第1章發酵工程第2節微生物的培養技術及應用第2節微生物的培養技術及應用難以用肉眼觀察的微小生物的統稱，包括細菌、真菌、病毒及一些原生生物等。衣藻本章中提及的微生物主要指用于發酵的細菌和真菌。微生物：大腸桿菌酵母菌毛霉草履蟲新冠病毒無細胞結構原核細胞真核細胞病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌體等DNA病毒微生物的類群細菌：藍細菌、大腸桿菌、乳酸菌等；放線菌：鏈霉菌等真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履蟲、變形蟲等課本P9傳統發酵技術以混合菌種進行發酵制作食品，并且利用的菌種很多是原材料中天然存在的微生物。

向經過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細菌，再經過發酵就可以制成酸奶。由于制作工藝并不復雜，一些人會在家里自制酸奶。自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導致腸胃不適的事例屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發酵物中呢？應該先對制作用具和原料進行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發酵條件，避免雜菌進入。防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養物是研究和應用微生物的前提，也是發酵工程的重要基礎。在實驗室培養微生物需要遵循下列要求：培養基的配制無菌技術微生物的純培養為人們需要的微生物提供合適的營養和環境條件；要確保其他微生物無法混入，并將需要的微生物分離出來。課本P9知識瀏覽1.培養基的概念、作用與基本類型。重要程度：難度：學習方法：理解誦背3.無菌技術——消毒與滅菌的區別以及各類型的適用范圍。重要程度：難度：學習方法：背誦2.培養基的營養構成與四個特殊實例。重要程度：難度：學習方法：理解誦背

培養基的配制一課本P91.培養基的概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。2.培養基的作用：用以

、

、

、

微生物或

其代謝物。培養分離鑒定保存積累加凝固劑（瓊脂）3.培養基的類型：液體培養基固體培養基特點不含凝固劑（如瓊脂）呈液體狀態呈固體狀態實驗室常用用途擴大培養、常用于工業生產常用于分離、計數、鑒定等

培養基的配制一課本P91.培養基的概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。2.培養基的作用：用以

、

、

、

微生物或

其代謝物。培養分離鑒定保存積累3.培養基的類型：a.液體培養基中加入瓊脂后制成的

是實驗室最常用的培養基之一。b.微生物在瓊脂固體培養基表面或內部生長，可以形成肉眼可見的

。瓊脂固體培養基菌落菌落：

培養基的配制一課本P91.培養基的概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。2.培養基的作用：用以

、

、

、

微生物或

其代謝物。培養分離鑒定保存積累3.培養基的類型：a.液體培養基中加入瓊脂后制成的

是實驗室最常用的培養基之一。b.微生物在瓊脂固體培養基表面或內部生長，可以形成肉眼可見的

。瓊脂固體培養基菌落菌落：2.特征：不同菌落的形狀、大小、顏色等不同。3.功能：菌落是鑒定菌種的重要依據。一個菌落就是一個種群1.概念：單個或少數同種菌體在固體培養基表面或內部大量繁殖，形成肉眼可見的子細胞群體。A：支原體的菌落

B：酵母菌的菌落

C：細菌的菌落

D：細菌和霉菌混雜的菌落

E：放線菌的菌落

F：霉菌的菌落劃分標準培養基種類特點用途物理性質化學成分用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業生產觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業生產培養基成分明確分類、鑒定在培養基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養、分離出特定微生物在培養基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養基液體培養基半固體培養基固體培養基天然培養基合成培養基鑒別培養基常見培養基類型

培養基的配制一課本P10（4）培養基的營養構成：各種培養基的配方不同，但一般都含有水、無機鹽、碳源和氮源等營養物質。培養基組成含量提供的主要營養牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機鹽H2O定容至1000mL水1000mL牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成牛肉膏和蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機氮等營養物質。一、培養基的配制組分含量提供的主要營養物質牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g碳源、氮源和維生素等NaCl5g無機鹽H2O定容至1000mL水▼1000mL牛肉膏蛋白胨培養基的營養結構稱取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000mL。▼

馬鈴薯瓊脂培養基的配方注：牛肉膏和蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機氮等營養物質。100g馬鈴薯中含有：水75-80g，蛋白質約2g，碳水化合物17-20g、

