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文檔簡介
尿液其它化學(xué)成分檢驗徐文鑫省級精品在線開放課程《臨床檢驗基礎(chǔ)》尿化學(xué)成分檢驗PH蛋白質(zhì)葡萄糖酮體膽紅素尿膽原亞硝酸鹽血紅蛋白白細(xì)胞酯酶維生素C本周蛋白肌紅蛋白微量清蛋白含鐵血黃素HCG一、尿本周蛋白檢驗
本周蛋白尿(BJP)實質(zhì)為免疫球蛋白輕鏈或輕鏈的二聚體從尿中排出。其特性為將尿液在PH4.5~5.5,加熱至56度出現(xiàn)白色混濁及凝固,繼續(xù)加熱至90~100度后混濁消失或明顯減退,再冷卻至56度時又可重新凝固,又稱凝溶蛋白。蛋白電泳時可在α2~γ球蛋白區(qū)帶間的某個部位出現(xiàn)M區(qū)帶。一、尿本周蛋白檢驗1.檢驗方法及評價
熱沉淀反應(yīng)法:靈敏度低(0.3~2.0g/L),假陰性率高,少使用。
對甲苯磺酸沉淀法:操作簡便,靈敏度較高(3mg/L);不與清蛋白反應(yīng);當(dāng)尿球蛋白>5g/L時,可出現(xiàn)假陽性,為篩檢試驗。
電泳法或免疫法:陽性率達(dá)97%;能檢出κ、λ輕鏈,檢測快、靈敏度和精確度高、穩(wěn)定性好;確證試驗。2.質(zhì)量保證(熱沉淀反應(yīng)法)①待檢者:檢測前明確用藥史,使用利福平類抗結(jié)核藥時可出現(xiàn)假陽性;②標(biāo)本:新鮮、足量,及時送檢;混濁尿應(yīng)離心取上清液進行試驗;若為蛋白尿,應(yīng)先用加熱乙酸法沉淀蛋白質(zhì),趁熱過濾后檢測;高濃度本周蛋白在90度不易完全溶解,需做陰性對照或?qū)?biāo)本稀釋;③PH:低于PH4.0時,分子聚合受到抑制而致假陰性;一、尿本周蛋白檢驗3.臨床意義
①約50%的多發(fā)性骨髓瘤及15%的巨球蛋白血癥病人出現(xiàn)本周蛋白,為重要診斷依據(jù)之一。
②慢性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤及腎淀粉樣病變?nèi)艘部沙霈F(xiàn)本周蛋白。
一、尿本周蛋白測定
肌紅蛋白(Mb)是含有一條珠蛋白肽鏈和一個亞鐵血紅素的蛋白質(zhì),其結(jié)構(gòu)及特性與血紅蛋白相似,但僅有一條肽鏈,分子量為1.745萬,與氧可逆性結(jié)合,為肌肉組織供能。當(dāng)有肌損傷時,肌紅蛋白進入血循環(huán),因分子量較小,易通過腎小球濾過,而排入尿中。二、尿肌紅蛋白測定
1.測定方法及評價
化學(xué)法:
Mb可溶于80%硫酸銨溶液中,其血紅素具有類過氧化氫酶樣活性,隱血試驗呈陽性。簡便、經(jīng)濟、敏感度高,為Mb的過篩試驗。
分光光度法:靈敏度低。
單克隆抗體免疫法:方便、快速、靈敏、特異,已成為測定Mb的主要方法。
其它方法二、尿肌紅蛋白測定
二、尿肌紅蛋白質(zhì)測定2.質(zhì)量保證
標(biāo)本:新鮮,以免發(fā)生假陰性;需保存標(biāo)本,宜堿化后冷藏。
防止假陰性:宜將硫酸銨緩慢加入尿中,輕微振蕩,防止假陰性。3.臨床意義
創(chuàng)傷:擠壓綜合征、電擊傷、燒傷、手術(shù)創(chuàng)傷等。嚴(yán)重者可引起腎衰。
缺氧、缺血:心梗。中毒、全身感染、惡性高熱和低鉀血癥導(dǎo)致全身性缺氧與微循環(huán)障礙。
陣發(fā)性肌紅蛋白尿:劇烈運動
其它:原發(fā)性肌紅蛋白尿癥和家族性肌病、肌炎綜合征、進行性肌營養(yǎng)不良。
清蛋白是血漿蛋白的主要成分,為單鏈多肽,清蛋白帶負(fù)電荷,不容易通過腎小球,尿中含量極微(5~30mg/24h)。早期的腎小球病變,清蛋白的排泄率即有所增加。常規(guī)定性方法尚不能檢出,只有通過更為敏感的方法才可檢測到尿中清蛋白含量的變化。能早期敏感地反映腎小球功能的損害。三、尿微量清蛋白測定1.測定方法及評價①免疫比濁法:臨床上常用方法。操作簡便,敏感度及特異性較高。但受尿中其它混濁性雜質(zhì)的干擾,并且當(dāng)清蛋白濃度超過抗體濃度時不易得到可靠結(jié)果。
抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物,反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)保持反應(yīng)液抗體過量時,形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加,反應(yīng)液濁度也隨之增高,其結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品對照,即可計算出待檢成分的含量。三、尿微量清蛋白測定2.質(zhì)量保證
