苗的菌根，進(jìn)行DNA檢測(cè)，序列比對(duì)，有污染和非塊菌菌根的移

除、廢棄。

9.3.4菌根率計(jì)算：菌根苗接種12個(gè)月后煉苗，煉苗期間采用隨機(jī)區(qū)組計(jì)數(shù)法計(jì)算菌根率。計(jì)算方法

如下：

a)制作計(jì)數(shù)板：計(jì)數(shù)板上的小方格，隨機(jī)選1/4染深顏色，

b)