2025屆甘肅省玉門一中高三第二次調研生物試卷注意事項：1．答卷前，考生務必將自己的姓名、準考證號填寫在答題卡上。2．回答選擇題時，選出每小題答案后，用鉛筆把答題卡上對應題目的答案標號涂黑，如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其它答案標號?；卮鸱沁x擇題時，將答案寫在答題卡上，寫在本試卷上無效。3．考試結束后，將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．利用反滲透法可以淡化海水。反滲透法指的是在半透膜的原水一側施加適當強度的外界壓力，原水透過半透膜時，只允許水透過，其他物質不能透過而被截留在原水一側半透膜表面的過程。下列相關敘述錯誤的是（）A．滲透作用發生的必備條件是有半透膜和膜兩側有濃度差B．反滲透法淡化海水時，施加的外界壓力應大于海水滲透壓C．植物的原生質層相當于一種具有選擇透過性的半透膜D．反滲透法淡化海水時，所用半透膜上含有多種載體蛋白2．白花三葉草有兩個品種：葉片內含較高水平氰(HCN)的品種和不含氰的品種，由兩對獨立遺傳的基因控制。其代謝過程如圖所示：兩個不含氰的品種雜交，F1全部含有較高水平氰，F1自交獲得F2，則（）A．兩親本的基因型為DDhh(或Ddhh)和ddHH(或ddHh)B．氰產生后主要儲存在葉肉細胞溶酶體中C．向F2不含氰品種的葉片提取液中加入含氰葡萄糖苷，約有3/7類型能產生氰D．F2中高含氰品種∶不含氰品種＝15∶13．下列疾病中，不可能從患者傳遞給下一代的是（）A．21-三體綜合征 B．特納氏綜合征 C．艾滋病 D．多指4．空氣中的微生物在重力等作用下會有一定程度沉降。某生物興趣小組欲利用平板培養基測定教室內不同高度空氣中微生物的分布情況。下列關于實驗的敘述不正確的是A．在配制培養基時必須添加瓊脂等凝固劑成分B．將平板培養基放置在教室相同地點的不同高度C．本實驗需要設置不開蓋的平板培養基作為對照D．菌落數在30-300之間的平板才可以用于計數5．在光合作用中，某種酶能催化CO2＋C5→2C3。為測定該酶的活性，某學習小組從菠蘿葉中提取該酶，在適宜條件下，用其催化C5與14CO2的反應，并檢測產物C3的放射性強度。下列分析錯誤的是（）A．該酶催化的上述反應過程為CO2的固定B．該酶存在于菠菜葉肉細胞的葉綠體基質C．該酶催化的上述反應需要在黑暗條件下進行D．單位時間內C3的放射性越高說明該酶活性越強6．下列關于泡菜中亞硝酸鹽含量測定的操作順序正確的是①配制溶液②制備樣品處理液③制備標準顯色液④比色A．③②①④ B．②③④① C．①③②④ D．③①②④7．科學家發現，當神經元興奮時神經細胞上的Ca2+通道開放，Ca2+進入細胞內引起細胞內Ca2+濃度升高。囊泡上的突觸結合蛋白是游離Ca2+的受體，Ca2+和突觸結合蛋白結合后，使囊泡融合蛋白與突觸前膜上某種物質結合形成穩定的結構，這樣囊泡和突觸前膜融合，使神經遞質釋放到突觸間隙（圖）。下列有關敘述正確的是（）A．乙酰膽堿與突觸后膜受體的結合過程主要由①提供能量B．突觸前膜所在神經元特有的基因決定了囊泡和突觸前膜的融合位置C．②興奮時，膜內電位由負電位變為正電位，并將電信號轉化為化學信號D．若突觸前膜上的Ca2+通道被抑制，刺激突觸前神經元，會使③的膜電位發生變化。8．（10分）生物膜上常附著某些物質或結構以與其功能相適應。下列相關敘述正確的是A．內質網和高爾基體膜上附著核糖體，有利于對多肽鏈進行加工B．葉綠體內膜上附著光合色素，有利于吸收、傳遞和轉化光能C．線粒體內膜上附著與細胞呼吸有關的酶，有利于分解丙酮酸D．細胞膜上附著ATP水解酶，有利于主動吸收某些營養物質二、非選擇題9．