維生素、無機鹽等上述兩種培養基的營養構成有哪些相同點？又有哪些不同？都含有水、碳源、氮源、無機鹽和維生素等，其中馬鈴薯瓊脂培養基中主要由糖類提供碳源，蛋白質提供氮源；牛肉膏蛋白胨培養基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。

培養基的配制一課本P10一、培養基的配制4.培養基的營養構成：各種培養基的配方不同，但①一般都含有水、無機鹽、碳源和氮源等營養物質。碳源氮源水無機鹽無機碳源--CO2、CO32-、HCO3-有機碳源--葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自養微生物異養微生物無機氮源--N2、NH4＋、NO3-、NH3等（有機碳既是碳源又是異養微生物的能源物質。）有機氮源--蛋白胨、尿素、氨基酸等含C、H、O、N的有機物是異養型微生物的碳源、氮源、能源。--微生物生長和代謝必不可少的營養物質。--提供無機營養、調節酸堿平衡、

維持滲透壓。

培養基的配制一課本P10可以為硝化細菌提供能量不提供能量固氮微生物一、培養基的配制（1）為什么培養基需要氮源？思考：氮是微生物合成蛋白質、核酸等物質所必需的。（2）培養微生物時，培養基中是否必須有碳源和氮源？不一定。例如，培養自養型微生物時，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空氣中的二氧化碳；培養固氮微生物時，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空氣中的氮氣。微生物碳源氮源能源藍細菌CO2NH4＋、NO3-等光能硝化細菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機物N2有機物大腸桿菌糖類、蛋白質等有機物蛋白質等有機物自養微生物異養微生物

培養基的配制一課本P10（4）培養基的營養構成：①概念：（1）碳源②種類：凡是能提供碳元素的物質，統稱為碳源。無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-等含碳無機物。糖類、脂質、蛋白質、有機酸、石油等含碳有機物，常用：糖類，尤其是葡萄糖。③功能：主要用于構成細胞物質和一些代謝產物；有機碳既是碳源又是異養微生物的能源物質。自養微生物異養微生物

培養基的配制一課本P10（4）培養基的營養構成：【說明】含有C、H、O、N的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。①概念：（2）氮源②種類：③功能：凡是能提供氮元素的物質，統稱為氮源。主要用于合成蛋白質、核酸及含氮代謝產物等NH4＋、NO3-、NH3等牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等無機氮源：有機氮源：

培養基的配制一課本P10（4）培養基的營養構成：（3）水（4）無機鹽①良好的溶劑；②維持生物大分子結構的穩定。①提供無機營養；②調節pH；③維持滲透壓。微生物碳源氮源能源藍細菌CO2NH4＋、NO3-等光能硝化細菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機物N2有機物大腸桿菌糖類、蛋白質等有機物蛋白質等有機物幾種微生物的營養和能量來源分析用無碳培養基可以篩選培養什么微生物？

用無氮培養基可以篩選培養什么微生物？

自養微生物固氮微生物

培養基的配制一課本P10

培養基的配制一課本P104.培養基的營養構成：①各種培養基一般都含有

、

、

和

等營養物質。水碳源氮源無機鹽②培養基還需要滿足微生物生長對

、

以及

的需求。pH特殊營養物質O2培養乳酸桿菌時，需要在培養基中添加

；培養霉菌時，需要將培養基調至

；培養細菌時，需要將培養基調至

；培養厭氧微生物時，需要提供

的條件。維生素酸性中性或弱堿性無氧主要指生長因子：維生素、氨基酸、堿基等（4）培養基的營養構成：

培養基的配制一課本P10例題：根據所學知識回答下列問題:1.自養型微生物與異養型微生物培養基的主要差別在于

；自養型微生物所需的碳源來自

碳源，異養型微生物所需的碳源來自

碳源2.無機氮源不但能給自養型微生物提供

，也能作為

，例如NH3既作為硝化細菌的氮源，也作為能源（NH3氧化釋放的化學能）；3.含有C、H、O、N的有機物可作為

微生物的碳源、氮源、能源。碳源無機有機氮源能源物質異養型具體處理原理目的選擇培養基加入青霉素青霉素能抑制細菌生長，對真菌無作用不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮氣不加有機碳源自養型微生物能利用無機碳源鑒別培養基加入酚紅培養基尿素被分解產生氨，培養基呈堿性，酚紅指示劑變紅。加入剛果紅剛果紅與纖維素能形成紅色復合物，當纖維素被分解后，復合物就無法形成，培養基中會出現以菌落為中心的透明圈。分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養微生物鑒別分解尿素的細菌鑒別纖維素分解菌

