T/CAS947—2024Specificationsfortheuseoforganoidsinchemicalt 2 2 2 4 7 9請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。物科技有限公司、北京實安科技有限公司、北京市眼科研究所、北京醫學檢驗學會、北京整合醫學技術有限公司、河北省食品檢驗研究院、黑玉星巖國際科學技術（北京）有限公司、洛陽華清天木生物科技有限公司、清華大學、清華大學深圳國際研究生院、山東第一醫科大學附屬省立醫院、蘇浙江霍德生物工程有限公司、中山大學孫逸仙紀念醫院、國軍標（北京）標準化技術研究院、通標本文件主要起草人：顧愛華、蔣兆彥、徐進、翁振坤、劉倩、周勇、楊楊、梁靜佳、邵文濤、趙鵬、胡佳、陳力群、聶國輝、黃衛人、張巖、楊菁喆、鄧博文、李娜、金子兵、穆紅、陳澤新、王恒、徐冰、吳春生、范靖、周一鳴、戴其全、王慶國、王類器官在化學品毒性測試中的應用規范下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用由干細胞或前體細胞體外培養形成，由組織器官特異性的多種細胞組成，具有特定組織器官關2a)DMEM/F12培養基、Neurobasal培養基、mTeSR1培養基、STEMdiffAPEL2培養基、小鼠肺類器官培養基、小鼠腸類器官培養基、小鼠肝類器官培養基；b)Matrigel基質膠、Vi）；g)磷酸鹽緩沖液（PBS）、紅細胞裂解液、DNAh)T25培養瓶（poly-HEMA包被）、96孔板（超低吸附）、細胞培養皿37.1.1.5置于37℃5%CO2細胞培養箱中的低速圓周搖床上搖動培養，每3d～5d半量換液，第7.1.2.1心臟類器官宜采用人誘導多能干細胞（hPSCs）構建5μMIWP-2、0.5μM視黃），7.1.3.1肺類器官宜采用小鼠肺組織構建，置min～60min。培養基混勻，4℃300g離心5min，棄上清；重復上述步驟2次，直至細胞沉淀變白。7.1.3.7按照2×107/mL7.1.4.1腸類器官宜采用小鼠腸組織構建，置7.1.4.3將腸段縱向切開，用預冷的PBS輕輕47.1.5.9按照2×107/mL7.1.6.1腎類器官宜采用人誘導7.1.6.324h后，更換STEMdi5個細胞轉移到transwell小室，并置于STEMdiffAPEL2培養基（含5μM），釋液（不少于3個梯度）。小心吸出培養皿中培養基（不要觸碰膠滴基（每個濃度梯度不少于3個平行樣）進行培養。根據類器b)參考附錄B的方法，檢測腦類器官標志物表達水1)神經元標志物，如微管相關蛋白2（2)膠質細胞標志物，如膠質纖維酸性蛋白（GFAP）和S100b。b)參考附錄B的方法，檢測心類器官標志物表達水）；b)參考附錄B的方法，檢測肺類器官分子標志物變化水平，包括：1)上皮標志物，如角蛋白14（Krt14）、上皮細胞粘附分b)參考附錄B的方法，檢測腸類器官分子標志物變化水平，包括：）；b)參考附錄B的方法，檢測肝類器官分子標志物變化水平，包括：6b)參考附錄B的方法，檢測腎類器官標志物表達水3)足細胞標志物，如突觸足蛋白（SYNPO）。7A.1儀器設備）；A.3試驗方法b)采用巴氏管上下吹打，使類器官和Matrigel基質膠分離；8）；c)采用TRIzol試劑盒提取d)采用逆轉錄試劑盒將提取的RNA逆轉錄成互補脫氧核糖核酸（cDNA（GAPDH）作為內參，2-ΔΔCt值反映標志物d)Hank's平衡鹽溶液（Hank'sbad)將腦類器官培養板放置在37℃5