（10分）下圖為某家族甲、乙兩種遺傳病的系譜圖。甲病由一對等位基因（A、a）控制，乙病由另一對等位基因（B、b）控制，兩對等位基因獨立遺傳。已知Ⅲ4攜帶甲病的致病基因，正常人群中甲病基因攜帶者的概率為4%。下表是①～④群體樣本有關乙病調查的結果，請分析題意回答下列有關問題：（1）據圖分析，甲病的遺傳方式為__________，判斷乙病的遺傳方式要根據系譜圖及表中的__________類家庭。Ⅲ3的兩對等位基因均為雜合的概率為_________。（2）若Ⅳ1與一個正常男性結婚，則他們生一個只患乙病男孩的概率是__________。若Ⅳ4與一個正常女性結婚，則他們生一個表現型正常的女孩，她是甲病基因攜帶者的概率__________。（3）下列屬于遺傳咨詢范疇的有__________。A．詳細了解家庭病史B．推算后代遺傳病的再發風險率C．對胎兒進行基因診斷D．提出防治對策和建議（4）若Ⅰ1同時患線粒體肌?。ㄓ删€粒體DNA異常所致），則Ⅱ2、Ⅱ3__________（填“均患該病”、“均不患該病”或“無法確定”）。若Ⅲ2同時患克氏綜合征，其性染色體為XXY，其兩條X染色體分別來自外祖父和外祖母，說明Ⅲ2患克氏綜合征的原因是__________。（5）若乙病遺傳情況調查中共調查1000人（其中男500人，女500人），調查結果發現患者25人（其中男20人，女5人），如果在該人群中還有15個攜帶者，則b基因的頻率是__________。10．（14分）紅耳龜原產美洲，作為寵物引入我國。由于寵物棄養和放生行為，紅耳龜野外種群數量逐漸增大，對當地的生物多樣性造成威脅。為研究紅耳龜入侵對當地生態系統的影響，科研人員對當地紅耳龜的種群數量和食性進行了調查。請回答下列問題：（1）紅耳龜屬于生態系統成分中的消費者，其同化的能量，一部分在________過程中散失，一部分可用于________。（2）紅耳龜的_______及遷入率和遷出率是決定其種群密度和種群大小的直接因素。調查描述、解釋和預測紅耳龜種群數量的變化時，常常需要建立_____模型。（3）研究人員調查了該地區龜鱉類的種群個體數量，結果如下表所示。紅耳龜烏龜中華花龜中華鱉蛇鱷龜數目（只）14820841調查結果發現，目前該地區龜鱉類的優勢種是_________。由于紅耳龜的入侵，導致當地的群落結構發生明顯改變，這種變化過程稱為________。（4）為研究紅耳龜的食性，研究人員解剖了紅耳龜和本地龜類--中華花龜，統計它們胃內殘余食物種類及出現次數，發現中華花龜胃內僅有久雨花科、莧科和魚類三種食物。紅耳龜的殘余食物統計結果如圖所示。①紅耳龜與中華花龜的種間關系屬于______，判斷依據______________。②紅耳龜入侵后，得以迅速繁殖，原因可能是_______________________。③紅耳龜的捕食行為還可能會引起本地的魚類、貝類等生物的種群密度下降，嚴重時會使當地的物種________降低，影響該生態系統的________能力。11．（14分）人類是乙型肝炎病毒的唯一宿主，肝硬化、肝癌多從乙肝發展而來。接種乙肝疫苗是預防乙肝病毒感染的最有效方法。下圖為“乙肝基因工程疫苗”的生產和使用過程。質粒中lacZ基因可使細菌利用加入培養基的物質X-gal，從而使菌落顯現出藍色，若無該基因，菌落則成白色。（1）過程①需要用到限制酶和_____________酶。根據質粒和目的基因所在DNA上酶切位點的分布情況，如果過程①用一種限制酶應選_____________，如果用兩種限制酶應選_____________。（2）在該項目中青霉素抗性基因作為_____________基因；目的基因的具體功能是_____________。