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3502福 建 省 廈 門 市 地 方 標 準DB3502/T155—2024水質 19種毒素測定 液色-聯譜法Waterquality—Determinationof19algaltoxins—Liquidchromatography-tandemmassspectrometry2024-12-13發布 2024-12-13實施廈門市市場監督管理局??發布DB3502/T155—2024目 次前言 II范圍 1規范性引用文件 1術語和定義 1方法原理 1干擾與消除 1試劑和材料 2儀器和設備 2樣品 2分析步驟 3結果計算與表示 4精密度和正確度 6質量保證和質量控制 7廢物處理 7注意事項 7附錄A（資料性） 方法檢出限和測定下限 8附錄B（資料性） 標準使用液濃度 9附錄C（資料性） 目標化合物的測定參考參數 10IDB3502/T155—2024前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別這些專利的責任。本文件由廈門市生態環境局提出并歸口。本文件主要起草人：高靜、陳猛、王倩、梁榕源、李振良、許方巧。IIDB3502/T155—2024水質19種藻毒素的測定液相色譜-串聯質譜法范圍本文件描述了水中19種藻毒素的液相色譜-串聯質譜測定方法。本文件適用于地表水和海水中原多甲酸毒素1（AZA1）、原多甲酸毒素2（AZA2）、原多甲酸毒素3（AZA3）（GYM）-2（PTX2）13-去甲螺旋內酯C（SPX1）OADX1DX2NOD--RR、微囊藻毒素-YR（MC-YR）、微囊藻毒素-HtyR（MC-HtyR）、微囊藻毒素-LR（MC-LR）、微囊藻毒--R-C-A-C-Y-C-W、微囊藻毒素-LF（MC-LF）等19種藻毒素的測定。當取樣量為1L，定容體積為1.0mL，進樣體積為10μL時，19種藻毒素的方法檢出限為0.8ng/L～3ng/L，測定下限為3.2ng/L～12ng/L。詳見附錄A。規范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682 分析實驗室用水規格和試驗方法GB17378.3 海洋監測規范 第3部分：樣品采集、貯存與運輸HJ91.2 地表水環境質量監測技術規范HJ442.3 近岸海域環境監測技術規范第三部分近岸海域水質監測HJ493 水質 樣品的保存和管理技術規定術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。方法原理水中的藻毒素經固相萃取柱富集，用液相色譜-串聯質譜分離檢測，通過保留時間、特征離子及其豐度比進行定性，外標法定量。干擾與消除1DB3502/T155—2024試劑和材料除非另有規定，僅使用色譜純試劑。水：GB/T6682，一級。乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）：優級純。0.1%1mL1000mL，混勻。0.1%1mL1000mL，混勻。甲醇-水（2+8）溶液：甲醇和水（6.1）2：8的體積比混合，混勻。6.6 0.1%甲酸甲醇-水（2+8）1mL甲酸，加甲醇-水（2+8）溶液（6.5）1000mL，搖勻。標準儲備液：直接購買有證標準溶液，參照制造商的產品說明保存。19種藻毒素的標準儲備液（6.7）BB.1中濃度的標準使用液，于-183個月。N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）1g/20mL，或其他等效萃取柱。濾膜：0.45μm玻璃纖維或其他材質等效濾膜。針式微孔濾膜：0.22μm聚四氟乙烯濾膜（PTFE）。儀器和設備液相色譜-三重四極桿串聯質譜儀：配有電噴霧離子化源（ESI）。固相萃取裝置：自動或手動（帶真空泵），流速可調節。濃縮裝置：氮吹濃縮儀或其他性能相當的設備。0.01g。樣品樣品采集和保存按照GB17378.3、HJ442.3、HJ493和HJ91.2的相關規定進行樣品的采集。樣品采集時應注滿棕色磨口具塞玻璃瓶或具有聚四氟乙烯襯墊瓶蓋的棕色螺口玻璃瓶，不留空隙。樣品采集后應于4℃冷藏、避光運輸，及時分析。若不能及時分析，應置于4℃冷藏、避光保存，3天內完成分析。試樣的制備水樣預處理水樣經0.45μm濾膜（6.10）過濾后，量取1000mL水樣，加入0.5g的Na2EDTA（6.2），振蕩至完全溶解。固相萃取10mL甲醇和10mL2DB3502/T155—2024將水樣以6mL/min10mLmL0.1%甲酸甲醇-（2+8）溶液（6.6）定容至1.0mL，經0.22μm針式微孔濾膜（6.11）過濾于樣品瓶中，待測。空白試樣的制備以水（6.1）代替水樣，按照與試樣的制備（8.2）相同的步驟，制備空白試樣。