受理號：CSZ2300354體外診斷試劑產品注冊技術審評報告產品中文名稱：猴痘病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）產品管理類別：第三類申請人名稱：廣州達安基因股份有限公司國家藥品監督管理局醫療器械技術審評中心目錄基本信息...........................................................................................................3一、申請人名稱...............................................................................................3二、申請人住所...............................................................................................3三、生產地址...................................................................................................3技術審評概述...................................................................................................4一、產品概述...................................................................................................4二、臨床前研究概述.......................................................................................6三、臨床評價概述.........................................................................................11四、產品受益風險判定.................................................................................13綜合評價意見.................................................................................................16基本信息一、申請人名稱廣州達安基因股份有限公司。二、申請人住所廣州市高新技術產業開發區香山路19三、生產地址廣州市高新技術產業開發區香山路19產業開發區荔枝山路6號；廣州市黃埔區香山路17號B104號房。技術審評概述一、產品概述（一）產品主要組成成分本試劑盒主要組成成分包括猴痘病毒反應液反應液B陰性質控品、MPXV陽性質控品，主要組成成分見表1。表1試劑盒主要組成成分組分名稱規格數量主要成分MPXVPCR特異性引物、探針、三羥甲

510μL/管1PCR檢測試劑反應液A基氨基甲烷鹽酸緩沖液（大包裝，24人份MPXVPCR熱啟動抗體酶、105μL/管1反應液B酶、dNTPsUDG酶MPXVPCR特異性引物、探針、三羥甲

935μL/管1PCR檢測試劑反應液A基氨基甲烷鹽酸緩沖液（大包裝，48人份MPXVPCR熱啟動抗體酶、195μL/管1反應液B酶、dNTPsUDG酶MPXV陰性MPXV內標片段（RNase質控品450μL/管1質控品P）的假病毒