對培養基的成分進行控制可以起到不同的作用：微生物種類繁多，培養條件也各不相同。下列關于微生物培養基的描述正確的是(

)A．同一物質不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量，氮源有些也能提供能量C．牛肉膏蛋白胨培養基是培養細菌、病毒等常用的培養基D．培養硝化細菌，可用無機碳源的培養基D該表為某培養基的配方，下列敘述錯誤的是()成分NaNO3KH2PO4MgSO4·7H2O(CH2O)蒸餾水青霉素含量3g1g0.5g30g定容至1000mL0.1萬單位A．根據物理性質劃分，該培養基屬于液體培養基B．根據用途劃分，該培養基屬于選擇培養基C．根據培養基的配方可知，該培養基培養的微生物的同化作用類型是異養型D．固體培養基中加入少量水即可形成液體培養基D無菌技術septictechnique獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10無菌技術除用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？無菌技術還能有效避免操作者被微生物感染。獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌消毒獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌烤箱火力全開烘烤幾小時獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌獲得純凈的微生物培養物的關鍵是。無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。防止雜菌污染

無菌技術二課本P10消毒滅菌使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表面或內部一部分微生物。使用強烈的理化方法殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。（芽孢—休眠體、孢子—繁殖體，都具有很高的抗性）1.對操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；2.將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。

無菌技術二課本P10芽孢：有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫作芽孢。

芽孢壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。孢子：細菌、原生動物、真菌和植物等產生的一種有繁殖或休眠作用的生殖細胞。能直接長成新個體。知識拓展

無菌技術二課本P10-11項目主要方法應用范圍消毒

例如對家庭餐具等生活用品的消毒。例如牛奶。可以殺死牛奶中的絕大多數微生物，并且不破壞牛奶的營養成分。化學藥劑消毒法：用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。紫外線消毒法：接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前可用紫外線照射30min，以殺死物體表面或空氣中的微生物。損傷細菌的DNA生物消毒法：指利用生物或其代謝物除去環境中的部分微生物的方法。例1：有的微生物能夠寄生于多種細菌體內，是細菌裂解，因此可以用他們來凈化污水、污泥。例2：利用嗜熱細菌繁殖時產生的熱量來殺滅病原微生物。嗜熱菌能夠在高溫下生長，例如在堆肥過程中，嗜熱菌的發育會使溫度升高，從而殺滅大多數病毒和除芽胞以外的病原菌。缺點：過程較緩慢，對某些微生物的殺滅效果不完全可靠，尤其對細菌芽孢通常無殺滅作用。課本P10

無菌技術二課本P11項目主要方法應用范圍消毒

巴氏消毒法

℃消毒30min或

℃處理15s或

℃處理10～15s

、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體煮沸消毒法100℃煮沸

min家庭餐具等生活用品紫外線消毒30W紫外燈照射

min(損傷細菌的DNA)化學藥物消毒

擦拭實驗者雙手水源牛奶63～6572～76

5～630體積分數為70%～75%的酒精氯氣接種室、接種箱或超凈工作臺80～85

項目主要方法應用范圍滅菌

無菌技術二課本P11濕熱滅菌法干熱滅菌法灼燒滅菌法高壓蒸汽滅菌鍋干熱滅菌箱接種環灼燒滅菌利用沸水、流通蒸汽、高壓蒸汽進行滅菌的方法。高壓蒸汽滅菌效果最好：160~170℃的熱空氣中，1~2h進行滅菌的方法耐高溫和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（如吸管、培養皿等）、金屬用具等。充分燃燒層（外焰）接種工具（接種環、涂布器等）、其他金屬工具及接種過程實驗室常用的高壓蒸汽滅菌鍋就是以水蒸氣為介質，在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min來滅菌的。項目主要方法應用范圍滅菌灼燒滅菌直接在酒精燈火焰的

