ICS67.050CCSX04RapidDetectionofBongkrekicAcidinFoods-ColloidalGoldImmunochromatographiIT/SATA082—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由華南農業大學提出。本文件由深圳市分析測試協會歸口。本文件起草單位：華南農業大學，深圳市計量質量檢測研究院，汕頭海關技術中心，廣東省食品檢驗所，廣州萬聯生物科技有限公司，深圳容金科技有限公司，嶺南現代農業科學與技術省實驗室河源分中心，廣州市食品檢驗所，廣州檢驗檢測認證集團，深圳市易瑞生物技術股份有限公司，廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司。本文件主要起草人：徐振林，張世偉，陸奕娜，雷紅濤，雷毅，江林峰，李斌，沈興，曹雪銘，吳會玲、王宇、錢振杰，劉海虹，張俊浩，陳子鍵，梁志森，王炳志，梁科，肖劍，鐘玉心。1T/SATA082—2024食品中米酵菌酸的快速檢測膠體金免疫層析法本文件規定了食品中米酵菌酸的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于谷物粉類制成品（發酵玉米面、糯玉米湯圓粉、涼粉、濕米粉、河粉、馬木耳及其制品和銀耳及其制品的快速定性測定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB7096－2014食品安全國家標準食用菌及其制品GB5009.189－2023食品安全國家標準食品中米酵菌酸的測定GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的米酵菌酸經提取后與膠體金標記的特異性抗體結合，抑制了抗體和試紙條中檢測線（T線）上抗原的結合，從而導致檢測線（T線）顏色深淺的變化。通過檢測線（T線）與質控線（C線）顏色深淺比較，對樣品中米酵菌酸進行定性分析。5試劑與材料除另有說明外，所有試劑均為分析純，實驗室用水應符合GB/T6682中二級水的要求。5.1試劑5.1.1氯化鈉（NaCl）。5.1.2十二水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。5.1.3二水合磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。5.1.4甲醇（CH3OH）。5.1.5乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。5.1.6稀釋液：稱取9g氯化鈉（4.1.1）、6g十二水合磷酸氫二鈉（4.1.2）、0.4g二水合磷酸二氫鈉（4.1.3），用容量瓶定容至100mL，搖勻備用。5.2參考物質米酵菌酸中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1，純度≥95%。表1參考物質信息表2T/SATA082—2024CHO注：或等同可溯源物質。5.3標準溶液配制5.3.1米酵菌酸標準儲備溶液（100μg/mL）：稱取米酵菌酸標準物質（4.3）1mg（精確至0.1mg置于10mL容量瓶中，再用甲醇（4.14）定容至10mL，搖勻，制成濃度為100μg/mL的米酵菌酸標準儲備溶液?；蚩芍苯淤徺I米酵菌酸標準儲備溶液。－18℃及以下條件避光保存，有效期6個月。5.3.2米酵菌酸標準中間溶液（10μg/mL量取1mL米酵菌酸標準儲備溶液（100μg/mL）（4.4.1置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.14）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10μg/mL的米酵菌酸標準中間溶液。2℃~8℃避光保存，有效期3個月。5.3.3米酵菌酸標準工作溶液（1μg/mL量取1mL米酵菌酸標準中間溶液（10μg/mL）（4.4.2置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.1.4）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1μg/mL的米酵菌酸標準工作溶液?，F配現用。5.4米酵菌酸試劑盒米酵菌酸膠體金快速檢測試劑盒，應在陰涼、干燥、避光條件下保存。5.4.1金標微孔（含膠體金標記的特異性抗體）。5.4.2試紙條或檢測卡。6儀器與設備6.1移液器：10μL、100μL、200μL、1mL、5mL。6.2電子天平：感量為0.1mg和0.1g。6.3渦旋振蕩器。6.4離心機：轉速≥4000r/min。6.5樣品濃縮儀。6.6膠體金讀數儀（可選）。7環境條件溫度15℃~35℃,相對濕度≤80%。8分析步驟8.1試樣制備銀耳、木耳需去蒂。將樣品用粉碎機充分粉碎后，準確稱取1g（精確至0.1g）樣品兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標記。留樣置于－20℃保存。將試樣放入15mL離心管中，加入3mL乙酸乙酯（4.1.5）提取液，渦旋或上下振蕩1min，室溫下4000r/min離心3min。靜置1min，取全部上層有機相，樣品濃縮儀50℃吹干，準確加入0.2mL磷酸鹽緩沖液（4.1.6）渦旋溶解殘渣，混合液即為待測液。注：試樣提取建議按照試劑盒說明書。8.2測定步驟8.2.1測試前，將未開封的檢測卡或試紙條恢復至室溫。8.2.2吸取待測液200μL加入金標微孔中，緩慢抽吸5次～10次至待測液與金標微孔試劑充分混勻，20℃~30℃反應3min。3T/SATA082—20248.2.3將試紙條插入到金標微孔中（或將金標微孔溶液滴加到檢測卡中），反應5min。8.2.4從金標微孔中取出試紙條（檢測卡直接結果判讀），進行結果判定。注2：結果判定可使用膠體金讀數儀，讀數儀的具體使用參8.3質控試驗8.3.1空白試驗：稱取空白試樣，按照7.1和7.2步驟與試樣同法操作。8.3.2加標質控試驗：準確稱取1g（精確至0.1g）空白試樣置于15mL離心管中，制備米酵菌酸濃度達到最低檢測限5μg/kg，按照7.1和7.2步驟與試樣同法操作。注：更換快檢試劑品牌、批次時，均應進行空白試驗和加標質控試驗。9結果判定通過對比控制線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結果判定，見圖1目視判定示意圖。注：也可使用膠體金讀數儀判讀，讀數儀的具體操作與判讀原則參照讀數儀的使用說明書。9.1陰性結果質控線（C線）顯色，檢測線（T線）顏色深于或等于質控線（C線），判定為陰性結果。9.2陽性結果質控線（C線）顯色，檢測線（T線）不顯色或顏色淺于質控線（C線），判定為陽性結果。9.3無效質控線（C線）不顯色，無論檢測線（T線）是否顯色，判定為無效結果。質控試驗結果不符合要求時，同批次所有檢測結果判定為無效結果。若出現無效結果，需對同批次樣品進行重新檢測。9.4質控試驗結果空白試驗測定結果應為陰性，加標質控試驗測定結果應為陽性。圖1目視判定示意圖（試紙條結果）注：T線為檢測線，C線為質控線。4T/SATA082—2024圖2目視判定示意圖（檢測卡結果）注：T線為檢測線，C線為質控線。10結果確認當檢測結果為陽性時，采用參比方法進行確證。11方法性能指標11.1檢出限檢出限：5μg/kg。11.2靈敏度靈敏度≥95%。11.3特異性特異性≥85%。11.4假陰性率假陰性率≤5%。11.5假陽性率假陽性率≤15%。注：性能指標計算方法見附錄A。本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不作限定。方法使用者在使用試劑、試劑盒或操作步驟之前，應對其進行考察，性能指標應滿足本方法規定的各項性能指標。本方法參比標準為GB5009.189－2023《食品安全國家標準食品中米酵菌酸的測定》第2法。5T/SATA082—2024快速