（適用于大包裝，人MPXV目的片段的假病份盒；大包裝，人份/MPXV陽性450μL/管1毒、內標片段盒）質控品（RNaseP）的假病毒備注：不同批號試劑盒的以上成分不可以互換使用。（二）產品預期用途本試劑盒用于體外定性檢測猴痘疑似病例、其他需要進行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物的拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。有關“疑似病例痘防控技術指南》等文件執行。技術指南》等文件的相關要求。指南》等的要求，做好生物安全工作。本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標準。建議結合患者臨床表現和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。（三）產品包裝規格大包裝，24人份盒；大包裝，48人份（四）產品檢驗原理本試劑盒利用實時熒光技術，以猴痘病毒（）F3L基因編碼區的高度保守區為靶區域，設計特異性引物及熒光探針，進行擴增，用于樣本中猴痘病毒的定性檢P陰性結果的出現。本試劑盒同時添加了防污染組分（尿嘧啶糖基化酶，即酶），其作用機理是選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或者單鏈失堿基的鏈，在堿性介質以及高溫下會進一步水解斷裂，從而被消除。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇該產品在制備過程中主要原材料包括引物、探針、熱啟動抗體酶、酶、酶、（、dCTP、dGTP、dUTP）、內標片段（RNaseP）的假病毒、目的RNase目的片段的假病毒由申請人自制，其他原材料均為外購方式獲得。申請人選擇有資質的供應商提供的原料，通過功能性試驗，篩選出最佳原材料和供應商，制定了各主要原材料質量要求并經檢驗合格。2.企業參考品和質控品設置情況考品和精密度參考品。參考品組成如下：陽性參考品5份：由5份不同濃度的病毒樣本組成；陰性參考品10叉反應病原體樣本組成；檢出限參考品4份：由4份不同濃度的病毒樣本組成，其中包括試劑盒檢出限濃度水平；精密度參考品3份：由高、低濃度水平和陰性樣本組成。本產品設置了陰性質控品為內標片段（RNaseP）的假病毒；陽性質控品為目的片段P程中試劑盒和儀器的質量控制。此外，檢測體系還含有內源性內標檢測系統，通過檢測內標基因用于對標本采集、核酸提取過程及擴增過程的監控，可減少假陰性結果的出現。（二）生產工藝及反應體系研究申請人通過企業內部試驗確定最佳的生產工藝及反應體系，包括組裝工序等，同時對試劑用量、反應條件等進行研究，還包括對樣本用量的研究。（三）分析性能評估本試劑盒分析性能評估內容主要包括：核酸提取或純化性提交了有效運行的質量管理體系下生產的六批產品在適用機型上的性能評估資料。1.核酸提取或純化性能在核酸提取性能研究中，申請人比較評估了不同核酸提取試劑和產品配套使用的核酸提取試劑的提取效果，結果表明配套使用的核酸提取或純化試劑的核酸提取效果滿足本產品使用需求。2.準確度重復性參考品和檢出限參考品，結果表明試劑盒檢測國家參考品結果均符合要求。性參考品、檢出限參考品和精密度參考品，結果表明試劑盒檢測企業參考品結果均符合要求。3.精密度臨界陽性和陰性樣本進行天的檢測，對批內、批間、日內、合率為100%Ct值的變異系數均不大于5.0%儀器間檢測結果均為陰性，陰性符合率為100%。4.檢出限梯度的臨床陽性樣本，將具有95%陽性檢出率的最低濃度水平的檢出限濃度為200copies/mL。5.分析特異性1.0×107copies/mL的31I單純皰疹病毒型、人類皰疹病毒6型、人類皰疹病毒7人類皰疹病毒8型、麻疹病毒、腸道病毒71型、梅毒螺旋體、濃度為100ng/μL的人類基因組）進行了研究。研究結果顯示上述特異性樣本均與試劑盒不產生交叉反應。能含有的干擾物質進行評價，包括：外源性干擾物質抗病毒藥100μg/mL100μg/mL咽部癥狀的含片、噴劑（桂林西瓜霜噴劑（100μg/mL）、西吡氯銨含片（100μg/mL））；過敏性癥狀緩解藥物（鹽酸組胺（100μg/mL100μg/mL100μg/mL抗生素（左氧氟沙星（100μg/mL）、阿奇霉素（100μg/mL）、100μg/mL藥物（撲熱息痛（100μg/mL）、對乙酰氨基酚（100μg/mL）、阿司匹林（100μg/mL））；全身性抗菌藥物（妥布霉素（100μg/mL（100μg/mL干擾物質粘蛋白（200mg/dL）、白蛋白（2.26mmol/L）和血液（25%干擾。6.包容性（Clade）猴痘病毒臨床樣本以及分支（CladeI）假病毒進行了包容性研究；同時經生物信息學分析數據庫中的猴痘序列；結果顯示均不會影響本產品的檢測。（四）陽性判斷值或參考區間研究曲線法以及百分位數法對通道陽性判斷值為Ct值等于40，VIC通道陽性判斷值為Ct值等于36。申請人進一步采用臨床樣本進行了陽性判斷值驗證確認。（五）穩定性研究申請人對本試劑盒的穩定性研究包括實時穩定性、使用穩定性、運輸穩定性和樣本穩定性。-20±5℃溫度條件下，每到一個時間節點取出進行外觀、陽性參劑盒在-20±5℃溫度條件下可穩定保存12個月。定性進行了研究，結果顯示產品的性能均滿足產品說明書聲稱的要求。三、臨床評價概述申請人在上海市公共衛生臨床中心、廣東省疾病預防控制中心、四川省疾病預防控制中心和深圳市第三人民醫院共四家機構完成了臨床試驗。臨床試驗共分為四部分：第一部分：采用試驗用體外診斷試劑與Sanger測序進行比較研究試驗，驗證本產品的臨床性能。共納入樣本本共包括例皮膚病變樣本和456例咽拭子樣本。試驗結果顯示，申報產品與對比試劑對于臨床樣本檢測的陽性符合率100.00%（95%CI98.91%100.00%（95%CI：97.94%，99.62%）。針對皮膚病變樣本，陽性符合率100.00%（95%CI：98.22%，100.00%），陰性符合率99.59%（95%CI：97.71%99.93%100.00%（95%CI：97.23%，100.00%），陰性符合率98.75%（95%CI：96.84%，99.51%）。第二部分：采用試驗體外診斷試劑與猴痘病毒培養鑒定進70例培養鑒定陽性樣本、100.00%（95%CI94.80%100.00%72.34%95%CI64.44%，79.06%）。第三部分：采用試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準進行例受試者，共包括例皮膚病變樣本和例咽拭子樣本。試驗結果顯97.09%（95%CI：94.37%98.52%100.00%（95%CI98.97%100.00%99.07%（95%CI96.67%99.74%，特異度為（95%CI98.42%100.00%樣本，靈敏度為88.54%（95%CI82.61%92.62%為100.00%95%CI：98.73%，100.00%AGS8830-16和7500兩種機型進行了一致性比對，共納入例樣本，包括皮膚病變樣本和咽拭100.00%95%CI：98.92%，100.00%），陰性符合率100.00%（95%CI：99.32%，100.00%申報產品與對比方法不一致的樣本，均結合臨床背景信息和其他檢測結果等進行了綜合分析。綜上所述，申報產品的臨床試驗資料符合技術審評要求。四、產品受益風險判定本試劑盒根據YY/T0316-2016醫療器械風險管理對本產品的安全風險分析方式，對本試劑盒進行產品受益風險判定。（一）受益評估本試劑盒用于體外定性檢測猴痘疑似病例、其他需要進行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物的拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。本產品用于猴痘病毒感染的輔助診斷，本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標準。建議結合患者臨床表現和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。（二）風險評估則判斷每個危險降低的風險、不經過風險收益分析既判定為不可接受的風險采取控制措施，并對具體措施進行實施驗證，同時重新對采取措施后的風險進行估計，確認其風險水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對主要剩余風險的規避，需要在說明書中提示以下信息：1.預期用途本試劑盒用于體外定性檢測猴痘疑似病例、其他需要進行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物的拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。有關“疑似病例痘防控技術指南》等文件執行。技術指南》等文件的相關要求。指南》等的要求，做好生物安全工作。本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標準。建議結合患者臨床表現和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。2.警示及注意事項產品說明書中介紹了該產品檢驗方法的局限性及使用中的注意事項。綜合評價意見本申報項目為境內第三類醫療器械產品注冊。申請人的注華人民共和國國務院令第號）、《體外診斷試劑注冊與備48器械法規與配套規章，經對申請人提交的注冊申報資料進行系平，建議準予注冊。2024年8月18日附件：產品說明書猴痘病毒核酸檢測試劑盒（熒光法）說明書【產品名稱】通用名稱：猴痘病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）【包裝規格】大包裝，24人份/盒；