（3）在培養大腸桿菌的通用培養基中還應額外加入青霉素和X-gal，培養一段時間挑選出_____________（藍色/白色）的菌落進一步培養獲得大量目的菌。（4）血源性“乙型肝炎疫苗”是取用乙肝病毒感染者的血液，用高速離心提純血液中的乙肝病毒，之后再滅活，制成乙肝疫苗，具有一定的感染風險。用基因工程疫苗接種比血源性疫苗更安全，試從疫苗的結構特點解釋原因：__________________________。12．大千世界，無奇不有，澳大利亞布里斯班一對現年4歲的小姐弟，被確認為全球歷來第二對半同卵雙胞胎。該對半同卵雙胞胎的受精及胚胎發育過程如下圖所示。（1）圖1表示該異常胚胎的受精過程，此時卵母細胞發育到哪一個階段？__________________。該卵母細胞與2個精子受精，這種情況極其罕見，因為機體具有兩道防止多精入卵受精的屏障，包括__________________。（2）圖2細胞中包含3個原核，為_________（填原核數量），正常情況下，這種受精卵無法正常發育。但是，該受精卵在母體內神奇的恢復了正常分裂，如圖3所示。此時受精卵形成了3極紡錘體，并最終分裂成3個合子（圖4）。其中，其中一個合子由1個父系染色體組和1個母系染色體組組成，則另外兩個合子的染色體組為：__________。請從染色體組成角度推測這3個合子的發育結果。包含1個父系染色體組和1個母系染色體組的兩個合子正常發育、而僅包含兩個父系染色體組的合子發育失敗。最終該名母親成功誕下兩名性別不同的嬰兒，這兩名嬰兒的染色體組中，來源于母系的染色體________，來源于父系的染色體___________（填相同、不相同或無法確定）。（3）胚胎工程的實施建立在對哺乳動物的體內受精和早期胚胎發育的規律基礎之上。胚胎工程是對_________進行的多種顯微操作和處理技術，如_________（寫出兩個就可以）等技術。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、D【解析】

1、滲透作用發生的條件是具有半透膜、膜兩側具有濃度差，在滲透裝置中，水分子從低濃度溶液中通過半透膜進入高濃度溶液中的多，從而使玻璃管內的液面發生變化。2、當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞就會通過滲透作用而失水，細胞液中的水分就透過原生質層進入到溶液中，使細胞壁和原生質層都出現一定程度的收縮，由于原生質層比細胞壁的收縮性大，當細胞不斷失水時，原生質層就會與細胞壁分離。【詳解】A、滲透作用發生的必備條件是有半透膜和膜兩側有濃度差，A正確；B、根據題干信息“在半透膜的原水一側施加適當強度的外界壓力，原水透過半透膜時，只允許水透過”，可以推測，施加的外界壓力應大于海水滲透壓才能迫使海水通過半透膜，B正確；C、植物的原生質層相由細胞膜、液泡膜及之間的細胞質組成，細胞膜和液泡膜都具有選擇透過性，所以整個原生質層相當于一種具有選擇透過性的半透膜，C正確；D、反滲透法淡化海水時，所用的是人工合成的半透膜，不含有載體蛋白，D錯誤。故選D?！军c睛】本題根據滲透作用的原理，設置反滲透作用的情景，考生需要根據題干信息，理解反滲透作用的原理，同時結合滲透作用進行分析。2、C【解析】

根據題意分析可知，兩對基因獨立遺傳，因此遵循基因的自由組合定律。從圖解中可以看出，D基因和H基因同時存在時才能生成HCN，即D_H_表現為葉片內含較高水平氰（HCN）的品種，其余均為不含氰品種?！驹斀狻績捎H本的基因型為DDhh和ddHH，子代為DdHh，全部含有較高水平氰，而當兩親本的基因型為Ddhh和ddHh時，子代會出現不含氰的品種，A錯誤；氰產生后主要儲存在葉肉細胞液泡中，B錯誤；F2不含氰的品種有3D_hh：3ddH_：1ddhh，其中品種ddH_不能產生葡萄糖苷，但是加入含氰葡萄糖苷能產生氰，所占比例為3/7，C正確；已知F1為DdHh，則F2為9D_H_：3D_hh：3ddH_：1ddhh，因此高含氰品種：不含氰品種=9：7，D錯誤。3、B【解析】

