第1講

生物檢測技術

基本知識和基本技能黃雅琴

2基本內容6.實驗記錄與實驗報告5.試劑配制與保存1.人員防護(重點)2.安全用水、用電、用氣7.課堂總結3.實驗室廢液處理4.器材的清洗與使用3生物檢測涉及到生物化學技術、免疫學技術、分子生物學和細胞生物學等技術，這些技術大都用到很多有毒的、易爆的、高溫的及放射性的等化學試劑，而且操作過程也十分嚴格學習的必要性為了保證實驗過程中人身安全、儀器安全及實驗結果準確4

一、人員防護567一、人員防護1在實驗室工作時，任何時候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服。禁止在實驗室工作區域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。2在進行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。3在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區域前，都必須洗手。8一、人員防護4為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設備。5嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室，（如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛生間）。6不得在實驗室內穿露腳趾的鞋子。禁止在實驗室工作區域儲存食品和飲料。在實驗室內用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內。97、實驗時，皮膚如果被玻璃或利器割傷，先檢查傷口是否有玻璃碎片，若有玻璃碎片，需小心地拔出，然后用碘伏或生理鹽水消毒，貼上創可貼或進行包扎，傷口深的要接受醫生的檢查處理。8、發生燒燙傷，宜盡早進行，要以冷水沖洗15-30min或用冰塊冷敷，散熱止痛，傷處的衣褲襪之類應剪開取下，不可剝脫。在傷口上涂以碘伏，小面積可自行包扎，大面積盡快送至醫院。

一、人員防護10119、除了高溫以外，液氮、強酸、強堿、強氧化劑、苯酚等物質都會灼傷皮膚，應注意不要接觸，尤其防止濺入眼中。酸5%NaHCO3甘油堿大量水沖洗飽和硼酸或3%醋酸

大量水沖洗

酚用浸了甘油和酒精混合液（7：3）的棉花除去污物

一、人員防護飽和硫酸鈉溶液濕敷1210、如果有毒物濺入口中，而沒有下咽，應立即吐出，用大量清水沖洗口腔。如吞下毒物應立即送醫院。如吸入有毒氣體，應立即移至室外空氣新鮮的地方，解開衣領，不能進行人工呼吸。有毒試劑，如溴化乙錠，聚丙烯酰胺，具有致癌危險，要戴手套和口罩操作。

一、人員防護1311、實驗室的輻射，主要是紫外線、X射線、放射性同位素等。其中，紫外線常用于實驗室和超凈工作臺的滅菌，但人體長期反復接受紫外線照射，會導致皮膚灼傷，視力下降，甚至誘發皮膚癌和白內障。特別是8-15周齡的發育期嬰兒，受到了強輻射，會增加先天性畸形的概率。

一、人員防護1412、如果發生觸電，迅速切斷電源，如果觸電是由斷裂、掉下的電線或漏電的電器造成的,可以用干燥的物品,如木棒、扁擔等,把電線挑開,或把電器推開。切斷電源之前千萬不能用手去拉傷者,否則救護者自己也會觸電。切斷電源后,要一面通知醫生前來救治,一面立即查看觸電者的情況。在等待醫生到來的時間里,應進行胸外心臟按壓和口對口人工呼吸。心肺復蘇搶救要爭分奪秒,不能猶豫遲疑,不能坐等,也應避免不必要的搬運病人,在醫生到來之前就應開始搶救措施。