大包裝，48人份/盒。【預期用途】本試劑盒用于體外定性檢測猴痘疑似病例、其他需要進行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。有關“疑似病例”等人群的定義參照《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術指南》等文件執行。本試劑盒在使用上應當遵守《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術指南》等文件的相關要求。開展猴痘病毒核酸檢測，應符合《猴痘病毒實驗室檢測技術指南》等的要求，做好生物安全工作。本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標準。建議結合患者臨床表現和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。【檢驗原理】本試劑盒利用實時熒光PCR技術，以猴痘病毒（MPXV）基因編碼區的高度保守區為靶區域，設計特

PCRDNARNase

P基因）檢測系統，用于對標本采集、核酸提取過程及PCR擴增過程的監控，可減少假陰性結果的出現。本試

DNAUDGdU的雙

鏈或者單鏈DNADNA從而被消除。【主要組成成分】組分名稱規格數量主要成分PCR檢測試劑（大包裝，24人份/盒）MPXVPCR反應液510μL/管1特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液AMPXVPCR反應液B105μL/管1熱啟動抗體酶、酶、dNTPs、UDG酶PCR檢測試劑（大包裝，48人份/盒）MPXVPCR反應液935μL/管1特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液AMPXVPCR反應液B195μL/管1熱啟動抗體酶、酶、dNTPs、UDG酶質控品MPXV陰性質控品450μL/管1MPXV內標片段（RNaseP（適用于大包裝，24人份/盒；大包裝，48人份/盒）MPXV目的片段的假病毒、MPXVRNaseMPXV陽性質控品450μL/管1P）的假病毒備注：不同批號試劑盒的以上成分不可以互換使用。需自備的試劑：核酸提取或純化試劑，使用本公司生產的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20170583號、

粵穗械備20170669號）或使用QIAGEN公司生產的DNeasyBlood&TissueKit（Cat.No.69504/69506）。

需自備的采樣液：推薦使用以下采樣液：（1）廣州達安基因股份有限公司的樣本保存液（粵穗械備20200802號、粵穗械備202012546mL/

管；（2）廣州達安基因股份有限公司的一次性使用采樣器（粵穗械備20201915號），3mL/管；（3）力因精

20190075號3mL/4）

江蘇康健醫療用品有限公司的一次性使用病毒采樣管（蘇泰械備20180169號3mL/5）深圳市梓健生

物科技有限公司的一次性使用病毒采樣管（粵深械備201900413mL/6）四川好培養生物工程有限

公司的一次性使用病毒采樣管（川蓉械備20200121號3mL/7）廣東牧瑪生命科技有限公司的一次性

使用病毒采樣管（粵莞械備202000243mL/8）山東享和醫療科技有限公司的一次性使用病毒采樣管

（魯菏械備20200227號3mL/9）江蘇默樂生物科技股份有限公司的一次性使用病毒采樣管（蘇泰械

備20200685號6mL/10201824002363.5mL/管；（11）賽默飛世爾科技（中國）有限公司的RPMI1640培養基（貨號：11875093），500mL/瓶；