待檢者:宜在清晨或安靜狀態(tài)下收集尿液,劇烈運動后會增高。
抗血清:宜在4度密封保存,不可反復(fù)凍融,每次更換試劑應(yīng)重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
操作:檢驗前需將尿液離心。
結(jié)果報告方式:晨尿法:每升尿排出量(mg/L);定時留尿法:計算單位時間內(nèi)的排泄率(mg/24h),推薦24h尿清蛋白總量;隨機尿法:測定清蛋白同時測定尿肌酐,用肌酐比值報告排出率。
三、尿微量清蛋白測定3.臨床意義
①早期腎小球損害的篩檢:糖尿病、高血壓、重金屬及藥物中毒性腎病病人,清蛋白排泄率的增加可出現(xiàn)于其它指示變化之前。持續(xù)出現(xiàn)微量清蛋白尿時,提示病人處于發(fā)展為糖尿病腎病的早期;當(dāng)排泄量持續(xù)大于300mg/24h后,診斷為糖尿病腎病。
②超敏反應(yīng)性紫癜的腎小球功能監(jiān)測
③其它:尿路感染時,尿清蛋白排泄率輕度升高;某些特發(fā)性水腫病人尿清蛋白排泄率也高于健康人。三、尿微量清蛋白測定
經(jīng)腸道吸收的脂肪皂化后成乳糜液,由于種種原因致淋巴引流不暢而未能進入血循環(huán),以至逆流致泌尿系統(tǒng)淋巴管中時,可致淋巴管內(nèi)壓升高、曲張破裂、乳糜液流入尿中,使尿流呈不同程度的乳白色,嚴(yán)重者似乳法稱乳糜尿。如在乳糜液尿中混有血液時稱為血性乳糜尿。尿中乳糜的程度與病人攝入脂肪量、淋巴管破裂程度及運動強度因素有關(guān)。乳糜爛尿中主要含卵磷脂、膽固醇、脂酸鹽及少量纖維蛋白原、白蛋白等。如合并泌尿道感染,則可出現(xiàn)乳糜膿尿。四、乳糜尿測定四、乳糜尿測定1.測定方法及評價四、乳糜尿測定有機溶劑萃取染色法:乳糜,是脂肪微粒組成,呈白色外觀,于尿液中加入乙醚充分振蕩后,與原尿相比,如乳濁程度明顯減輕則可確診,因所含脂肪性成分為乙醚所溶解。于乳糜尿中加入蘇丹Ⅲ染液置顯微鏡下觀察。如見大小不等之桔紅色球形小體則為陽性。此法簡便易行,過小的脂滴著色后肉眼不易觀察,可在顯微鏡下觀察。2.質(zhì)量保證
乳糜尿與膿尿或嚴(yán)重的結(jié)晶尿的鑒別要點為后二者離心沉淀后上清液呈澄清狀而沉渣顯微鏡檢查可見多數(shù)白細(xì)胞或無定形磷酸鹽結(jié)晶(加熱、加酸后溶解),而乳糜尿于離心沉淀后外觀不變,絲蟲病引起者,偶在沉渣到微絲蚴。
定性檢查陽性,應(yīng)鏡檢找微絲蚴四、乳糜尿測定3.臨床意義
①淋巴管阻塞,常見于絲蟲病。絲蟲在淋巴系統(tǒng)中引起炎癥反復(fù)發(fā)作,大量纖維組織增生,使腹部淋巴管或胸導(dǎo)管廣泛阻塞,由于腎的淋巴最脆弱,故易于腎盂及輸尿管處破裂,出現(xiàn)乳糜尿。如為絲蟲癥引起的,可在尿沉渣中于顯微鏡下見到微絲蚴.②先天淋巴畸形、腹骨結(jié)核、腫瘤壓迫等也可以出現(xiàn)乳糜尿。胸腹創(chuàng)傷、手術(shù)傷及腹腔淋巴管或胸導(dǎo)管也可出現(xiàn)乳糜尿,但少見。③過度疲勞、妊娠及分娩后、糖尿病脂血癥、腎盂腎炎、包蟲病、瘧疾等也偶見乳糜尿。四、乳糜尿測定含鐵血黃素尿(hemosiderinuria,Hd)為尿中含有的不穩(wěn)定、棕色或暗黃色、顆粒狀的鐵蛋白聚合體。當(dāng)血管內(nèi)溶血時,在部分Hb在尿中排出,而有一部分Hb被腎小管上皮細(xì)胞重吸收,并在細(xì)胞內(nèi)分解成含鐵血黃素,隨細(xì)胞脫落由尿中排出。當(dāng)細(xì)胞分解時含鐵血黃素釋放到尿中,可用鐵染色檢出。五、尿含鐵血黃素測定1.測定方法及評價Rous試驗:含鐵血黃素中的鐵離子,在酸性環(huán)境中與亞鐵氰化鉀作用,產(chǎn)生藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀,顯微鏡下可見藍(lán)色閃光顆粒,即普魯士藍(lán)反應(yīng)。操作簡便。但可能因顆粒太小,普通光學(xué)顯微鏡無法看到,引起假陰性。五、尿含鐵血黃素測定2.臨床意義
尿中出現(xiàn)含鐵血黃素意義與血紅蛋白類似,陽性見于慢性血管內(nèi)溶血,如陣發(fā)性睡眠性Hb尿癥和行軍性肌紅蛋白尿、自身免疫溶血性貧血、嚴(yán)重肌肉疾病等。有時如因尿中Hb量少,隱血試驗陰性時可進一步檢測是否有含鐵血黃素。另外在溶血初期雖有Hb尿,但因HB尚未被腎上皮細(xì)胞攝取,因而未形成含鐵血黃素,所以本試驗可呈陰性。五、尿含鐵血黃素測定