一、人員防護1516二、安全用水、用電、用氣

------------------用水1、實驗過程中注意蒸餾水和雙蒸水的制備過程及儲存，防止水被污染，同時保持儀器的正常運轉和安全。2、用水完畢關閉水龍頭。若實驗室停水，一定要關閉水龍頭。3、用水要遠離電源開關以及用電設備，以防漏電。17181、實驗室內的電氣設備的安裝和使用管理，必須符合安全用電管理規定。2、手上有水或潮濕，請勿接觸電器用品或設備，嚴禁使用水槽旁的電器插座，防止漏電或觸電。3、必須掌握實驗室的儀器，設備的性能和操作方法，嚴格按操作規程操作。設備用畢，一定要關閉電源開關，拔掉電源插座。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電194、電器插座請勿接太多插頭，以免電流負荷過大，引起火災。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電201、使用氣瓶時，嚴格按照說明書上的正確順序打開，開啟氣門時應站在氣壓表的一側，不能對準總閥，以防閥門沖出，使用完畢，按順序關閉閥門。2、氣瓶內氣體不可用盡，以防倒灌。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電213、高壓滅菌鍋使用注意事項：⊙應由受過良好培訓的人員負責高壓滅菌器的操作和日常維護。⊙每次使用前，檢查水位，加入蒸餾水到正常水位線。⊙在打開蓋子前，確認壓力已歸于“0/npa”以下。⊙所有要高壓滅菌的物品都應放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中；滅菌器柜腔裝載要松散，以便蒸汽可以均勻作用于裝載物。⊙高壓滅菌液體時，由于取出液體時可能因過熱而沸騰，一定要選擇慢排氣，且要小心，以防被燙傷。⊙應當注意保證高壓滅菌器的安全閥沒有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電22三、實驗室廢液處理化學性污染生物性污染放射性污染：同位素標記探針有機物污染無機物污染：強酸、強堿的污染，重金屬污染，氰化物污染等。其中汞、砷、鉛、鎘、鉻等重金屬的毒性不僅強，且有在人體中有蓄積性。有機試劑污染：有機溶劑有機樣品污染：如農藥、黃曲霉毒素、亞硝胺等。生物廢棄物污染：檢驗實驗室的標本，如血液、尿、糞便、痰液和嘔吐物等；檢驗用品，如實驗器材、細菌培養基和細菌陽性標本等。生物細菌毒素污染：生物實驗室的通風設備設計不完善或實驗過程個人安全保護漏洞，會使生物細菌毒素擴散傳播，帶來污染，甚至帶來嚴重不良后果。23化學類廢物：一般的有毒氣體可通過通風櫥或通風管道，經空氣稀釋排出。大量的有毒氣體必須通過與氧充分燃燒或吸收處理后才能排放。

廢液應根據其化學特性選擇合適的容器和存放地點，通過密閉容器存放，不可混合貯存，容器標簽必須標明廢物種類、貯存時間，定期處理。一般廢液可通過酸堿中和、混凝沉淀、次氯酸鈉氧化處理后排放，有機溶劑廢液應根據性質進行回收。三、實驗室廢液處理24生物類廢物：液體廢物一般可加漂白粉進行氯化消毒處理。固體可燃性廢物分類收集、處理、一律及時焚燒。固體非可燃性廢物分類收集，可加漂白粉進行氯化消毒處理。滿足消毒條件后作最終處置。

1.一次性使用的制品如手套、帽子、工作物、口罩等使用后放入污物袋內集中燒毀。

2.可重復利用的玻璃器材如玻片、吸管、玻瓶等可以用1000-3000mg/L有效氯溶液浸泡2-6h．然后清洗重新使用，或者廢棄。

3.盛標本的玻璃、塑料、搪瓷容器可煮沸15min.或者用1000mg/L有效氯漂白粉澄清液浸泡2-6h，消毒后用洗滌劑及流水刷洗、瀝干；用于微生物培養的，用壓力蒸汽滅菌壓力滅菌30min，趁熱將瓊脂倒棄處理。