（12）生理鹽水，即0.9%的氯化鈉水溶液，500mL/瓶。質控品說明：MPXV陽性質控品為MPXV目的片段的假病毒、MPXVRNasePMPXV

MPXVRNaseP在的傳染物質，操作和處理均需符合相關法規要求。【儲存條件及有效期】試劑盒保存于12個月。試劑盒應避免反復凍融，反復凍融次數不超過7次。試劑盒生產日期和有效期至見產品標簽。【適用儀器】ABI7500、AGS8830-16。【樣本要求】1.適用樣本類型：皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物拭子）、咽拭子。2.樣本采集：2.1皮疹表面和/或滲出物拭子采集：采樣時適當用力下壓拭子，在皮損表面來回擦拭至少2-3次，然后以拭子另一面再重復擦拭2-3次。如果在擦拭過程中痘皰破裂，要確保采集到痘皰液。采樣后將拭子放置于無菌采樣管中（可含病毒采樣液或不含液體），折斷拭子頭，去除拭子尾部，蓋上管蓋，以消毒紙巾擦拭消毒采樣管，以封口膜密封管蓋后將采樣管保存或送檢。2.2咽拭子采集：用拭子在被采集者兩側扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次，將拭子頭浸入含病毒保存液的管中或置于不含液體（干拭子）的無菌管中，尾部棄去，旋緊管蓋。3.樣本保存-20±5℃保存期為6-70復凍融，凍融次數不可超過7次。【檢驗方法】1.樣本處理和核酸提取（樣本處理區）使用本公司生產的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20170583號）或使用QIAGEN公司生產的DNeasy

Blood&TissueKit（Cat.No.69504/69506）取200μL樣本進行核酸提取，洗脫體積100μL；或使用本公司生產

的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20170669號）取200μL樣本進行核酸提取，洗脫體積50μL。

本試劑盒中的MPXV陰性質控品、MPXV2.PCR試劑準備（試劑準備區）從試劑盒中取出MPXVPCR反應液A、MPXVPCRB，室溫融化后振蕩混勻，瞬時離心數秒后使用。取N個（N＝待測樣本個數+MPXV陰性質控品+MPXV陽性質控品）PCR反應管

MPXV單人份擴增體系配制如下表：MPXVPCR反應液AMPXVPCR反應液B擴增體系17μL3μL20μL20μL擴增體系分裝到PCR管中。3.加樣（樣本制備區）往上述對應的PCRMPXVMPXV，

蓋緊管蓋。瞬時離心15秒后轉移至擴增檢測區。4.PCR擴增（擴增檢測區）4.1將反應管放入儀器樣品槽內。4.2ABI7500儀器設置4.2.1Reporter1Quencher1NONE2VICQuencher2：NONE；PassiveReference：NONE。4.2.2打開instrument窗口，設置循環條件如下：StageReps（℃）RunningDataCollection115000：02：219500：05：3459500：00：6000：00：√設置完成后，保存文件，運行程序。4.3AGS8830-16儀器設置4.3.1打開AGS8830-16儀器。4.3.2點擊自定義，設置程序。4.3.3程序參數：在程序參數頁面。擴增參數如下：程序段循環數目標溫度（℃）恒溫時間讀取熒光115000：02：219500：05：3459500：00：6000：00：√4.3.4染料參數：點擊染料參數頁面，在選擇當前程序染料設置（通道1，通道2VIC），然后選定樣品孔，并在樣本類型部分選擇：陰性質控品、陽性質控品、未知樣品等。4.3.5啟動擴增：確認PCR反應管在主機內放置妥當后，點擊開始按鈕開始PCR循環。4.3.6監控進程：切換程序運行頁面，可以實時顯示PCR曲線隨著循環增加而逐步增長的實際情況。如果標記物