成熟女性因受精的卵子移動到子宮腔內(nèi)著床后,形成胚胎,在發(fā)育成長為胎兒過程中,胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin,HCG),可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。HCG由一條α多肽鏈和一條β多肽鏈組成,而β多肽鏈為HCG特有,故臨床上常通過β-HCG來反映HCG的變化。
當(dāng)妊娠1-2.5周,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8孕周達(dá)到高峰,至孕期第4個月始降至中等水平,并一直維持到妊娠末期。HCG主要存在于孕女的血液、尿液、羊水中,主要用于早期妊娠的診斷及滋養(yǎng)層細(xì)胞腫廇的診斷及療效觀察。六、尿HCG測定
膠乳凝集抑制試驗
單克隆雙抗體酶免疫法
單克隆抗體膠體金標(biāo)免疫層析法
六、尿HCG測定1.測定方法及評價操作簡便、價格便宜、快速、試劑易得。但靈敏低,特異性不高而趨淘汰靈敏度高,可半定量,臨床常用,適合批量檢測。操作復(fù)雜,所需時間長簡便快速,特異性強,靈敏度高,可半定量,在受精后7-10天就可作出診斷,臨床應(yīng)用廣泛
放射免疫
電化學(xué)發(fā)光免疫法
檢孕卡法
六、尿HCG測定1.測定方法及評價靈敏度高,可定量,多用于血液HCG測定靈敏度低,可用于早孕診斷靈敏度高,特異性強,穩(wěn)定,準(zhǔn)確,但易污染,適用于研究工作,臨床不常用2.質(zhì)量保證
標(biāo)本:宜采集新鮮晨尿;留尿前勿大量飲水。不能使用嚴(yán)重蛋白尿、血尿、菌尿標(biāo)本進行檢測。
操作:試帶浸入尿液中,同時加做陰性、陽性對照,并做原濃度和2倍稀釋的尿液測定,均為陽性才可報告陽性。
報告方式:可定性,可定量。
六、尿HCG測定3.參考區(qū)間
妊娠不同時期以及各孕婦之間血清HCG絕對值變化大,一般非孕婦女血HCG<100IU/L,妊娠期間血清HCG水平見表。六、尿HCG測定妊娠周數(shù)HCG(IU/L)0.2-15-501-250-5002-3100-50003-4500-100004-51000-500005-610000-1000006-815000-200000六、尿HCG測定3.臨床意義①診斷早期妊娠:7-14d尿液當(dāng)中可測出HCG。②異常妊娠與胎盤功能的判斷:
異位妊娠:如宮外孕時,本試驗只有60%的陽性率,在子宮出血3天后,HCG仍可為陽性,故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。
流產(chǎn)診斷與治療:不完全流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘存,HCG檢查仍可呈陽性;完全流產(chǎn)或死胎時HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性,因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。
先兆流產(chǎn):如尿中HCG仍維持高水平多不會發(fā)生難免流產(chǎn)。如HCG在2500IU/L以下,并逐漸下降,則有流產(chǎn)的或死胎的可能,當(dāng)降至600IU/L則難免流產(chǎn)。在保胎治療中,如HCG仍繼續(xù)下降說明保胎無效,如HCG不斷上升,說明保胎成功。
在產(chǎn)后4天或人工流產(chǎn)術(shù)后13天,血清HCG應(yīng)低于1000IU/L,產(chǎn)后9天或人工流產(chǎn)術(shù)后25天,血清HCG應(yīng)恢復(fù)正常。如不符合這一情況,則應(yīng)考慮有異常可能。六、尿HCG測定③滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤診斷與治療監(jiān)測:
葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪刃畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高,可達(dá)10萬到數(shù)百萬IU/L,可用稀釋試驗診斷如妊娠12周以前1:500稀釋尿液呈陽性,妊娠12周以后1:250稀釋尿
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