水源水中微囊藻毒素測(cè)定上海市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布 I 1 13術(shù)語(yǔ)和定義 1 1 2 27試劑與材料 28儀器與設(shè)備 3 310測(cè)定條件 411測(cè)定步驟 512結(jié)果計(jì)算與數(shù)據(jù)處理 513精密度與準(zhǔn)確度 614質(zhì)量保證與質(zhì)量控制 715試驗(yàn)報(bào)告 7附錄A(資料性附錄)6種微囊藻毒素的色譜圖、特征離子圖 8附錄B(資料性附錄)方法的性能 10I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由上海市水務(wù)局提出并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由上海市水務(wù)局歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：上海城市水資源開(kāi)發(fā)利用國(guó)家工程中心有限公司、上海市供水調(diào)度監(jiān)測(cè)中心、上海市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心、上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院。1水源水中微囊藻毒素測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引測(cè)定結(jié)果與被測(cè)量真值或參考值間的一致程度。用回用特定分析方法在給定的置信度內(nèi)可從樣品中檢出待測(cè)物質(zhì)的最低2XY⑥?CH共R①③0④H0本方法采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水中6種微囊藻毒素。水樣經(jīng)過(guò)濾膜過(guò)濾后，采用液相色6.1試驗(yàn)應(yīng)滿足儀器對(duì)環(huán)境的要求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)控制環(huán)境溫度在15℃~25℃之間，濕度不高于80%。6.2常用化學(xué)危險(xiǎn)品貯存和處理的基本要求應(yīng)按照GB15603的規(guī)定執(zhí)行。7.5甲酸乙腈溶液(0.1%,體積分?jǐn)?shù)):量取1mL甲酸(7.3),與1L乙腈(7.2)混合均勻。7.6甲酸水溶液(0.1%,體積分?jǐn)?shù)):量取1mL甲酸(7.3),與1L水混合均勻。7.7甲醇水溶液(90%,體積分?jǐn)?shù)):量取900mL甲醇(7.1),與100mL水混合均勻。7.8甲醇水溶液(50%,體積分?jǐn)?shù)):量取500mL甲醇(7.1),溶解于500mL水中，混合均勻。的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃保存。7.10微囊藻毒素混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(1μg/mL):分別準(zhǔn)確移取1mL微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(7.9)3能當(dāng)天處理，水樣應(yīng)在4℃保存，膜樣應(yīng)在-20℃保存。樣品應(yīng)盡快測(cè)定。如不能立即測(cè)定，應(yīng)于-20℃保存，28天內(nèi)測(cè)定完畢。依次用10mL甲醇(7.1)、15mL水活化固相萃取小柱(7.13),流速控制在3mL/min~5mL/min。取1L濾后水樣(9.1),使水樣通過(guò)預(yù)先活化的固相萃取小柱進(jìn)行微囊藻毒素的富集，流速控制在4用5mL的90%甲醇水溶液(7.7)洗脫固相萃取小柱上的微囊藻毒素，重復(fù)上述洗脫1次，合并2次洗脫液在室溫下用氮吹濃縮儀(8.5)濃縮至0.5mL,以水定容至1mL。定容后的樣品經(jīng)針式微孔濾膜(7.12)過(guò)濾，置于液相樣品瓶(7.15),待測(cè)。處理后樣品應(yīng)盡快測(cè)定。如不能立即完成，應(yīng)于-20℃保存，28天內(nèi)測(cè)定完畢。將帶有藻細(xì)胞的膜樣(9.1)剪碎置于離心管(8.8)中，加入15mL的50%甲醇溶液(7.8)。用超聲細(xì)胞破碎儀(8.6)破碎細(xì)胞，功率為150W,時(shí)間為20min(破碎5s,間歇5s),超聲時(shí)需冰浴。超聲破碎后，取1mL萃取液經(jīng)針式微孔濾膜(7.12)過(guò)濾，置于液相樣品瓶(7.15),待測(cè)。處理后樣品應(yīng)盡快測(cè)定。如不能立即完成，應(yīng)于-20℃保存，28天內(nèi)測(cè)定完畢。——柱溫為30℃;——流動(dòng)相A為甲酸乙腈溶液(7.5),流動(dòng)相B為甲酸水溶液(7.6);采用梯度洗脫，洗脫程序見(jiàn)表2;時(shí)間/min流速/(mL/min)05——掃描模式采用正離子模式(ESI+);——干燥氣溫度為350℃;—干燥氣流速為10L/min;—毛細(xì)管電壓為4000V;—霧化器壓力為0.24MPa;6種微囊藻毒素的質(zhì)譜監(jiān)測(cè)離子與主要參數(shù)值見(jiàn)表3。按照12.1的定性分析和12.2的定量分析方法，計(jì)算得出樣品中微囊藻毒素根據(jù)化合物的保留時(shí)間、特征母離子和子離子對(duì)MC-LR、MC-YR、MC-RR、MC6次測(cè)定，以響應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算回歸方程。待測(cè)樣品中微囊藻毒素的質(zhì)量濃度應(yīng)在檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。200μL微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(7.10)于10mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液(7.8)定容至刻度，配制的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。