Nanotechnology—Testmethodformorphologyandsizeofexosomes—Ato1本任務來源于國家標準化管理委員會標準制定項目，項目編號20240660-T-491。遞重要的信號分子，形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統，影響細胞的生理狀態并物學功能以及分離、鑒定和應用等。其中，分離但是與其他眾多技術發展規律類似，細胞外囊泡力顯微鏡、酶聯免疫吸附測定、動態光散射、納米制品形貌、原子力顯微鏡亞納米高度測量校準，僅有一項涉及活細2生命科學的檢測技術標準仍具有一定挑戰性，可比性如何、量值是否統一等問題仍然亟待解決，迫切需要通過技術標準化來AFM的工作模式根據樣品和探針尖端之間的接觸填補檢測活體狀態下外泌體的形貌特征檢測的國家標準空白，本方法以液相為介質，采用AFM的輕敲模式，研究外泌體不破壞不收縮的測量方準確度，確保國家標準的先進性和實用性，促3工作組組織的項目共獲得國家、地方標準制修訂計劃原創性基礎研究和變革性產業技術，目標是建設世界級獻。廣泛開展國內外科技合作與交流，積極融入全球創新網絡，建設國際一流科研機構。國家納米科學中心現有3個中國科學院重點實驗室，分別是中國科學院納米生物效應與安國家納米中心另建有納米理論與人工智能實驗室、納米加工實驗室和納米智能傳感實驗室標準化技術委員會（SAC/TC279）、全國微細氣泡技術標準化國合格評定國家認可委員會（CNAS）科研實驗室專業委員會的掛靠單位授權點51個，覆蓋經濟學、法學、文學、416個教育部重點實驗室，1個前沿科學中心，1個省部共個農業部重點實驗室，1個自然資源部工程技術創新中影像工程、助產學等20個本科專業。獲批國家級一流本科專業建設點2個、省級一流本科創新實驗室、上海市智能醫療器械與主動健康協同創新中心等重點省部國納之星(上海)納米科技發展有限公司：又稱臨港新片區納米技術及應用科技創新平形式培育、孵化產業鏈相關環節的科技創新型企業中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所：是中國科學院在納米5納米所及中科院專家資源，以集聚創新資源、培米產業共性關鍵技術研發、技術服務、成果轉化和人才培養等蘇州賽賦新藥技術服務有限責任公司：是一家從事新藥非臨床研究技術服務的國際化等技術服務。下設醫藥研發咨詢、NMPA/FDA注冊申報、抗GLP資質、國家認監委CMA認證、美國A2LAISO15189認可、美國CAP認證、生物安全創新中心等榮譽稱號并擁有兩個博士后科研工618個；孵化了29家創新型企業，已有4家企業上市。研究院重點開展科為起點，專注系列分子影像設備的研制，至今已推出多款、全系列完全自主知識產權的核領先行業的穩定性與影像質量，持續為客戶創造價值。面對核醫學醫療資源分布不均衡的問題，提供全球化的創新醫療服務解決方案，讓患者受軍重點實驗室，61個全軍醫學研究所和專科中心。醫院是全軍唯一一所醫院辦學單位，承務平臺，擁有細胞制備中心、細胞質控檢測中心7），物醫藥創新和經濟發展提供科技支撐和智力支持。聯合產，相關新型生物制劑藥物的研發和生產，以及細胞分析儀、MERIEUX全自動微生物培善的細胞產品質量管理體系，成熟的干細胞、免疫細胞產品生推動科技成果轉移轉化應用，助力醫療器械和生物醫學工程合作的科技進步和創新發展。8深圳匯芯生物醫療科技有限公司：是由外泌體領域知名科學家和產業專家共同創立的體診斷和治療領域的關鍵瓶頸技術。匯芯生物2019年入圍中國創新創球第一款非標記自動化外泌體提純系統—EXODUS@，先后在國際知名期刊雜志Nature1展234567899相關標準物質/標準樣品/儀器校準物質等的使用，開展標準的起草工作。