35DB35/T2132—2023實(shí)驗(yàn)用秀麗隱桿線蟲飼育技術(shù)ExperimentalCaenorhabditiselegans—Rearingtechnique2023-10-25發(fā)布2024-01-25實(shí)施福建省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草1GB/T6682—2008分析實(shí)驗(yàn)室用水大腸埃希氏菌OP50EscherichiacoliOP50（E.coliOP50）2DB35/T2132—20235環(huán)境與設(shè)施5.3.1布局5.4環(huán)境3 溫度低于-80℃?！獌龃嬉哼x用S緩沖液1和含有30%甘油的S緩沖液2,詳細(xì)配方見附錄B; ——凍存液中收集的線蟲密度宜為每1ml凍存液中包含600～1000只線——凍存管在-80℃冰箱的臨時(shí)保存區(qū)梯度降溫至-80℃; 在-80℃冰箱能保存10年：4——雄蟲和雌雄同體的比例按為1:1或2:1; 5）；——生長(zhǎng)溫度在15℃~25℃之間，最常使用的培養(yǎng)溫度是2——相對(duì)濕度在40％～80%;6 7A.1.1恒溫培養(yǎng)箱A.1.2體視顯微鏡搖床材質(zhì)無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)放射性。配有溫度控制系統(tǒng)，能夠在10℃~60℃溫度范圍內(nèi)調(diào)節(jié)箱內(nèi)溫A.1.5移液器A.1.6酒精燈A.1.7挑蟲器A.1.8潔凈工作臺(tái)A.1.10液氮罐A.2.1培養(yǎng)皿8無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)放射性、耐腐蝕、無(wú)菌。常用規(guī)格有96A.2.4梯度降溫盒A.2.5凍存管91g胰蛋白胨，0.5g酵母粉，1g氯化鈉（NaCl），加入雙蒸水定容至100mL，121°C、0.107MPa1g胰蛋白胨，0.5g酵母粉，1gNaCl，2g瓊脂，加入雙蒸水定容至100mL，用1M氫氧化鈉（NaOH）2.5g酪蛋白胨，17g瓊脂粉，3gNaCl，加入975mL的雙冷卻至55℃后，加入下列溶液（膽固醇溶液過濾除菌，其余溶液在121°C、0.107MPa滅菌20——25mL1M磷酸鹽溶液（108.3g磷6g磷酸氫二鈉（Na2HPO43gK2HPO4，5gNaCl，0.25g七水硫1.86g乙二胺四乙酸二鈉（EDTA?Na2），0.69g七水硫酸亞鐵（FeSO4?7H2O），0.2g四水氯化錳（MnCl2?4H2O0.29g七水硫酸鋅（ZnSO4?7H2O0.雄蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)如圖C.1所示。(資料性)雄蟲及雌雄同體蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖圖C.1秀麗隱桿線蟲雄蟲(成蟲)形態(tài)結(jié)構(gòu)A.A.標(biāo)引序號(hào)說(shuō)明：A——用相差干涉顯微鏡拍攝的雌雄同體蟲；B雌雄同體蟲解剖模式圖。在子宮外發(fā)育線蟲是以O(shè)P50為食，OP50具有尿嘧啶缺陷，在NGM培養(yǎng)皿上不可無(wú)限生長(zhǎng)。LB液白桿菌LeucobacterVerde2微孢子蟲Nematocidaparisii較小的體型、生長(zhǎng)緩慢、子代數(shù)明顯減少、注：被感染的線蟲在顯微鏡下會(huì)呈現(xiàn)出特定的表型，能以此來(lái)判斷線蟲