12.2.1.3固相萃取富集方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：依次吸取0μL、2μL、5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(7.10)于1mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液(7.8)定容至刻200μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。根據(jù)樣品峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出相應(yīng)的質(zhì)量濃度。樣品中微囊藻毒素質(zhì)量濃度為p:(μg/L),按式(1)進(jìn)行計(jì)算：式中：pr——樣品中微囊藻毒素的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L);Pio——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測(cè)試液中的微囊藻毒素質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L);K——濃縮倍數(shù)。計(jì)算結(jié)果以微克每升(μg/L)表示，結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后2位有效數(shù)字。13精密度與準(zhǔn)確度按照本標(biāo)準(zhǔn)直接進(jìn)樣方法對(duì)微囊藻毒素加標(biāo)質(zhì)量濃度為1.00μg/L~10.0μg/L的水源水進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差MC-LR為1.50%～14.91%,MC-YR為2.55%～9.75%,MC-RR為0.52%～6.22%,MC-LA為1.43%～11.36%,MC-LF為1.68%～7.91%,MC-LY為0.82%～6.58%。按照本標(biāo)準(zhǔn)固相萃取法對(duì)加標(biāo)質(zhì)量濃度為25.0ng/L～100ng/L的水源水進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差MC-LR為1.20%～10.56%,MC-YR為1.40%～5.28%,MC-RR為0.51%～3.41%,MC-LA為0.58%～5.72%,MC-LF為0.45%～6.46%,MC-LY為0.65%～5.88%。按照本標(biāo)準(zhǔn)直接進(jìn)樣方法對(duì)微囊藻毒素加標(biāo)質(zhì)量濃度為1.00μg/L~10.0μg/L的水源水進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，平均回收率MC-LR為96.28%,MC-YR為100.14%,MC-RR為93.66%,MC-LA為94.49%,MC-LF為87.29%,MC-LY為95.25%。按照本標(biāo)準(zhǔn)固相萃取法對(duì)加標(biāo)質(zhì)量濃度為25.0ng/L～100ng/L的水源水進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，平均回收率MC-LR為105.00%,MC-YR為99.58%,MC-RR為65.04%,MC-LA為101.81%,MC-LF為81.96%,MC-LY為91.21%。具體精密度和準(zhǔn)確度參見(jiàn)附錄B。714質(zhì)量保證與質(zhì)量控制每20個(gè)樣品或每批次(每批少于20個(gè)樣品)樣品應(yīng)至少做一個(gè)純水或試劑空白，空白樣品中目標(biāo)化合物的濃度應(yīng)低于方法的檢出限。對(duì)同一樣品在相同條件下平行做兩份試驗(yàn)，檢驗(yàn)單項(xiàng)測(cè)定結(jié)果對(duì)平均值的偏離程度，反映批內(nèi)測(cè)定每20個(gè)樣品或每批次(每批少于20個(gè)樣品)樣品應(yīng)進(jìn)行不小于10%的平行試驗(yàn)。當(dāng)樣品測(cè)定結(jié)果不小于1μg/L時(shí)，平行雙樣測(cè)定相對(duì)偏差不得超過(guò)20%;當(dāng)樣品測(cè)定結(jié)果小于1μg/L時(shí)，平行試驗(yàn)相對(duì)偏差不得超過(guò)30%。測(cè)定已知濃度的質(zhì)控樣品，分析質(zhì)控樣測(cè)定結(jié)果與真值之間的差異，以確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性，檢驗(yàn)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度，采用相對(duì)誤差表示。每批次樣品測(cè)定時(shí)，至少同時(shí)測(cè)定一個(gè)質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣的配制濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間值附近，質(zhì)控樣測(cè)定結(jié)果與配制濃度相對(duì)誤差應(yīng)在允許的范圍內(nèi)。15試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告至少應(yīng)給出樣品性狀、所使用的標(biāo)準(zhǔn)、所使用的方法、結(jié)果、觀察到的異常現(xiàn)象及試驗(yàn)8(資料性附錄)6種微囊藻毒素的色譜圖、特征離子圖6種微囊藻毒素的色譜圖、特征離子圖見(jiàn)圖A.1～圖A.3。行……………MC-YR行……………MC-YR1.4-1.3-1.2-10.9-0.80.70.60.5-0.4-0.3-0.2-0.1-0.2040608112141618222242.6283323436384424446485525.45.6586圖A.1微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖(MC-RR質(zhì)量濃度5μg/L,其他物質(zhì)50μg/L)1.6-1.5-1.4-1.3- 0.90.80.74a204060811214161822224262833234363844244464855254565869圖A.3微囊藻毒素的特征離子圖(資料性附錄)方法的性能表B.1和表B.2給出了采用直接進(jìn)樣法、固相萃取富集法測(cè)定水源水中6種微囊藻毒素的精密度和準(zhǔn)確度的參考值。表B.3給出了直接進(jìn)樣法、固相