分析步驟儀器參考條件液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18150mm3mm2.6μm，或等效反相高效液相色譜柱；A相-0.1%甲酸溶液（6.3），B相-0.1%甲酸乙腈溶液（6.4）；負離子模式：A相-水（6.1），B相-12；進樣體積：10μL；流速：0.25mL/min。表1 正離子模式下梯度洗脫程序時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.0075251.0075253.0055456.0055458.5059510.5059510.51752514.007525表2 負離子模式下梯度洗脫程序時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.0075251.0075254.0040605.0040607.0010908.0010908.01752511.007525質譜參考條件3DB3502/T155—2024質譜參考條件如下：離子源類型：電噴霧離子源；離子源溫度：350；3500V，負離子-3000V；檢測方式：多離子反應監測（MRM）；C。對于不同質譜儀器，參數可能存在差異，測定前應將質譜參數優化到最佳。儀器調諧按照儀器使用說明書在規定時間和頻次內對液相色譜-串聯質譜儀進行質量數和分辨率的校正，以確保儀器處于最佳測試狀態。標準曲線的建立依次吸取10.0μL、20.0μL、50.0μL、100μL、200μL、400μL標準使用液（6.8，參考體積），用0.1%甲酸甲醇-定容至15（9.1）測定并記錄標準系列目標物的保留時間、定量離子的峰面積。試樣測定按照與標準曲線的建立（9.2）相同的條件進行試樣（8.2）的測定。空白試驗按照與試樣測定（9.3）相同的條件進行空白試樣（8.3）的測定。結果計算與表示定性分析每種被測組分選擇1個母離子和2個~32.5%；且待測樣品譜圖中，各組分定性子離子的相對豐度（Ksam，見式1）相對豐度（Kstd，見式2）進行比較，偏差在表3應的待測物。19種藻毒素的總離子流圖見圖1和圖2。?????=?2×100·····················································(1)?1式中：Ksam——樣品中某組分定性子離子的相對豐度的數值，單位為百分比A2——樣品中某組分二級質譜定性子離子的峰面積；A1——樣品中某組分二級質譜定量子離子的峰面積。4DB3502/T155—2024?????=????2×100····················································(2)????1式中：Kstd——標準樣品中某組分定性子離子的相對豐度，單位為百分比（%）；Astd2——標準樣品中某組分二級質譜定性子離子的峰面積；Astd1——標準樣品中某組分二級質譜定量子離子的峰面積。表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差Kstd（%）Ksam最大允許偏差（%）Kstd>502020<Kstd≤502510<Kstd≤2030Kstd≤1050注：1：MC-RR；2：NOD；3：GYM；4：MC-YR；5：MC-HtyR；6：MC-LR；7：MC-WR；8：SPX1；9：MC-LA；10：MC-LY；11：MC-LW；12：MC-LF；13：AZA3；14：PTX2；15：AZA1；16：AZA2。圖1 ESI+模式下16種目標化合物的總離子流圖5DB3502/T155—2024注：1：OA；2：DTX2；3：DTX1。圖2 ESI-模式下3種目標化合物的總離子流圖定量分析（3）進行計算。??=???1×100·1)??2式中：ρi ——樣品中微囊藻毒素的質量濃度，單位為納克每升（ng/L）；Ρis——由標準曲線得出的測試液中藻毒素質量濃度，單位為微克每升（μg/L）；V1——定容體積，mL；V2——水樣體積，mL。結果表示測定結果小數點后位數與方法檢出限一致，最多保留3位有效數字。精密度和正確度精密度36次重復測定：——實驗室內相對標準偏差分別為1.7%～13%、0.6%～13%和0.6%～8.2%；——實驗室間相對標準偏差分別為2.1%～20%、0.4%～19%和2.8%～19%；——重復性限分別為0.8ng/L～3.7ng/L、1.4?ng/L～11ng/L和1.1ng/L～15ng/L；——再現性限分別為1.3ng/L～11ng/L、1.9ng/L～22ng/L和7.7ng/L～46ng/L。6DB3502/T155—202436次重復測定：——實驗室內相對標準偏差分別為1.6%～18%、0.8%～12%和0.6%～9.4%；——實驗室間相對標準偏差分別為2.4%～20%、0.5%～16%和2.1%～20%；——1.1ng/L～4.8?ng/L、1.3ng/L～10ng/L2.5ng/L～14ng/L；——1.6ng/L～9.2ng/L、2.6ng/L～20?ng/L3.8ng/L～49ng/L。