層灼燒干熱滅菌干熱滅菌箱中，

℃的熱空氣中維持

。高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌)充分燃燒接種工具，如涂布器、接種環、接種針或其他金屬用具、試管口或瓶口等160～170

1～2h100kPa、121℃的條件下，維持15～30min培養基等耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金屬用具等

無菌技術二課本P11

思考1、培養基滅菌為什么采用高壓蒸汽滅菌而不采用干熱滅菌？

分析：干熱滅菌箱內的高溫會導致培養基的_________喪失，而高壓蒸汽鍋內的_________較大，不會導致培養基的_________散失。思考2、如何制備一瓶無菌水？

分析：對一瓶有菌水進行___________________處理。

思考3、某同學在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設定要求，而鍋內并沒有達到相應溫度，最可能的原因是？

分析：_____________________。思考4、某同學從高壓蒸汽滅菌鍋內拿出培養基后發現，培養基已經濺滿了錐形瓶的瓶壁，最可能的原因是？

分析：___________________________________________，就提前打開了高壓蒸汽鍋。思考5：用紫外線可以給接種室消毒，其原理是紫外線能___________________。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等_________，可以加強消毒效果。水分濕度水分高壓蒸汽滅菌未將鍋內冷空氣排盡高壓蒸汽鍋的壓力表讀數還未降至零損傷細菌的DNA消毒液隨堂訓練1.無菌技術的具體內容（1）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和_______。（2）將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行________。（3）實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與______________接觸。（4）為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在_______________并在

_______________附近進行。消毒滅菌周圍的物品酒精燈火焰超凈工作臺上2.以下物品所采用的滅菌或消毒方法依次是：

培養基:

培養皿:

接種環:實驗操作者的雙手:

實驗室:牛奶:

濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）干熱滅菌灼燒滅菌化學藥劑消毒（酒精）紫外線消毒巴氏消毒法課本P10(1)生物消毒法是指利用生物或其代謝物去除環境中的部分微生物的方法(

)(2)與消毒相比，滅菌對微生物的殺滅更徹底(

)(3)無菌操作的對象只要是沒有生物活性的材料(如培養基、接種環等)，都可采用干熱滅菌法進行滅菌(

)√√×培養基的滅菌一般采用濕熱滅菌法。1.關于消毒、滅菌的方法，下列描述錯誤的是（

）A.接種用的無菌操作臺要進行滅菌處理B.用巴氏消毒法處理牛奶是因為高溫易破壞牛奶的營養成分C.煮沸半小時后的涼開水中可能仍含有部分芽孢和孢子D.先噴灑消毒液，再用紫外線照射可增強消毒效果B2.生產、生活和科研實驗中常用到無菌技術。下列相關敘述不正確的是()A.腌制泡菜時，泡菜壇內缺氧、呈酸性的環境不利于雜菌生長B.實驗室中的玻璃涂布器、吸管、培養基等均可以用干熱滅菌法處理C.生活中用巴氏消毒法處理牛奶既可消毒，又基本不會破壞牛奶中的營養成分D.濕熱滅菌是一種利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進行滅菌的方法B√教材P10〔相關信息〕生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能夠寄生于多種細菌體內，使細菌裂解，因此可以用它們來凈化污水、污泥。3.(2023·山西陽泉高二期中)無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開。下列說法正確的是A.在100℃條件下煮沸5～6min屬于滅菌方法B.對接種室、涂布器、操作者的衣著和雙手只需要進行消毒處理C.培養基可借助高壓蒸汽滅菌鍋或干熱滅菌箱進行滅菌D.利用某些寄生于細菌體內的微生物裂解細菌來凈化污水屬于生物消毒法微生物的純培養Purecultivationofmicroorganisms

微生物的純培養三課本P11純培養物培養物純培養在微生物學中，將接種于培養基內，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養物獲得純培養物的過程由單一個體繁殖所獲得的微生物群體配制培養基滅菌接種分離培養

