QualityrequirementsofmesenchymalstemcellsfortherapyI 3 4 5 8 8 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定公司、山東華奧生物工程有限公司、西安國際醫學中以如何馴化賦能出具有針對不同適應癥的高效異質的MSCs是治療不同疾病間充質干細胞具有發育程序性衰老的特點，隨著年齡的增長，間充質干細胞再者，MSC易受微環境的影響，來自患者如自身免疫性疾病和糖尿病的MSCs常表現出較弱的增殖和分化體內的免疫細胞清除，不易出血管、易凋亡1用于疾病治療的間充質干細胞質量要求3.1具有自我復制能力的多潛能細胞，在一定條件下可分化成3.23.3在體外特定誘導分化培養條件下，細胞向多種預設目標細胞分化的功3.43.53.6體外培養的MSCs在細胞形態、表面標志、分化潛能和分泌物等方面表現出不均一的特征。3.73.8對于免疫應答的抑制作用，通過抑制與免疫反應有關細胞（T細胞、B細胞、NK3.923.10抗炎作用anti-inflammatory3.113.123.133.14在多種因素的作用下，MSC能定向趨向性遷移，越過血管內皮細胞至靶向組織并定植存活的3.15為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的3.163.173.18一個體細胞中的全部染色體在有絲分裂中期，按其大小、形態特征(著絲粒的位置）順序排列所構3.193.20細胞接種到免疫缺陷動物體內后在注射部位和（或）轉移部位由接種細胞所形成腫瘤的能3.21與用10%FBS培養的第一代MSCs比較，細胞因子和/或其它相關分子的表達量明顯升高，3.22與用10%FBS培養的第一代MSCs比較，細胞因子和/或其它相關分子的表達量明顯降低，3.23無血清和無異種蛋白培養基serum-freeandxeno-f33.24過結合相應受體可調控免疫應答、血細胞生成、細胞生長和損傷組織4縮略語AM-MSC：羊膜間充質干細胞（AmnioticMesenchymalStem/Ang-1/II：血管生成素1/2（Angiopoietin-1/II）APLL-37：抗菌肽LL-37（AntibacterialpeptideLL-37）ASK1：凋亡信號調節激酶1（Apoptosissignal-regulBDNF：腦源神經營養因子（Brain-derivedneurotrophicfactor）CD：細胞膜表面分化抗原簇（ClusterofDifferentiaC/EBPb：普通轉錄因子c/ebpb（CCAAT/enhanceCMV：巨細胞病毒（cytomegalovCNTF：睫狀神經營養因（CiliaryCOX-2：環氧化酶-2（CyclooxygenCXCR4：CXC化學受體4（CXCcCXCR7：CXC化學受體7（CXCcDT-MSCs：用于疾病治療的MSCs（DiseasetreatmentmeseEBV：人類皰疹病毒4型（Epstein-BarrviFBS：胎牛血清（FetalbovineserGDNF：膠質來源的神經營養因子（Glial-derivedneGSH：谷胱甘肽（antioxidantglutatHIF-1：低氧誘導因子-1（Hypoxia-induciblefactorHIV-I/II：I/II型人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficieHLA-G5：人白細胞抗原G5（Humanleukocyteantigen-G5）HSP70：熱休克蛋白70（heat-shockproteinHTLV：人類嗜T細胞病毒（humanT-lymphotropicvirIDO：吲哚胺-2,3-雙加氧酶（IndoleamineIFITM：干擾素誘導跨膜蛋白（InterfeKGF：角質細胞生長因子（KeratinocytegrowthfaKRIT1：Krev/Rap1相互作用陷阱-1（Krev/Rap1interMEF2：肌增強子2（myogenicenhancerfactor2）MFGE-8：乳脂肪球表皮生長因子-8（Milk-fatglobuleepidermalgrowMMP-2：基質金屬蛋白酶2（Matrixmetalloproteinase-2）MMP-9：基質金屬蛋白酶9（Matrixmetalloproteinase-9）NFE2L2：核因子紅系2相關因子2（Nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2）4NPB：核質橋（NucleoplasmicbridgePTGS2：前列腺素內過氧化物合酶2（Prostaglandin-endoperoxidesynthasSA-β-gal：衰老相關的β-半乳糖苷酶（Senescence-assSAHF：衰老相關的異染色質位點（SenescenceassociatedheterochromatiSASP：衰老相關的分泌型（SenescenceassociatedSOD：超氧化物歧化酶（SuperoxidedisSTC1/II：斯鈣素1/2（StanniocalTGF-β：轉化生長因子-β（TransforminggrTIMP-1：基質金屬蛋白酶抑制劑-1（Tissueinhibitorofmetalloproteinas平的不同層次。