可遺傳變異包括基因突變、基因重組和染色體變異，基因重組包括自由組合型和交叉互換型；染色體變異包括染色體數目改變和染色體結構變異，染色體結構變異包括染色體片段的缺失、重復、易位和倒位?！驹斀狻緼、21-三體綜合征是常染色體遺傳遺傳病，可以遺傳給下一代，A錯誤；B、特納氏綜合征是性染色體異常遺傳病，患者無生殖能力，因此不能遺傳給下一代，B正確；C、艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征，屬于傳染病，可能從患者傳遞給下一代，C錯誤；D、多指是單基因遺傳病，可以遺傳給下一代，D錯誤。故選B。4、D【解析】

依題文可知，本實驗需用固體培養基，實驗自變量是教室相同地點的不同高度，以此相關知識做出判斷?！驹斀狻緼、平板為固體培養基，故需要加入瓊脂等凝固劑成分，A正確；B、根據實驗目的可知，自變量是教室相同地點的不同高度，所以需將平板培養基放置在教室相同地點的不同高度，B正確；C、本實驗需要設置不開蓋的平板培養基作為對照，不同高度下放置開蓋平板培養基進行實驗，C正確；D、為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數，D錯誤。故選D。5、C【解析】

光合作用包括光反應階段和暗反應階段。（1）光反應階段在葉綠體囊狀結構薄膜上進行，此過程必須有光、色素、化合作用的酶。具體反應步驟：①水的光解，水在光下分解成氧氣和還原氫。②ATP生成，ADP與Pi接受光能變成ATP。此過程將光能變為ATP活躍的化學能。（2）暗反應在葉綠體基質中進行，有光或無光均可進行，反應步驟：①二氧化碳的固定，二氧化碳與五碳化合物結合生成兩個三碳化合物。②三碳化合物的還原，三碳化合物接受還原氫、酶、ATP生成有機物。此過程中ATP活躍的化學能轉變成化合物中穩定的化學能。光反應為暗反應提供了[H]和ATP，[H]和ATP能夠將三碳化合物還原形成有機物?！驹斀狻緼、該酶能催化CO2＋C5→2C3，為CO2的固定過程，A正確；B、該酶催化暗反應中的二氧化碳的固定，該過程發生在葉肉細胞的葉綠體基質中，B正確；C、暗反應有光無光都能進行，C錯誤；D、C3屬于反應產物，單位時間內C3的放射性越高說明反應越快，該酶活性越強，D正確。故選C。6、C【解析】

測定亞硝酸鹽含量的操作步驟是：配制溶液，制備標準顯色液，制備樣品處理液，比色等幾個步驟。【詳解】由分析可知，亞硝酸鹽含量的測定的一般步驟是配制溶液→制備標準顯色液→制備樣品處理液→比色。

故選C?！军c睛】本題旨在考查學生對亞硝酸鹽含量檢測的一般步驟的熟練識記。7、C【解析】

神經元之間接觸的部位，由一個神經元的軸突末端膨大部位--突觸小體與另一個神經元的細胞體或樹突相接觸而形成；突觸包括突觸前膜、突觸間隙和突觸后膜三部分；神經遞質存在于突觸小體的突觸小泡中，由突觸前膜以胞吐的形式釋放到突觸間隙，作用于突觸后膜，興奮在突觸處傳遞的形式是電信號→化學信號→電信號?！驹斀狻緼、乙酰膽堿和受體的結合不需要能量，A錯誤；B、神經元內的基因和其他細胞的基因相同，所以決定囊泡和突觸前膜融合位置的基因并不是突觸前膜所在神經元特有的基因，B錯誤；C、②是突觸前膜，興奮時膜內電位由負電位變為正電位，促進遞質的釋放，并在此將電信號轉化為化學信號，C正確；D、若突觸前膜上的Ca2+通道被抑制，Ca2+不能內流，使乙酰膽堿不能正常釋放，阻礙了興奮的傳遞，不能使突觸后膜③的電位發生變化，D錯誤。