正確度36次重復測定：——加標回收率范圍分別為50.7%～111%、51.0%～115%和51.3%～117%；——加標回收率最終值分別為（52.6±3.5）%～（90.4±36.0）%、（51.2±0.4）%～（99.9±27.7）%和（53.7±2.2）%～（94.6±12.1）%。36次重復測定：——加標回收率范圍分別為51.1%～110%、51.0%～107%和52.4%～112%；——加標回收率最終值分別為（51.9±2.5）%～（91.5±.5.3）%、（52.0±2.4）%～（94.9±20.8）%和（54.3±2.5）%～（96.4±27.6）%。質量保證和質量控制空白試驗每批樣品（≤20個/批）應至少做一個空白試驗，測定結果應低于方法檢出限。校準每批樣品應繪制標準曲線，相關系數應≥0.990，否則重新繪制標準曲線。（≤20個/批平行樣的測定每批樣品（≤20個/批）應至少測定一個平行雙樣。平行雙樣測定結果的相對偏差應控制在20%以內。基體加標（≤20個/批廢物處理注意事項在分析完高濃度樣品后，應分析一個或多個空白試驗樣品檢查儀器殘留。7DB3502/T155—2024附 錄 A（資料性）方法檢出限和測定下限表A.1給出了19種藻毒素的方法檢出限和測定下限。表A.1方法檢出限和測定下限序號目標化合物英文名稱CASNo.化學式方法檢出限（ng/L）測定下限（ng/L）1原多甲酸毒素1（AZA1）Azaspiracid-1214899-21-5C47H71NO12282原多甲酸毒素2（AZA2）Azaspiracid-2265996-92-7C48H73NO12283原多甲酸毒素3（AZA3）Azaspiracid-3265996-93-8C46H69NO12284環亞胺毒素（GYM）Gymnodimine173792-58-0C32H45NO40.83.25蛤毒素-2（PTX2）Pectenotoxin-297564-91-5C47H70O1428613-13-desmethylspirolideC334974-07-1C42H61NO7287大田軟海綿酸（OA）Okadaicacid78111-17-8C44H68O13288鰭藻毒素1（DTX1）Dinophysistonxin-181720-10-7C45H70O13289鰭藻毒素2（DTX2）Dinophysistonxin-2139933-46-3C44H68O131410節球藻素（NOD）Nodularin118399-22-7C41H60N8O102811微囊藻毒素-RR（MC-RR）Microcystin-RR111755-37-4C49H75N13O122812微囊藻毒素-YR（MC-YR）Microcystin-YR101064-48-6C52H72N10O1331213微囊藻毒素-HtyR（MC-HtyR）Microcystin-HtyR478001-08-0C53H74N10O1331214微囊藻毒素-LR（MC-LR）Microcystin-LR101043-37-2C49H74N10O122815微囊藻毒素Microcystin-WR138234-58-9C54H73N11O1231216微囊藻毒素-LA（MC-LA）Microcystin-LA96180-79-9C46H67N7O122817微囊藻毒素-LY（MC-LY）Microcystin-LY123304-10-9C52H71N7O132818微囊藻毒素Microcystin-LW157622-02-1C54H72N8O1231219微囊藻毒素-LF（MC-LF）Microcystin-LF154037-70-4C52H71N7O12288DB3502/T155—2024附 錄 B（資料性）表B.1給出了19種藻毒素標準使用液的濃度。表B.119種藻毒素標準使用液的濃度序號目標化合物溶劑標準使用液濃度（μg/L）1AZA1甲醇2602AZA2甲醇2443AZA3甲醇2364GYM甲醇1255PTX2甲醇2206SPX1甲醇2517OA甲醇4208DTX1甲醇3909DTX2甲醇19010NOD甲醇50011MC-RR甲醇50012MC-YR甲醇50013MC-HtyR甲醇50014MC-LR甲醇50015MC-WR甲醇50016MC-LA甲醇50017MC-LY甲醇50018MC-LW甲醇50019MC-LF甲醇5009DB3502/T155—2024附 錄 C（資料性）目標化合物的測定參考參數表C.1給出了目標化合物的保留時間及多離子反應監測條件等測定參考參數。表C.1目標化合物的保留時間、多離子反應監測條件等測定參考參數序號目標化合物（min）采集模式（m