第2節動物細胞工程二動物細胞融合技術與單克隆抗體【本節聚焦】1.什么是動物細胞融合技術？2.單克隆抗體是如何制備的？

在臨床上有哪些應用？[課前5分鐘]P48-49，快速找答案。1.植物體細胞雜交PK動物細胞融合方法2.找幾個名詞：雜交瘤細胞、單克隆抗體、克隆化培養[活動1]結合右側實例，閱讀P48，回答以下問題。一、動物細胞融合技術1.什么是動物細胞融合技術(概念)？2.動物細胞融合的基本原理是什么？3.人工誘導動物細胞融合的方法有哪些？融合后細胞的類型及特點？4.動物細胞融合的意義是什么？5.動物細胞融合和植物體細胞雜交分別有哪些異同？6.動物細胞融合的應用有哪些？

使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。細胞膜具有一定的流動性方法：PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法等。融合操作后形成AB

AAABBB，雜交細胞具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息。滅活病毒誘導細胞融合的原理P48【相關信息】1.“滅活病毒”中滅活的具體含義是什么？2.滅活病毒誘導細胞融合的原理是什么？

用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結構。

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發生融合。【注意】1.植物原生質體融合無滅活病毒誘導。2.動物細胞融合實質及完成的標志：細胞核融合4.動物細胞融合的意義是什么？突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。

至今，種間、屬間、科間，甚至動植物之間融合都已獲得了成功。生物種類細胞來源成功年代酵母菌—雞原生質體—血紅細胞1975年人—胡蘿卜腹水癌細胞—原生質體1976年人—小鼠纖維肉瘤細胞——畸胎瘤細胞1978年生物種間雜交想像圖5.動物細胞融合和植物體細胞雜交分別有哪些異同？植物體細胞雜交動物細胞融合原理處理的細胞融合前處理的酶處理誘導融合方法結果融合成功標志意義細胞膜具有一定的流動性、植物細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性用果膠酶和纖維素酶去除細胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞電融合法、離心法；PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法不同來源的植物體細胞可同一個體甚至同一類型的細胞再生出細胞壁細胞核的融合雜種植株雜交細胞打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能6.動物細胞融合的應用有哪些？（1）細胞融合技術已經成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。（2）利用動物細胞融合技術發展起來的雜交瘤技術，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。練一練P51【練習與應用】一、概念檢測1.下列有關動物細胞融合與植物體細胞雜交比較的敘述，錯誤的是（）A.它們的原理都涉及細胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細胞D.前者主要為了獲得細胞產品，后者主要為了獲得雜種植株C【知識回顧

理論探討】1.什么細胞能產生抗體？漿細胞2.一個漿細胞能產生幾種抗體？1種【傳統抗體制備方法及缺陷】缺陷：產量低、純度低，且特異性差。[思考]如何解決傳統抗體制備存在的問題？二、單克隆抗體及其應用【一個大膽的猜想】一種B淋巴細胞（只產生一種特定抗體）能在體外大量增殖的骨髓瘤細胞動物細胞融合雜交瘤細胞動物細胞培養大量的特定抗體既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體由于發明了單克隆抗體的制備技術，米爾斯坦和科勒于1984年獲得了諾貝爾生理學或醫學獎。[活動2]閱讀課本P49-50圖2-16，用文字和箭頭構建單克隆抗體制備的流程圖。（能產生專一抗體，但不能大量增殖）（能大量增殖，但不能產生專一抗體）（一）單克隆抗體的制備過程注射特定蛋白免疫小鼠培養小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞多種細胞融合一般選擇剛出生不久的小鼠（一）單克隆抗體的制備過程用特定的抗原對小鼠進行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產生特定抗體的B淋巴細胞。[思考]從脾中收集到的B細胞僅僅是漿細胞嗎？不是，有B細胞、漿細胞和記憶B細胞。需要的是漿細胞PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法瘤-瘤瘤-B瘤-B瘤-BB-B用特定的選擇培養基進行篩選：在該培養基上，未融合的親本細胞合融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。第一次篩選目的：得到雜交瘤細胞階段1：融合（一）單克隆抗體的制備過程多種細胞選擇培養基篩選雜交瘤細胞克隆化培養專一抗體檢測能分泌所需抗體的雜交瘤細胞階段2：篩選第一次篩選第二次篩選對上述經選擇培養的雜交瘤細胞進行克隆化培養和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足夠數量的能分泌所需抗體的細胞。第二次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞。用96孔板(單細胞培養板)培養和篩選雜交瘤細胞（每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞）（一）單克隆抗體的制備過程能分泌所需抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內增殖體外培養單克隆抗體從小鼠腹腔中提取從培養液中提取將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規模培養，或注射到小鼠腹腔內增殖。從細胞培養液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。階段3：培養特定的雜交瘤細胞【小結】單克隆抗體的制備過程（目的：獲得能產生相應抗體的B淋巴細胞）（方法：PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法）（目的：得到雜交瘤細胞）（目的：得到能產生所需抗體的雜交瘤細胞）雜交瘤細胞的特點：單克隆抗體的優點：既能迅速大量增殖，又能產生抗體特異性強、靈敏度高、可大量制備單克隆抗體制備的原理：細胞膜的流動性、細胞增殖練一練

請用箭頭把以下各步驟的字母按正確順序連接起來。練一練P51【練習與應用】一、概念檢測2.科學家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關敘述正確的是()A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養單個B淋巴細胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合，經誘導后融合的細胞即為雜交瘤細胞D.將純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內，從小鼠血清中分離出的抗體為單克隆抗體A【課后作業】1.完成《金版》P53-56頁。2.閱讀并完成P50【思考.討論】預習并嘗試掌握：

單克隆抗體的應用（二）單克隆抗體的應用（二）單克隆抗體的應用早早孕診斷（1）作為診斷試劑——最廣泛應用

妊娠早期孕婦產生的一種物質“人絨毛膜促性腺激素（HCG）”，針對該物質制備單克隆抗體。從孕婦血液中提取HCG，作為“特定的抗原”注入實驗動物體內……獲得抗人絨毛膜促性腺激素的單克隆抗體。（2）

用于運載藥物和治療疾病“單抗藥”：藥物+單克隆抗體，如ADC（抗體-藥物偶聯物）。抗體-藥物偶聯物（ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細胞毒素)三部分組成[討論1]ADC的抗體和藥物各具有什么作用？抗體：靶向運輸藥物藥物：發揮治療效應[討論2]除了細胞毒素，還有哪些物質理論上可以作為ADC偶聯的藥物？①可以用放射性同位素標記單克隆抗體進行靶向放療②一些作用于細胞信號轉導通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進