故選C。【點睛】本題需要考生掌握興奮在神經元之間的傳遞過程，結合題干中“Ca2+”的作用進行解答。8、D【解析】部分內質網膜上附著核糖體，高爾基體膜是都沒有核糖體附著，A錯誤；真核細胞內光合色素只分布在葉綠體內的類囊體薄膜上，B錯誤；線粒體內膜上附著與細胞呼吸有關的酶，是有利于[H]和O2結合生成水的酶，C錯誤；細胞膜上附著ATP水解酶，水解ATP釋放的能量可直接供應于主動吸收某些營養物質，D正確。二、非選擇題9、常染色體隱性遺傳②2/3497/400022/71ABD均患該?、?形成卵細胞過程中的減數第一次分裂兩條X染色體未分離3%【解析】

分析系譜圖：Ⅱ1和Ⅱ2都不患甲病，但他們有一個患甲病的兒子（Ⅲ2），說明甲病是隱性遺傳病，但I1的兒子正常，說明甲病是常染色體隱性遺傳病。Ⅲ3和Ⅲ4都不患乙病，但他們有患乙病的孩子，說明乙病是隱性遺傳病，可能是常染色體隱性遺傳病，也可能是伴X染色體隱性遺傳病?！驹斀狻浚?）根據系譜圖分析可知：甲病是常染色體隱性遺傳病，乙病是隱性遺傳病。乙病為隱性遺傳病，可能是常染色體隱性遺傳病，也可能是伴X染色體隱性遺傳病，再結合表格中②號家庭中“母病子病，父正女正”的特點可知，該病為伴X染色體隱性遺傳病。就甲病而言，Ⅲ3的父母均為Aa，則其基因型及概率為1/3AA、2/3Aa；就乙病而言，Ⅲ3的基因型為XBXb。因此，Ⅲ3兩對等位基因均為雜合的概率為2/3×1=2/3。（2）從患甲病角度分析，Ⅲ3的基因型及概率為1/3AA、2/3Aa，Ⅲ4攜帶甲病的致病基因，則Ⅲ4的基因型為Aa，可推知后代為AA的概率為1/3×1/2+2/3×1/4=1/3，Aa的概率為1/3×1/2+2/3×1/2=1/2，則IV1為Aa的概率為Aa/（AA+Aa）=3/5。正常人群中甲病基因攜帶者的概率為4%，因此IV1與人群中一個正常男性結婚，后代患甲病的概率為3/5×4%×1/4=3/500；從患乙病角度分析，Ⅲ3的基因型為XBXb，Ⅲ4不攜帶乙病的致病基因，則Ⅲ4的基因型為XBY，可推知IV1的基因型及概率為1/2XBXB、1/2XBXb，其與正常男性婚配，后代患乙病的概率為1/2×1/2=1/4。因此，若IV1與一個正常男性結婚，則他們生一個只患乙病男孩的概率是（1-3/500）×1/4×1/2=497/4000。就甲病而言，IV4為AA的概率為2/5，Aa的概率為3/5，其與一個正常女性結婚（正常人群中甲病基因攜帶者的概率為4%，即AA的概率為96%，Aa的概率為4%），則他們所生孩子的基因型為AA的概率為2/5×96%+2/5×4%×1/2+3/5×96%×1/2+3/5×4%×1/4，Aa的概率為2/5×4%×1/2+3/5×96%×1/2+3/5×4%×1/2，則他們所生表現型正常的女孩是甲病基因攜帶者的概率為Aa/（AA+Aa）=22/71。（3）遺傳咨詢的內容和步驟：醫生對咨詢對象進行身體檢查，了解家庭病史，對是否患有某種遺傳病作出診斷；分析遺傳病的傳遞方式；推算出后代的再發風險率；向咨詢對象提出防治對策和建議，如終止妊娠、進行產前診斷等，ABD正確。故選ABD。（4）線粒體中DNA的遺傳特點是母系遺傳，即母病子全病。因此，若I1同時患線粒體肌病（由線粒體DNA異常所致），則Ⅱ2、Ⅱ3均患病。若Ⅲ2同時患克氏綜合征，其性染色體為XXY，其兩條X染色體分別來自外祖父和外祖母，說明Ⅲ2的兩條X染色體都來自母親Ⅱ2，且為一對同源染色體，則其患克氏綜合征的原因是Ⅱ2形成卵細胞過程中的減數第一次分裂兩條X染色體未分離。（5）假設乙病遺傳情況調查中共調查1000人（其中男性500人，女性500人），調查結果發現患者25人（其中男性20人，女性5人），如果在該人群中還有15個攜帶者，則b基因的頻率是b/（B+b）=（20+5×2+15）/（500+500×2）×100%=3%?！