1.利用基因工程技術生產藥物的優點？答：1大量生產過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽，為臨床使用提供有效的保障；2、可以提供足夠數量的生理活性物質，以便對其生理、生化和結構進行深入的研究，從而擴大這些物質的應用范圍；3、可以發現、挖掘更多的內源性生理活性物質；4、內源生理活性物質在作為藥物使用時存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質工程進行改造和去除；5、可獲得新型化合物，擴大藥物篩選來源。2.基因工程藥物制造的主要程序有哪些？基因工程藥物制造的主要步驟有：目的基因的克隆，構造DNA重組體，構造工程菌，目的基因的表達，外源基因表達產物的分離純化產品的檢驗逆轉錄法：逆轉錄法就是先分離純化目的基因的mRNA，再反轉錄成cDNA，然后進行cDNA的克隆表達。⒈mRNA的純化⒉cDNA第一鏈的合成⒊cDNA第二鏈的合成⒋cDNA的克隆⒌將重組體導入宿主細胞：⒍cDNA文庫的鑒定：抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法⒎目的cDNA克隆的分離和鑒定：核酸探針雜交法、免疫反應鑒定法4．基因工程宿主菌應滿足那些要求？答：1、容易獲得較高濃度的細胞；2能利用廉價易得的原料；3、不致病、不產生內毒素；4、發熱量低，需氧低，適當的發酵溫度和細胞形態；5、容易進行代謝調控；6、容易進行DNA重組技術操作；7、產物的產量、產率高，產物容易提取。5.表達載體須具備哪些條件？常用載體有哪些？答：1、能夠在宿主細胞中復制并穩定地保存。2、具多個限制酶切點，但每種切口最好只有1個，以便與外源基因連接。3、具有某些標記基因，便于進行篩選。4、所產生的mRNA必須有翻譯的起始信號。5、具有很強的啟動子。6、有很強的終止子。常用載體有：1、細菌細胞的質粒。2、λ噬菌體載體。6。真核基因在原核細胞中表達載體必須具備條件⑴載體能夠獨立復制。載體本身是一個復制子，具有復制起點。⑵應具有靈活的克隆位點和方便的篩選標記，以利于外源基因的克隆鑒定和篩選。⑶應具有很強的啟動子，能為大腸桿菌RNA聚合酶所識別。⑷應具有阻遏子，使啟動子受到控制，只有當誘導時才能進行轉錄。⑸應具有很強的終止子，只轉錄克隆的基因，所產生的mRNA較為穩定。⑹所產生的mRNA必須具有翻譯的起始信號AUG和SD序列，以便轉錄后順利翻譯。影響目的基因在酵母菌中表達的因素⑴外源基因的拷貝數：⑵外源基因的表達效率；⑶表達產物的穩定性；⑷細胞代謝負荷：⑸工程菌的培養條件8.影響目的的基因在大腸桿菌中表達的因素有哪些？（1）外源基因的計量（2）外源基因的表達效率：a、啟動子的強弱b、核糖體的結合位點c、SD序列和起始密碼的間距d、密碼子組成（3）表達產物的穩定性（4）細胞的代謝付荷（5）工程菌的培養條件9真核基因在大腸桿菌中的表達形式？答：有三種形式：(1)融合蛋白的表達形式。（由一段短的原核多肽和真核蛋白結合在一起的蛋白質,稱為融合蛋白.。）(2)非融合蛋白的表達形式。(3)分泌型表達形式。10質粒不穩定分為哪些類，產生的機制是什么？質粒不穩定分為分裂分為分裂不穩定和結構不穩定。質粒的分裂不穩定是指工程菌分裂時出現一定比例不含質粒的子代菌的現象；質粒的結構不穩定是DNA從質粒上丟失或堿基重排，缺失所致工程菌性能的改變?；蚬こ叹倪z傳不穩定性的的產生機制1．受體細胞中的限制修飾系統對外源重組DNA分子的降解2．外源基因的高效表達嚴重干擾受體細胞正常的生長代謝3．重組質粒在受體細胞分裂時的不均勻分配，這是重組質粒逃逸的基本原因4．受體細胞中內源性的轉座元件促進重組分子的缺失重排12分離純化工藝應遵循以下原則：⑴具有良好的穩定性和重復性⑵盡可能減少組成工藝的步驟⑶各技術步驟間要相互適應和協調⑷工藝過程中盡可能少用試劑⑸工藝所用時間要短⑹工藝和技術必須收率高、易操作、能耗低⑺具有較高的安全性16、動物細胞的生理特點（⒈）動物細胞的分裂周期長：（⒉）細胞生長需貼附于基質，并有接觸抑制現象。（⒊）正常二倍體細胞的生長壽命是有限的。原代培養；（4)動物細胞對周圍環境十分敏感：對理化因素敏感，(⒌)動物細胞對培養基要求高：必需氨基酸（12種）、維生素（8種）、無機鹽、微量元素、葡萄糖、細胞生長因子、貼壁因子等。(⒍)動物細胞蛋白質的合成途徑和修飾功能與細菌不同。19動物細胞的培養條件和培養基細胞體外培養基本條件:①無菌②營養充足,防止有害物質③氧氣④隨時清除代謝有害物質⑤良好的生存外環境：pH、滲透壓、離子濃度⑥及時分種，適當的細胞密度20、動物細胞的培養基的種類和組成⒈天然培養基：血清、羊水、腹水等。成分復雜、成分不穩定，來源少。2.合成培養基（常用培養基成分及配方）⑴氨基酸⑵維生素⑶糖類⑷無機鹽⑸其它成分添加小牛血清的作用⑴提供生長因子和激素⑵提供貼附因子和伸展因子⑶提供結合蛋白（識別離子、激素、維生素、脂質）⑷提供必需脂肪酸和微量元素3.無血清培養基優點：①提高重復性（細胞）②減少微生物污染（病毒）③供應充足穩定④細胞產品易純化⑤避免血清因素對細胞的毒性⑥減少血清中蛋白對生物測定的干擾21、動物細胞大規模培養的方法1.懸浮培養2.貼壁培養3.貼壁-懸浮培養（假懸浮培養）23、動物細胞培養的操作方式1.分批式操作2.半連續式操作3.灌流式操作:取出、補充培養基，細胞仍保留在反應器內。優點：1.營養好，代謝廢物少。2.細胞密度高（107～108個/mL）產量高。3.產品罐內停留時間短。4.培養基比消耗率低。24的動物細胞生物反應器的基本要求1.生物反應器的材料無毒2.生物反應器的結構：滿足傳質、傳熱、混合的功能3.密封良好，避免污染4.自動檢測、調節控制精度高5.長期連續運轉6.容器內表面光滑，無死角7.拆裝、連接、清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒8.設備成本低25植物無菌培養：（1）幼苗及植株的培養（2）愈傷組織培養（外植體，細胞聚集體）（3）懸浮培養（單細胞或小細胞