微生物的純培養三課本P12平板劃線法、稀釋涂布平板法(1)原理：微生物群分散或稀釋單個細胞單個菌落繁殖(2)獲得單菌落的方法：酵母菌的純培養(3)材料用具：酵母菌培養液提供接種用的酵母菌配制酵母菌固體培養基馬鈴薯葡萄糖（或蔗糖）蒸餾水瓊脂

微生物的純培養三課本P12(4)方法步驟：第

1步：制備培養基：配制培養基→滅菌→倒平板。去皮切塊加水(1000mL)加熱煮沸軟爛馬鈴薯紗布過濾加瓊脂（15～20g）酵母菌培養基加水定容(1000mL)馬鈴薯塊濾液加葡萄糖/蔗糖（20g）調pH

微生物的純培養三課本P12(4)方法步驟：a.培養基——高壓蒸汽滅菌轉移滅菌15~30min皮筋勒緊包牛皮紙放入高壓蒸汽滅菌鍋中（100kPa、121℃）酵母菌培養基錐形瓶加棉塞①避免因水蒸氣凝結而浸濕棉塞②避免再次污染第

1步：制備培養基：配制培養基→滅菌→倒平板。

微生物的純培養三課本P12(4)方法步驟：b.培養皿——干熱滅菌滅菌2h幾層牛皮紙包緊放入干熱滅菌箱（160～170℃）5～8套培養皿干熱滅菌箱第

1步：制備培養基：配制培養基→滅菌→倒平板。(4)方法步驟：

微生物的純培養三課本P12第

1步：制備培養基：配制培養基→滅菌→倒平板。(4)方法步驟：培養基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板。1拔出錐形瓶的棉塞。2將瓶口迅速通過火焰。3用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養基倒入培養皿（10～20mL），立即蓋上皿蓋。4等待培養基冷卻凝固后，將培養皿倒過來放置。①防止培養基水分過快蒸發。②防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。不能完全打開，以免雜菌污染培養基。溫度過高會燙手，溫度過低培養基會凝固。思考：⑤在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？不能。因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生。第

1步：制備培養基：配制培養基→滅菌→倒平板。

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：分離的方法平板劃線法

通過接種環在固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。經過數次劃線后培養，可以分離到單菌落。連續劃線法分區劃線法第

2步：接種和分離酵母菌

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：第

2步：接種和分離酵母菌平板劃線法的具體操作1將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環的金屬絲燒紅。2在火焰旁冷卻接種環。同時，拔出裝有酵母菌培養液的試管的棉塞。將試管口通過火焰。34在火焰附近用接種環蘸取一環菌液。防止溫度太高殺死菌種。避免接種環上可能存在的微生物污染培養基。

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：平板劃線法的具體操作5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。6

灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。7注意：劃線時不能劃破培養基表面第

2步：接種和分離酵母菌

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：平板劃線法的具體操作5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。6

灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。712345第

2步：接種和分離酵母菌

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：平板劃線法的具體操作5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。6

灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。712345第

2步：接種和分離酵母菌

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：平板劃線法的具體操作5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。6

灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。7第

2步：接種和分離酵母菌

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：平板劃線法的具體操作5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。6

灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。7使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。最后一次劃線已經將細菌稀釋成單個的細胞，如果與第一次劃線相連，則增加了細菌的數目，達不到純化的效果。第

2步：接種和分離酵母菌

微生物的純培養三課本P13灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結束后【問題探究】為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？殺死接種環上殘留的菌種，避免微生物污染環境和感染操作者殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端殺死接種環上原有微生物，防止外來雜菌污染培養基接種環共需灼燒幾次？6次

微生物的純培養三課本P13(4)方法步驟：

完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養箱中培養24~48h。在實驗室中，切不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境。警示對照：說明培養基是否被雜菌污染。第

3步：培養酵母菌

微生物的純培養三課本P13①在未接種的培養基表面是否有菌落生長？如果有，說明了什么？②在接種酵母菌的培養基上，如果你觀察到了不同形態的菌落，可能是由哪些原因引起的？如果有，說明培養基被雜菌污染。如果觀察到了不同形態的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規范等原因引起的。（5）結果分析與評價：評估論點的可信程度