军c睛】本題結合系譜圖，考查基因自由組合定律及應用，伴性遺傳及應用，首先要求考生能根據系譜圖和題干信息“Ⅲ4攜帶甲遺傳病的致病基因，但不攜帶乙遺傳病的致病基因”判斷甲、乙的遺傳方式；其次根據表現型推斷出相應個體的基因型；再利用逐對分析法解題。10、呼吸作用自身的生長、發育和繁殖出生率和死亡率數學紅耳龜群落演替競爭紅耳龜和中華花龜均可以久雨花科、莧科和魚類為食當地物種中缺少天敵的制約，食物和生存空間較充足豐富度（種類）自我調節【解析】

1、生態系統的成分包括生產者、消費者、分解者和非生物的物質和能量。2、生態系統具有一定的自我調節能力，但這種能力是有一定限度的，如果外界干擾超過這個限度，生態系統就會遭到破壞。3、種群密度是種群數量的最基本特征，影響種群密度的因素包括出生率、死亡率、遷入率和遷出率，研究種群數量的變化常用數學模型。4、常見的種間關系包括捕食、競爭、互利共生和寄生?！驹斀狻浚?）紅耳龜屬于生態系統成分中的消費者，其同化量的去向包括呼吸作用消耗和用于自身生長、發育和繁殖的能量。（2）決定種群密度的直接因素是出生率、死亡率、遷入率和遷出率。研究種群數量的變化時常用數學模型。（3）據表分析可知，紅耳龜的數量占絕對優勢，故該地區龜鱉類的優勢種是紅耳龜。由于紅耳龜的入侵，導致當地的群落結構發生明顯改變，這種變化過程稱為群落演替。（4）①依據紅耳龜和中華花龜都會以久雨花科、莧科和魚類三種生物為食可知，紅耳龜與中華花龜為競爭關系；②由于缺少天敵的制約，食物和生存空間較充足，紅耳龜入侵后會迅速繁殖；③紅耳龜屬于外來物種，大量捕食該生態系統中的其他物種，可以使當地生物多樣性銳減，物種的豐富度降低，影響該生態系統的自我調節能力。【點睛】本題考查了生態系統的組成成分、生態系統的能量流動、種群密度、種間關系及生態系統的穩定性等知識，題目相對簡單，主要考查考生的識記和理解能力。11、DNA連接BamHIBamHI和EcoRI標記控制病毒蛋白外殼的合成白色該疫苗不含遺傳物質，不會出現病毒感染和增殖【解析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA—分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質—抗原-抗體雜交技術；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。圖中表示的是通過基因工程獲得疫苗和產生相應抗體的過程圖，過程①表示基因表達載體的構建，過程②表示將目的基因導入受體細胞，過程③表示目的基因的表達?！驹斀狻浚?）過程①表示基因表達載體的構建，需要用到限制酶和DNA連接酶。根據質粒和目的基因所在DNA上酶切位點的分布情況，有兩種選擇限制酶的方案，只選擇BamHⅠ既能將目的基因切下，也能切割質粒，在獲取目的基因和切割質粒時，使目的基因和質粒兩端產生相同的黏性末端，而在連接酶作用會出現自身環化、目的基因自身與自身連接、質粒自身與自身連接、目的基因與質粒連接多種情況，需要篩選；用兩種限制酶切割，質粒和目的基因兩端不會形成相同黏性末端，在連接酶作用下不會發生環化還可以防止反向連接，最終在連接酶作用下只會出現目的基因與質粒成功重組和沒有進行重組的質粒，如果過程①用一種限制酶則應選BamHI，如果用兩種限制酶應選BamHI和EcoRI。（2）在該項目中青霉素抗性基因作為標記基因，便于篩選鑒定；根據圖中④目的基因最終產生乙肝病毒外殼進行接種，說明該目的基因具體功能是控制病毒蛋白外殼的合成。（3）在培養大腸桿菌的通用培養基中