本文件起草中所依《表面化學分析原子力顯微術二硫化鉬片《活細胞樣品納米結構的磁驅動輕敲模式原子力顯微《表面化學分析術語第2部分掃描探針顯微術術語（Surfaprobemicroscopy）》《用于原子力顯微鏡檢測的脫氧核糖核酸樣品的制術納米顆粒尺寸測量原子力顯微術》、GB/T40128-2021表面化學分析硫化鉬片層材料厚度測量方法》、GB/T28872-2012《活細胞樣品納米結構的磁驅動輕敲模用于原子力顯微鏡檢測的脫氧核糖核酸樣品的制備方法》、GB/T32189-2015《氮化鎵單晶襯底表面粗糙度的原子力顯微鏡檢驗法》、GB/T31227-2014《原子力顯微鏡測量濺射薄膜0049-2024《人源間充質干細胞外泌體制備與檢驗規范》中的內容通過文中的規范性引用而分控制器（PID）控制器消除誤差信號，從而引起掃描測試儀器為原子力顯微鏡，可在x,y,z三個方向進行亞納米尺度測量，Z向分辨率優于1測試環境包括：測試環境溫度為20oC±5oC、相對濕度≤60%；檢測環境需避免直射強用220V±10V電源，用符合儀器要求的獨立地線（1Ω~3Ω)、供電電壓、驅動且穩定性良好；保持儀器系統、外圍電子計算機本文件對沉淀的修飾、外泌體溶液的處理及在襯底上的固定進行了用丙酮中超聲清洗10min，乙醇超聲清洗10min，氮氣吹干備用。如果沒有等離子清洗劑，可用下述清洗方法：將載玻片置于在體積比為6:1:1的去離子水:37%濃鹽酸:30%過氧化氫溶的比例混合均勻（如0.5mLPLL加入4.5mL去離子水充分混合將稀釋溶液存儲在2°C~8°C的冰箱中以備用；取PLL稀釋液置于載玻片表面；母解理后，將解理面覆蓋于PLL液滴上，放置3min。用鑷子加緊云母片，用超純水徹底清洗，氮氣吹干。放置于60℃烘箱中20置于10mL燒瓶底部，并將燒瓶放置于真空干燥器底部。解理后的云母放于燒瓶上部干燥約20min至APTES液滴消失。去除真空泵，使云母與APTES蒸汽充分接計算可得表面粗糙度Ra分別為0.098nm和0.074nm，表面云母片經修飾后仍然十分到適合的濃度，并混合均勻。需注意，外泌數不超過5次；稀釋后的外泌體溶液可置于4±1℃環境下放置2~10天；從冰箱中取出的外泌體稀釋液，使用前建議在室溫下放置20~30泌體溶液在云母襯底和玻片之間均勻鋪展，靜置5min，使外泌體牢固地分散吸附到云母表面。用鑷子夾起云母襯底，并用超純水徹底清洗表面，氮氣吹干后，采用AFM進行檢測。探針-樣品相互作用力可用球-平面的集合模型來描述，對于樣品表面粘附力較小的硬接觸，針尖曲率半徑等）直接影響力的測定。探針過硬可能造成樣品損傷，探針過軟會導致力學樣品表面，磨損微觀的結構形貌，針尖的形狀對于成像的效果也有一定影采用DNP-10、SNL-10和RTES稱形貌。表1所示，DNP-10與SNL-10為氮化硅探針，彈性系數低于1N/m，適合檢測采用AFM對間充質干細胞來源外泌體進行形貌與高度測定。外泌體的典型AFM成像及尺寸分析見圖4。PLL法與APTES法修飾的云母襯底干凈平整，外泌體均勻的分散在云母表面，彼此沒有團聚。獲取圖像中不同區域的100個外泌體進行統計，計算得出外泌體的尺寸附錄A提供臍帶來源間充質干細胞來源外泌體的形貌和尺寸測量實例，附錄B給出了外泌體測量結果不確定度評定方法，附錄C給出了典型Macromolecules,2009,231-27Science2020,367(6478)dhanD.C.,O,Drifextracellularvesicles(MISEV2023):Frombasictoadvancedapproaches.2SS123平均值x外泌體尺寸的實驗室內相對標準偏差為：3.84%～7.99%，實驗室間相對標準偏差為：標準偏差主要受外泌體尺寸和高度分布均勻性的影響，以及不同品牌原子力顯微鏡信現有國家標準中透射電鏡圖像法主要基于透射電子顯微鏡中電子束穿透樣品成像的原中，除透射電鏡法涉及生物樣品中納米顆粒的尺寸測量，其他方法均不涉及生物樣本。法對臍帶來源間充質干細胞外泌體的尺寸進行了測量，采用透射電鏡法測得外泌體尺寸為的膠體和生物組織中納米顆粒的粒徑和于液體中顆粒的布朗運動和光散射特性脈沖高度及脈沖和顆粒體積或顆粒直徑的相關性得到粒徑分布。適用于相干光譜測定顆粒粒徑范圍納米至1微米范圍或至顆粒開始沉降的粒徑的尺寸模式原子力原子力顯微鏡對活細胞的形本部分編制原則符合國家的有關法規法律，與推薦性國家標準協用的、外泌體應用方面的規范性管理文件，更好地滿足我國外泌體產品的開發本項目的測試樣品是細胞來源間充質干細胞外泌體。間充質干細胞由凍存干細胞復蘇