所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說法。“酵素”制作就是利用微生物進行無氧呼吸的原理，進行像制作泡菜一樣的發酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(包括一些簡單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(包括多種酶)、有機酸等成分，不存在它獨有的、特殊的營養物質，其中甚至可能含有微生物發酵產生的有毒物質，食用后可能會危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進消化和提高免疫力”的論點值得懷疑。有一段時間，水果“酵素”風靡各地，水果“酵素”制作的大致過程是：將洗凈、切成塊狀的水果，放入潔凈的容器，再加入糖和水，密封，置于陰涼處發酵一至兩周。有人說，吃水果“酵素”可以美容、減肥、促進消化和提高免疫力。請評估這一論點是否可信。1.微生物的純培養既需要適宜的培養基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關表述是否正確。（1）培養基中的營養物質濃度越高，對微生物的生長越有利。（）

（2）消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。（）（3）微生物的純培養物就是不含有代謝廢物的微生物培養物。（）

×√×一、概念檢測練習與應用2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？

日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低溫儲存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通過食鹽、糖等制造高滲環境，從而抑制微生物的生長和繁殖；低溫則是通過降低微生物的代謝速率來抑制微生物的生長和繁殖。一、概念檢測練習與應用1.某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的培養基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養基上輕輕按一下。將這兩個培養皿放入37℃恒溫培養箱中培養24h后，發現貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少。請分析回答下列問題。(1)這個實驗中需要進行滅菌處理的材料用具有？培養皿和培養基(2)“將指尖在培養基上輕輕按一下”相當于微生物培養中的哪一步操作？接種二、拓展應用練習與應用1.某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的培養基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養基上輕輕按一下。將這兩個培養皿放入37℃恒溫培養箱中培養24h后，發現貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少。請分析回答下列問題。二、拓展應用練習與應用(3)從實驗結果來看,洗手后我們就能進行無菌操作了嗎？操作時，我們可以采用什么方法來避免手上微生物的污染？通過實驗結果可以看到，洗手后手上還有一些微生物，不能直接進行無菌操作。可以通過用酒精棉球擦拭雙手，或戴消過毒的手套等方法來避免手上微生物的污染。二、拓展應用練習與應用2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養，搖床轉速分別為210r/min，230r/min和250r/min。培養時間與酵母菌種群密度的關系如下圖所示。請分析回答下列問題。(1)搖床轉速不同,意味著培養條件有什么不同？意味著培養液中02含量不同。搖床轉速越高，培養液中的溶氧量越多，促進酵母菌的有氧呼吸，還能增加酵母菌獲得營養物質的機會，有利于其生長繁殖。二、拓展應用練習與應用2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養，搖床轉速分別為210r/min，230r/min和250r/min。培養時間與酵母菌種群密度的關系如下圖所示。請分析回答下列問題。(2)從圖中數據你可以得出什么結論?其原因是什么？培養液中02含量越高,酵母菌種群密度越大。(3)為什么培養8h后，其中2個錐形瓶中酵母菌的種群密度基本達到穩定?這時候已經達到了環境容納量（K值）。培養液中的溶氧量和營養物質都有限(1)只有平板劃線法接種培養后可獲得單菌落(

)×獲得單菌落的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)每次劃線都要從上一次劃線的起始端開始(

)×在第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。(3)經培養后，只有在最后一次劃線上才會出現單菌落(

)×經培養后，在稀釋度高的區域都會出現單菌落，不一定只有在最后一次劃線上才會出現單菌落。跟蹤訓練5.(2023·海南三沙高二期末)下列有關微生物的分離與培養的敘述，錯誤的是A.獲得純凈培養物的關鍵是防止雜菌污染B.倒置平板可防止培養皿皿蓋上的冷凝水落入培養基C.倒平板時將培養皿的皿蓋拿開，以便于將錐形瓶中的培養基倒入培養皿D.檢驗培養基是否被雜菌污染的最有效方法是將未接種的培養基放在恒

溫培養箱中培養√倒平板時用食指和拇指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養基倒入培養皿，立即蓋上皿蓋，C錯誤。跟蹤訓練6.在分離、純化細菌的實驗中，劃線接種(甲)、培養結果(乙)如圖，a、b、c、d是劃線的四個區域。下列敘述錯誤的是