無菌部位標本的細菌檢驗岳陽職業技術學院王華洪一、血液及骨髓標本的細菌學檢驗（一）標本的采集1.皮膚消毒

?嚴格執行三步法2.采血部位：

?肘靜脈

?肘動脈或股動脈采血

?嬰幼兒采頸靜脈血

3.采集方法

?嚴格無菌操作4.采血量

?比例：1:10

?成人8～10ml/瓶

?兒童1～5ml/瓶

?嬰兒1～2ml/瓶

?骨髓1～2ml/瓶

疾病24小時內24小時后菌血癥、敗血癥2～3份細菌性心內膜炎3份（1～2小時）2份不明原因發熱2～3份2份5.采血時間和頻度6.標本的運送和保存立即送檢，室溫保存，切勿冷藏（二）微生物學檢驗

1.常見病原菌2.

檢驗程序培養基性狀改變疑似病原菌均勻混濁，指示劑變色革蘭陰性桿菌微混濁，有綠色變化肺炎鏈球菌有菌膜，均勻混濁有綠色熒光銅綠假單胞菌上層澄清，下層有沉淀鏈球菌細胞層自上而下的溶血溶血性鏈球菌混濁、有膠凍狀凝固現象葡萄球菌灰白色菌膜、培養基清晰枯草芽孢桿菌或類白喉棒狀桿菌3.檢驗方法（1）普通細菌的培養與鑒定

?增菌培養：培養陽性指證及疑似菌列表陽性培養瓶直接藥敏試驗分離培養涂片染色鏡檢細菌鑒定藥敏試驗報告報告報告?陽性培養瓶處理?陰性培養瓶處理于12～18小時、第3天和第7天至少做3次盲傳，7天無細菌生長報告陰性（2）特殊細菌培養與鑒定?腦膜炎奈瑟菌血液骨髓胰胨肉湯或專業培養瓶巧克力培養基（35℃,

5％～10％C02）鑒定：葡萄糖、麥芽糖發酵陽性藥敏：CLSI標準腦膜炎奈瑟菌菌落（2）特殊細菌培養與鑒定?草綠色鏈球菌血液骨髓血瓊脂平板（35℃,

5％～10％C02、需氧和厭氧環境）胰酶解酪蛋白大豆肉湯培養瓶鑒定藥敏試驗草綠色鏈球菌草綠色鏈球菌菌落7天培養無細菌生長，培養至第4周，仍無細菌生長則報告“經4周培養無草綠色鏈球菌生長”血液骨髓葡萄糖膽汁或膽鹽肉湯MAC、SS35℃培養鑒定;KIA、生化反應、血清學試驗等藥敏試驗血液骨髓肝浸液肉湯肝浸液平板或血平板（35℃,

5％～10％C02）涂片、生化鑒定血清學試驗?傷寒沙門菌及其他沙門菌?布魯菌培養4周無細菌生長，報告“經4周培養無細菌生長”標本牛心腦浸液或肝浸液血平板或巧克力平板35℃、厭氧培養生化鑒定?厭氧菌?真菌：真菌增菌肉湯增菌→沙保弱培養基（25℃或37℃）→菌落特征→生化鑒定、報告?L型細菌高滲液體培養基→血瓊脂平板和L型細菌培養基→典型“油煎蛋”菌落→返祖、鑒定4.結果報告采取分級和限時報告制度?初報告：將鏡檢結果電話通知主管醫生?預報告：6～8小時內報告直接藥物敏感結果?最終報告：報告細菌種屬、藥敏試驗、結果評價及建議?陰性報告（三）臨床意義?排除雜菌污染，從血液和骨髓標本中檢出任何細菌都具有臨床意義?葡萄球菌是血液感染最常見的細菌?草綠色鏈球菌是亞急性心內膜炎的主要致病菌?尿路、膽道、胃腸道炎癥粘膜損傷引起的敗血癥以大腸埃希菌多見?產單核李斯特菌主要引起新生兒敗血癥二、腦脊液標本的細菌學檢驗（一）標本的采集1.采集部位?腰椎穿刺法2.采集量?3～5ml3.標本的運送和保存?15分鐘內送檢，最遲不能超過1小時。疑似苛養菌感染時，應保溫送檢（二）微生物學檢驗1.常見病原菌2.檢驗程序肺炎鏈球菌腦膜炎奈瑟菌流感嗜血桿菌3.檢驗方法（1）涂片檢查

?革蘭染色

?抗酸染色?墨汁負染色

新型隱球菌結核桿菌（2）分離培養與鑒定?普通細菌標本→血瓊脂平板和巧克力平板（35℃，CO2環境）→可疑菌落→形態、生化試驗及血清學試驗、藥敏試驗?結核分枝桿菌標本→羅-琴培養基或米氏7H-10培養基→35℃溫箱孵育→可疑菌落→鑒定?真菌標本→血平板或沙保弱培養基→25℃及37℃孵育→可疑菌落→形態、鏡檢及生化反應等鑒定。?厭氧菌標本→血平板、厭氧血瓊脂平板和硫乙醇酸鈉肉湯→35℃需氧、厭氧培養→可疑菌落→染色鏡檢及生化鑒定、藥敏試驗4.結果報告

?初報告：報告標本直接涂片結果?預報告：報告標本直接藥敏試驗結果?最終報告：報告細菌種屬、藥敏試驗、結果評價及建議?陰性報告（三）臨床意義?腦膜炎奈瑟菌引起細菌性腦膜炎?結核分枝桿菌引起的結核性腦膜炎?真菌性腦膜炎最常見的病原體是新型隱球菌，白假絲酵母菌、球孢子菌好發于免疫功能低下和惡性疾病患者開放性膿腫瘺管1.拭子采集法

?

開放性性膿腫2.沙布條采集法

?

瘺管的放線菌感染3.注射器抽吸法

?

封閉性膿腫4.標本運送與保存

?

厭氧標本“床邊接種”膿液（病灶分泌物）標本的細菌學檢驗（二）微生物學檢驗1.常見病原菌2.檢驗程序3.檢驗方法（1）涂片檢查?普通細菌檢查：根據形態和染色特點，報告?放線菌檢查：查找“硫磺樣顆粒”，挑取“硫磺樣顆粒”制片。用低倍鏡及高倍鏡檢查并報告?厭氧芽孢梭菌檢查：描述是否有芽胞、芽胞位置及形狀破傷風芽孢梭菌厭氧芽孢梭菌（2）分離培養與鑒定?普通細菌培養標本→血平板、中國藍/麥康凱平板→35℃、需氧培養→典型菌落→染色鏡檢、生化反應等鑒定?產氣莢膜梭菌培養標本→血瓊脂平板、卵黃瓊脂平板、庖肉培養基→35℃、厭氧環境→可疑菌落→染色鏡檢、生物學性狀鑒定雙層溶血環Nagler反應洶涌發酵4.結果報告

?

初級報告：報告“找到革蘭×性球（桿）菌，呈××排列，形似××細菌”

?

最終報告：報告“檢出××細菌”、藥敏試驗、結果評價及建議

?

陰性報告：報告“經4