5.尿、唾液、血液等生物樣品，加漂白粉攪拌后作用2-4h，倒入化糞池或廁所。或者進行焚燒處理。三、實驗室廢液處理25放射性廢棄物：

一般實驗室的放射性廢棄物為中低水平放射性廢棄物，將實驗過程中產生的放射性廢物收集在專門的污物桶內，桶的外部標明醒目的標志半衰期短(如：碘131、磷32等)的廢棄物，用專門的容器密閉后，放置于專門的貯存室，放置十個半衰期后排放或者焚燒處理。半衰期較長(如：鐵59、鈷60等)的廢棄物，液體可用蒸發、離子交換、混凝劑共沉淀等方法濃縮，裝入容器集中埋于放射性廢物坑內。三、實驗室廢液處理26四、器材的清洗與使用1清洗①玻璃器材：初次使用：新的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質，可先用肥皂水洗刷再用自來水洗凈，然后浸泡在1%-2%鹽酸溶液中過夜（不少于4h），再用自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗3次，在烘箱內烘干備用。已使用過：先用自來水洗刷附著的試劑、蛋白質等物質，再選用大小合適的毛刷蘸取洗衣粉，將器材內外（特別是內壁）細心刷洗，用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗3次，烘箱內烘干備用。需要滅菌的器材，用牛皮紙或報紙包裝好，于121℃高壓蒸汽滅菌21min，取出于烘箱內烘干備用。27②塑料器材：多為一次性使用的，也有反復使用的。自來水浸泡沖洗→晾干→3%HCl或2%NaOH溶液浸泡過夜→自來水沖洗→雙蒸水沖洗3次→晾干→紫外線照射滅菌四、器材的清洗與使用28四、器材的清洗與使用③橡皮器材：自來水浸泡沖洗→洗衣粉加熱煮沸10min→蒸餾水煮沸2次（每次15min）→單蒸水沖洗3次→晾干→紫外線照射滅菌29四、器材的清洗與使用④金屬器材：

用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗3次，烘干后用牛皮紙或報紙包裝好，于121℃高壓蒸汽滅菌21min，取出于烘箱內烘干備用。

常見的有：接種針，鑷子，解剖刀等30四、器材的清洗與使用2、使用常見的有：量筒、燒杯、試管、容量瓶、培養皿、移液管、移液器、干燥箱、離心機、天平、酶標儀、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、電泳儀、PCR儀、光學顯微鏡等。31觀看視頻學習移液器的使用四、器材的清洗與使用32五、試劑配制與保存1、稱量

固體試劑用玻璃紙，在托盤天平和電子天平上稱取。

液體試劑或母液根據需求量的大小，用移液器、移液管或量筒量取。觀看視頻學習電子天平的使用33五、試劑配制與保存2、配制試劑配制中的溶劑一般為蒸餾水，特殊試劑或非水為溶劑的試劑要注明清楚。蒸餾水的水質必須符合規定，無污染。將水加入試劑，用玻璃棒或磁力攪拌，耐高溫穩定的試劑也可以加熱助溶。343、滅菌一般的化學試劑、培養基或其它試劑，要用高壓滅菌鍋濕熱滅菌20-30min。活性物質，如酶液、細胞培養液、維生素及抗生素等的配制需要通過在超凈臺上過濾滅菌。五、試劑配制與保存354、試劑的保管①所有藥品都有明顯標簽，標明藥品名稱、質量規格及配制日期；最好還有危險性質的明顯標志。標簽日久會受腐蝕氣體損壞，甚至全部剝落，如果不及時換新標簽，就會變成無名物，有誤用的危險。注上生產日期或配制日期，對于易變質物可以正確判定應否銷毀。②分類存放，互相作用藥品不能混放，必須隔離存放。易燃物、易爆物及強氧化劑只能少量存放。③貯存室或藥柜必須保持整齊清潔。④經常檢查藥品瓶子或其他包裝完整情況，標簽是否完整，有無其他危險潛伏。⑤無名物、變質物要及時清理銷毀。⑥分子生物學試劑一般要低溫冰箱保存，必要時要冷凍保存，為了避免反復凍融，一般分裝成小管儲存。五、試劑配制與保存36危險藥物分類存放的原則及存放要求：①易揮發藥品：遠離熱源火源，于避光陰涼處保存，通風良好，不能裝滿。②腐蝕性液體：放于底下，以免不慎跌下，灑出發生燙傷事故。③發生有毒氣體或煙霧的藥品：存于通風櫥中，并在其中量取。④劇毒藥品：鎖上。⑤致癌藥品：有致癌藥品的明顯標志，鎖上。⑥互相作用的藥品：隔離存放。⑦特別保存的物品：金屬鈉、鉀等堿金屬，貯于煤油中。黃磷，貯于水中。吸潮物、易水解物，貯于干燥處，封口應嚴密。易氧化易分解物，存于陰涼暗處，用棕色瓶或瓶外包黑紙盛裝。但雙氧水不要用棕色瓶（有鐵質促使分解）裝，最好用塑膠瓶裝外包黑紙。⑧放射性物品未經幅射物質管理部門批準，不得存放使用！五、試劑配制與保存37六、實驗記錄與實驗報告實驗記錄：