TB青島市食品科學技術學會發布I本文件的某些內容可能涉及專利。本標準的發布機構不承擔識別專利本文件的某些內容可能涉及專利。本標準的發布機構不承擔識別專利本文件起草單位：青島農業大學、山東得益乳業股份有限公司、青島市畜牧獸醫研究所本文件主要起草人：楊永新、欒慶剛、王建華、于忠娜、劉佳、陳明君、王義堅、范榮本文件規定了毛細管電泳技術測定牛乳及牛乳制品中A1和A2型β-酪蛋白方法。本文件適用于生牛乳、液態乳和乳粉中本文件適用于生牛乳、液態乳和乳粉中A1和A2β-酪蛋白含量的檢測。GB/T6682分析實驗室用水規格和氨基酸序列第67位氨基酸為組氨酸的β-3.2氨基酸序列第67位氨基酸為脯氨酸的β-丙基甲基纖維素酸性緩沖液中的遷移速率呈現差異?；贏1型和A2型β-酪蛋白在分離過程除非另有規定，所用試劑僅為分析純，5.1水：GB/T6682，二級。25.21mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4.00g氫氧化鈉，加水溶5.31mol/L鹽酸溶液：量取8.60mL濃鹽酸，加水稀釋，轉移至100mL容量瓶，定容。5.44mol/L磷酸溶液：量取24.60mL濃磷酸，加水稀釋，轉移至100mL容量瓶，定容。5.58mol/L尿素溶液：稱取96.10g尿素，加水溶解，轉移至200mL容量瓶，定容。5.6磷酸鹽溶液：磷酸鹽溶液（pH2.50±0.02稱取磷酸二氫鈉34.50mg、羥丙基甲基纖維素基纖維素12.50mg、量取尿素溶液（5.5）18.80mL，轉移至25mL容量瓶，用磷酸溶液（5.4）調節pH至2.50，定容。5.7樣品還原緩沖液（pH8.00±0.02稱取檸檬酸三鈉365.00mg、二硫蘇糖醇190.00mg、量取尿素溶液（5.5）187.50mL，溶解于水中，用氫氧化鈉溶液（5.2）調節pH至8.00，定容至250mL，混勻。5.8A1型和A2型β-酪蛋白標準儲備溶液（10mg/mL將A1型和A2型β-酪蛋白標準品按其純度換算后稱量，分別用樣品還原緩沖液（5.7）定容至10mL。于-20oC保存，有效期1個月。5.9A1型和A2型β-酪蛋白標準中間溶液（200mg/L）：分別準確移取A1型和A2型β-酪蛋白標準儲備溶液200μL，用樣品還原緩沖液（5.7）定容至10mL?，F用現配。5.10A1型和A2型β-酪蛋白標準系列溶液：準確移取一定量的標準中間溶液（5.9用樣品還原緩沖液（5.7）稀釋定容，分別配制成A1型和A2型β-酪蛋白濃度分別為0.0mg/L、40.0mg/L、80.0mg/L、120.0mg/L、160.0mg/L和200.0mg/L的標準工作溶液，現用現配。5.11微孔濾膜：水系，0.22μm。6.1毛細管電泳系統：配紫外或二極管陣列檢測器。6.2低溫離心機：4oC，轉速不低于10000r/min。6.3天平：精度0.01g、0.1mg。6.4pH計：精度為0.01。6.5渦旋混合儀。6.6超聲波震蕩器。37.1生牛乳、液態乳：取混合均勻的樣品約200g，裝入潔凈容器，密封并做好標識，于0oC～4oC保存。7.2乳粉：取有代表性樣品約200g，混勻，裝入潔凈容器，密封并做好標識，常溫下干燥保存。8.1提取8.1.1生牛乳、液態乳：平行做兩份試驗，取試樣2.00g到離心管中，5000g4℃離心20min，移除上層脂肪，取中間層脫脂乳與樣品還原緩沖液（5.7）按1:4混合，渦旋后500W超聲處理3min，室溫孵育1h，取上清液，過微孔濾膜。8.1.2乳粉：平行做兩份試驗，試樣與水以1：8比例復溶，5000g4℃離心20min，移除上層脂肪，取中間層脫脂乳與樣品還原緩沖液（5.7）按1:4混合，渦旋后500W超聲處理3min，室溫孵育1h，取上清液，過微孔濾膜。8.2電泳分析毛細管電泳參考條件如下：a）毛細管柱：未涂層熔融石英管柱，柱長60cm，有效長度50cm，柱內徑50μm；b）樣品室溫度：8oC；c）毛細管柱溫度：35oC；d）檢測波長：214nm；e）毛細管電泳分離程序，見表1。表1毛細管電泳分離程序項目參數進樣條件進樣電壓/psi進樣時間/s7分析條件分離電壓/kV25檢測時間/min根據A1型和A2型β-酪蛋白保留時間與待測樣品中組份的保留時間進行定性，A1型和A2型β-酪蛋白電泳圖見附錄A。4取標準系列溶液（5.10）和試樣溶液（8.1）上機測定。分別以A1型和A2型β-酪蛋白的峰面積為縱坐標，以標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得到標準曲線回歸方程。根據標準曲線得到試樣溶液中A1型和A2型β-酪蛋白的濃度。試樣中試樣中A1、A2型β-酪蛋白含量為Xi，以毫克每千克（mg/Ci——標準曲線查得試樣溶液中A1型或mi——試樣的質量，單位為克（g1000—換算系數；測定結果以平行試驗測定的算術平均值表示，保留兩位有效數字。在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不大于算術平均值的10%。本方法對生牛乳和液態乳中A1型β-酪蛋白檢出限為4.7mg/kg、定量限為15.7mg/kg，乳粉中A1型β-酪蛋白檢出限為6.8mg/kg、定量限為22.8mg/kg。本方法對生牛乳和液態乳中A2型β-酪蛋白檢出限為4.2mg/kg、定量限為13.8mg/kg，乳粉中A2型β-酪蛋白檢出限為4.9mg/kg、定量限為16.5mg/kg。5