選、VIC，只顯示對應探針的變化情況。4.3.7保存結果：程序結束后，自動保存到文件路徑。5.結果分析（請參照各儀器使用說明書進行設置，以7500儀器為例）

Baseline的StartEnd值以及ThresholdStart3～15End值可設在520Log圖譜窗口設置Threshold的閾值線位于擴增曲線指數期），點擊Analysis自動獲得分析結果，在“Report”窗口讀取檢測結果。6.質量控制MPXV陰性質控品：檢測通道無擴增曲線或Ct值＞40VIC檢測通道有擴增曲線，且Ct值≤35；

MPXV陽性質控品：檢測通道有擴增曲線，且Ct值≤32，VIC檢測通道有擴增曲線，且Ct值≤35；

以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行。【陽性判斷值】根據臨床樣本檢測結果，最終確定本試劑盒的目標基因陽性判斷值為Ct值=40；內標陽性判斷值為Ct值=

36。【檢驗結果的解釋】1.每次實驗均需檢測MPXVMPXV陽性質控品，質控品結果滿足質量控制要求時方可進行檢測結果的判定。2.在質控品正常的情況下，結果判讀如下：陰性結果判定：若檢測樣品的檢測通道無擴增曲線，且VIC通道有擴增曲線，≤36,可判樣品為

MPXV陰性；通道VIC通道結果判定陰性結果判定Ct值＞40Ct值Ct值≤36值陰性陽性結果判定：若檢測樣品的檢測通道有擴增曲線且Ct值≤40VIC檢測通道有或無擴增曲線，可判樣品為MPXV陽性。通道VIC通道結果判定陽性結果判定Ct值≤40有或無擴增曲線陽性3.檢測通道為陽性時，由于體系的競爭關系，VIC通道（內標通道）結果可能為陰性；4.內標結果為陰性時，若該檢測管的檢測通道也為陰性，可能是因為體系受抑制或操作失誤，試驗無效，

需對該樣品進行復檢；5.報告建議采用以下格式：陰性結果報告格式為：樣本未檢測到猴痘病毒，或樣本濃度低于本試劑盒的靈敏度；

陽性結果報告格式為：樣本檢測到猴痘病毒。【檢測方法的局限性】1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送及保存質量有關，不合理的樣本采集、轉運、儲存及處理以及不當的實驗操作和實驗環境均有可能導致錯誤的檢測結果。2.如果樣本在運輸、處理過程中發生交叉污染，則可能導致假陽性結果。3.實驗室環境有PCR產品等氣溶膠污染，則可能導致假陽性結果。4.實驗過程中使用耗材、設備等受污染，則可能導致假陽性結果。5.不合理的樣本采集、轉運、儲存及處理、樣本中病原體含量過低均有可能導致假陰性結果。6.該病原體待測靶序列的變異或其他原因導致的序列改變可能會導致假陰性結果。7.未經驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導致假陰性結果。8.本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。【產品性能指標】1.本試劑盒的最低檢出限為200copies/mL，檢測試劑盒靶區范圍內的國家檢出限參考品，濃度不低于聲稱檢出限水平的稀釋度檢測結果為陽性。2.100P1~P3P1檢測結果為陽性，

P2P3檢測結果為陰性；企業陰性參考品符合率為100％；檢測國家陰性參考品（N1~N10），N1~N10結果均

為陰性。3.企業精密度參考品通道Ct值的變異系數均不高于R3檢測結果為

陰性；檢測試劑盒靶區范圍內的國家重復性參考品，10次檢測結果均為陽性，且通道Ct值的變異系數

（CV，）不高于5.0%。4.1.0×107-帶

I67皰疹病毒8型、麻疹病毒、腸道病毒71型、梅毒螺旋體、登革病毒、金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、丙酸桿菌、類白喉桿菌、人乳頭瘤病毒、糞腸球菌、棒狀桿菌、大腸桿菌、生殖支原體、沙眼衣原體以及高濃度人類基因組（100ng/μL）無交叉反應。5.100μg/mL100μg/mL緩解咽部癥狀的含片、噴劑（桂林西瓜霜噴劑（100μg/mL）、西吡氯銨含片（100μg/mL））、過敏性癥狀緩解

100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL對乙酰氨基酚（100μg/mL100μg））、全身性抗菌藥物（妥布霉素（100μg/mL（100μg/mL）對試劑盒的檢測結果無干擾。6.200mg/dL蛋2.26mmol/L2