用無血清和無異種蛋白培養基培養的DT-MSCs和其它用途的P1代MSCs相比，在下述生物學特性方面須等同或優于后者。高質量的DT-MSCs是確保臨床治療安全和有效的關鍵所）；5.4細胞存活率a)細胞制品制備完成時，細胞存活率≥99%；b)細胞制品從制備完成到使用前，2℃~6℃環境下保存12小時內，細胞存活率≥95%；c)細胞制品從制備完成到使用前，18℃~25℃環境下保存4小時內，細胞存活率≥95%；5.6細胞標志物a)通用陽性表面標志物群，包括但不限于CD29、CD73、CDb)陰性表面標志物群，包括但不限于CD11b、CD14、CD19、CD79a、CD34、CD55.7免疫表型5.8染色體核型與P1代細胞相比，下述反映衰老的指標變化不明顯，最大變化值a)細胞體積增大、形態各異、群體倍增時間增加；b)p53、p21和p16基因高表達；c)小于5%的細胞具有β-半乳糖苷酶活性或核內PrelaminA堆積；f)表達miR-155-5p、miR-29c-3ph)低表達與自噬功能相關的LC3B、ATG12-5、Beclin5.11集落形成5.12遺傳穩定性5.12.2培養至20代，在體外長期擴增中不/低表達腫瘤細胞相關的Meflin、TGF--β和B5.13線粒體和活性氧5.13.1線粒體應符合2大特征要求，即正常的膜電位（MMP檢測線粒體中m-MPI為紅色熒光）和5.14細胞株鑒定癥時，要求所用的DT-MSCs與P1代的MSCs相比，應6.2分化潛能經、肌肉、脂肪、血管和上皮細胞等前體細胞，其分化標miR-196a-5p和miR-210，或其它特征性基因；6e)如分化為上皮細胞，應能表達CK-19、CK-5、CCSP-26和SP-C、miR-200或其它特征性基因；f)如分化為內皮細胞，應能表達CD31、VWF、和eNOS、miR-126、miR-342-3p、miR-377或其它特6.4合成和分泌外泌體的能力CD63+、CD81+、CD73+（FACS陽性率≥10-15%)、Alix和TSGCD9+、CD29+、CD44+、CD49e+、CD63+、CD81CD34-、CD45-、CD142-、MHC-I/let7、miR-10b-5p,miR-21、miR-23a-3p、miR-34、miR-221/226.5趨化/歸巢能力PDGF-AB，IGF-1，RANTES，MDC，SDF-6.7抵抗微生物的能力應具有高表達Lipocalin2、IFI6、PMAIP1、ISG15、SAT1、defensins、cystatinC、elafin和6.9抗纖維化能力6.9.1應具有HGF、FGF-b、7Gpx、HSP70、STC1、miR-29a-3p、miR-210、miR-27a、miR-6.11.1應高表達PGE2、IDO、KYN、COX-2、IL-10、TGF-β1、NB7-H1、Hmox1、galectin-1、PD-L1、PD-6.11.2應能分泌miR-146a-5p、miR-21、miR-34a、miR-16.12血管再生能力6.12.1應具有bFGF、HGF、MCP1、PIGF、Ang-1/2、angiostatin、TGF-b2、VEGF-D、GM-CSF、CXCL56.13組織再生和修復能力a)用于神經組織再生和修復，應表達BDNF、CNTF、VmiR-23a、miR-146a；miR-199a-3p、miR-145-5p、miR-21或其它標志性分子；b)用于肺組織再生和修復，應分泌KGF、HGF，EGF、miR-26a、miR-124或其它標志性分子；miR-106a、miR-146a、miR-20a、miR-181a、miR-21-5p、miR-156.14抗衰老能力6.14.1應能分泌miR-17-5p、miR-21、miR-29a、miR-100-5p、miR-1288.1.1成體間充質干細胞制品外包裝標簽應當包含規格、細胞總量、適用范圍、制備日期及時間、有8.1.2異體間充質干細胞除標注上述內容外，還應標注細胞的來源、供體年齡和性別；如果是來源于8.2包裝8.3儲存8.3.2細胞制品在使用前如需暫時存儲，應8.4運輸8.4.2應根據細胞制品的特性選用不易破損的防震保護8.4.3應采用冷鏈運輸，溫度保持在2℃~6℃。9放行檢測報告9therapy.NatBiomedEng.2019Feb,EmbolizedinLungAreActivatedtoSecretetheAnti-inflammatoryProteinTSG-6.5,54-63immunosuppressivecapacity.ProcNatlAcadSciUSA114,E2598-E2607(2017)migrationintheextrofMigratoryCapacityofMesenchymalStromalCells.EurCellMaterStemCellsTranslationalMedicine5,427-439(2016)StemCellswithTumorNecrosisFactor-AlpVT,ForsythNR,HekeM,NguyenLT.Stemcell-basedtherapyforhumandiseases.SignalTransductTargetTher.2022Aug6;7(1):2Umbilicalcordmesenchymalmcell-basedtherapies?