山東協和學院學生口腔齲活性實驗【摘要】目的：研究齲活性試驗（cariesactivitytest，CAT）之一的刃天青紙片法（Rezazurindisctest，RDtest）紙片變色程度與唾液、菌斑中致齲細菌以及齲失補牙數（dmft）的關系。方法：給300名受測試者應用RD法檢查受測試者dmft，并取其唾液和菌斑樣本培養致齲細菌。結果RD法紙片變色程度與唾液、菌斑中致齲細菌以及dmft呈正相關關系，敏感度為58．8％，特異度為83．7％，陽性預測值為70．2％。結論：RD法能反映唾液、菌斑中致齲細菌數量以及受測試者患齲現狀。【關鍵詞】齲活性試驗；刃天青紙片法；菌斑；唾液；齲失補牙數齲齒是一種由口腔中多種因素復合作用所導致的牙體硬組織進行性病損，表現為無機質脫礦和有機質分解，隨病程發展而從色澤改變到形成實質性病損的演變過程。齲病是人類常見病、多發病，是造成牙齒丟失的主要疾病之一。齲齒是細菌性疾病，可以進一步引起牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和頜骨炎癥。大學生這一特殊群體的口腔健康知識將直接影響其口腔衛生行為和口腔健康狀況，從而對全社會的口腔預防保健產生深遠的影響。但目前國內大量調查資料發現，大學生的口腔保健意識薄弱，沒有較好地掌握正確的口腔衛生行為，齲病、牙齦炎、牙周病等依然是影響大學生口腔健康的多發病和常見病。根據2016年《全球疾病負擔研究》報告顯示：齲病在全球最流行的疾病中排名第12位，影響了全球約5.6億人群。2017年9月發布的中國第四次全國口腔健康流行病學調查結果顯示：中國青少年的患齲率達70.9%，比十年前上升了5.8%，并有隨著年齡增加而增加的趨勢，但治療率僅有4.%。即使經過治療，齲病的復發率可達39%-53%。對于齲病的預防和阻斷越來越成為口腔醫生的投入焦點：尤其是及早針對病因進行的齲病的風險評估及預測體系，對早期阻斷青少年齲病的發生、發展意義重大。在齲病的風險預測中，齲活性是齲病發生、發展的關鍵預測指標，代表機體患齲的易感性和傾向性。齲活性檢測是篩選危險和易感人群的有效方法，本實驗主要是采用刃天青紙片法研究山東協和學院學生口腔中變形鏈球菌群的數量以及牙表面菌斑中細菌的產酸能力。刃天青紙片法（RDtest）是檢測致齲細菌的一種齲活性試驗。其中刃天青紙片變色程度與唾液中致齲細菌、受測試者齲失補牙數和唾液中變形鏈球菌數有關。而齲病是由菌斑中致齲細菌在牙面持續產酸造成，目前尚無RD法與菌斑中致齲細菌相關性的報道。本試驗進行了RD法和受測試者齲失補牙數（dmft）、唾液、菌斑中致齲細菌相關性的研究。對象和方法：1.研究對象2022年8月～2022年10月期間山東協和學院口腔醫學專業學生100人和非口腔醫學專業學生200人。要求檢查前1h內未進食，1個月內未服用過抗生素，6個月內未服用過激素和免疫抑制劑，1個月內無口腔局部用藥（如使用漱口水）全身無重大系統疾病。2.刃天青紙片制作和RD法按Maki試驗的方法制作直徑8mm的刃天青紙片置于恒溫箱烘干備用。測試時將紙片置于受測試者舌下浸透，囑其輕閉嘴將紙片取出夾在兩片聚乙烯薄膜之間，夾于其腋下15min后觀察結果。固定由1名學生判斷結果：紫藍色（－）紫紅色（＋），紅色（＋＋），白色（＋＋＋）。3.標本采集（1）唾液采集：上午9～11時用無菌口杯取受測試者的未刺激唾液約1ml，取0.1ml唾液置于裝有0.9ml林格氏液的無菌1.5ml離心管中,充分震蕩。（2）取唾液標本后漱口,然后用無菌生理鹽水沖洗右下頜第二前磨牙、第一磨牙和第二磨牙的鄰間隙軟垢，隔濕，用消毒牙簽插入鄰間隙至接觸牙齒鄰面取該處菌斑，將牙簽頭折斷放在裝有1ml硫乙醇酸鈉傳送液的1.5ml離心管中，超聲波潔牙機間斷分散菌斑10s。4.細菌鑒定通過菌落性狀和菌落直接涂片革蘭氏染色后顯微鏡下觀察，初步判斷厭氧菌可能的屬性，隨機抽取3份受測試者的標本（每份標本分別包括唾液和菌斑接種的MSB和ROGOSA培養基）的菌落用液體培養基培養后進行分子生物學鑒定以細菌特征性基因（變形鏈球菌是gtfb基因，乳酸桿菌是laf基因）為基礎制作引物，以需檢測細菌的DNA為模板，進行聚合酶鏈式反應，然后對擴增產物進行序列測定并比對確定所檢測細菌的種類。5.