SNT 1611-2013 南方菜豆花葉病毒血清學(xué)檢測方法_第1頁
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中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)南方菜豆花葉病毒血清學(xué)檢測方法I 1南方菜豆花葉病毒血清學(xué)檢測方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了植物檢疫中南方菜豆花葉病毒基于血清學(xué)的DAS-ELISA、免疫電鏡和免疫捕獲RT-PCR等檢測方法。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文SN/T2122進(jìn)出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣SN/T1840植物病毒免疫電鏡檢測方法3南方菜豆花葉病毒基本信息傳播途徑：病毒可能以循環(huán)型方式由葉甲傳播。菜豆種傳機率1%～5%,豇豆種傳機率為5%~40%。實驗中易于機械接種傳播。該病毒的其他相關(guān)資料參見附錄A。SBMV是直徑約30nm的球狀粒子，為有效的免疫源，可制備高效價的抗血清。在此基礎(chǔ)上建立疫捕獲RT-PCR驗證方法。5儀器設(shè)備和主要試劑振蕩器。234吐溫20(Tween-20)吐溫20(Tween-20)20mL溶于900mL的1×PBST中，用HO調(diào)節(jié)pH至7.4,定容至1000用1×PBST緩沖液定容至1000mL。5氫氧化鈉(NaOH)120g溶于1000mL的無菌蒸餾水中，濃度3mol/L。B.7電泳緩沖液TAE(50×)三羥甲基氨基甲烷(Tris)242g冰乙酸52.1mL0.5mol/L乙二胺四乙酸鈉(EDTA)100用時加蒸餾水稀釋至1×TAE。6C.1.2每孔加入100pL的SBMV的C.2質(zhì)量控制和結(jié)果判定OD?——重復(fù)樣品1;OD?——重復(fù)樣品2。樣品ODos/陰性對照OD?s值明顯小于2,判SBMV-F1:5'-ACTTGTCTGAGGGCAAGTG-3’SBMV-R1:5'-GTGTCAGCCATATCATATTGG-3’Taq酶總體積—用

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