記錄dmft根據WHO檢查標準，由1名醫師檢查并記錄dmft。根據世界衛生組織計算失牙的標準，20歲以下的青少年喪失了不該脫落的牙，如磨牙或尖牙，即為齲失。6.結果判斷將dmft≥5定為齲易感人群，dmft＜5為對齲不易感人群；刃天青紙片變紅色和白色定為預測陽性，紫藍色和紫紅色定為陰性。7.統計學處理采用SPSS11．0進行統計處理，RD法紙片變色程度與dmft、唾液和菌斑中的致齲細菌關系采用Spearman等級相關進行分析。結果：1.本試驗共檢查300名同學的dmft最小值為0，最大值為17，均數為5．78標準差為4.171。經非參數檢驗RD法與dmft之間Spearman檢驗r值為0．427雙側檢驗P＜0.01。2.唾液標本中所培養的致齲細菌（CFU／ml）的均數和標準差：鏈球菌（7．540±0．519）×105,變形鏈球菌（5．766±0．748）×104,乳酸桿菌（2．946±1．322）×102,放線菌（6．823±0.449）×105。表1RD法與唾液中致齲細菌Spearman等級相關統計分析統計分析鏈球菌變形鏈球菌乳酸桿菌放線菌r值0.4260.3310.3900.203雙側檢驗P值0.0000.0010.0000.005菌斑樣本中所培養的致齲細菌（CFU／ml）的均數和標準差：鏈球菌（7．746±0．550）×105,變形鏈球菌（6．194±0．540）×104,乳酸桿菌（3．248±1．292）×102,放線菌（7.069±0.737）×105。表2RD法與菌斑中致齲細菌Spearman等級相關統計分析統計分析鏈球菌變形鏈球菌乳酸桿菌放線菌r值0.2550.2460.3350.185雙側檢驗P值0.0130.0170.0170.0744.細菌的分子生物學鑒定結果顯示鏈球菌和乳酸桿菌的測序結果與標準序列比對吻合率分別為96％和93％結果可充分證實細菌種類。討論：齲活性試驗（CAT）是檢測個體和人群可能發生齲病危險因素的敏感程度可為預防齲病提供信息。刃天青紙片法是CAT的一種,具有操作簡單、得出結果時間短、成本低的特點。刃天青是一種氧化還原指示劑,在進行RD法時,唾液中的革蘭氏陽性細菌利用刃天青紙片上的蔗糖進行氧化還原反應,產生NADH等氫離子供體,在厭氧條件下使紙片變色。Maki的研究認為刃天青紙片變色程度的致齲細菌呈正相關關系,而齲病是由菌斑中致齲細菌在牙面持續產酸造成,只有在菌斑中變形鏈球菌等數量,增加產酸度增強的情況下齲病才會發生。因此可以認為通過了解菌斑中致齲細菌數量來預測齲活性更有意義。目前尚無RD法與菌斑中致齲細菌相關性的報道。本試驗結果顯示紙片變色程度與唾液中的鏈球菌、變形鏈球菌、乳酸桿菌、放線菌呈正相關相關系數雙側檢驗P＜0．01,有統計學意義。這與Maki的研究結果一致。紙片變色程度與菌斑中的鏈球菌,變形鏈球菌乳酸桿菌呈正相關,相關系數雙側檢驗P＜0．05有統計學意義。由此可見RD法紙片變色程度不僅與唾液中致齲細菌呈正相關,而且與菌斑致齲細菌呈正相關,這可能是由于口腔內細菌處于一種動態平衡,唾液和菌斑中的致齲細菌保持一種較為恒定的關系。RD法紙片變色程度與dmft經非參數檢驗,相關系數為0．427雙側檢驗P＜0．01,有統計學意義。說明RD法可以反映患齲現狀，這與劉鴻雁等的研究結果一致。Beck強調通過橫斷面調查進行齲活性試驗得出的有意義結果，需要進行前瞻性的縱向研究驗證，如果能預測新齲發生則更有意義。本試驗尚需進行前瞻性試驗，觀察刃天青紙片變色是否與新齲發生有相關性。參考受測試者的齲均5．78將dmft≥5定為齲易感人群dmft＜5定為齲不易感人群，紙片變為紅色和無色為預測陽性，紙片為紫藍色和紫紅色為預測陰性，由此得出Sn58.8％、Sp83.7％,敏感度不夠理想這可能與齲病是多因素疾病有關。綜上所述,要充分發揮RD法的價值還應該將其與其他因素聯合起來預測,以提高敏感度。參考文獻：[1]VIVIENFENG,張羽,曹桂芝,吳日玥,陳曦.一種國產齲活性培養基與標準培養基一致性及有效性的實驗檢測[J].口腔醫學,2020,40(07):602-605.DOI:10.13591/ki.kqyx.2020.07.006.[2]于興茹.低齡兒童齲患者及其父母齲活性的調查與研究[D].河北醫科大學,2013.[3]游弋,黃培城,