ICS65.020.01CCSA017T/NAIA團 體 標 準T/NAIA0293—20245液相色譜法2024-05-31發布 2024-06-10實施寧夏化學分析測試協會 發布T/NAIA0293-2024T/NAIA0293-2024II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由寧夏化學分析測試協會提出并歸口。本文件起草單位：寧夏回族自治區食品檢測研究院（國家市場監管重點實驗室（枸杞和葡萄酒質量安全））、寧夏回族自治區標準化研究院、寧夏化學分析測試協會、寧夏農產品質量標準與檢測技術研究所。本文件主要起草人：李瑞雪、王澤嵐、朱捷、龔慧、路敏、王琛、王紫昕、劉繼輝、陳盼盼、吳明、呂毅、馬桂娟、葛謙、張小飛。本文件為首次發布。T/NAIA0293-2024T/NAIA0293-2024PAGEPAGE1枸杞中5種黃酮類化合物的測定液相色譜法范圍本文件規定了枸杞中5種黃酮類化合物含量的液相色譜法。（鮮果量的測定和確證。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法。術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理測定，以保留時間定性，外標法定量。試劑和材料除另有說明，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規定的一級水。試劑乙腈(CH3CN)：色譜純。甲醇(CH3OH)：色譜純。試劑配制70%700mL甲醇（5.1.2）1000mL容量瓶中，用水定容。標準品楊梅素（CAS號：529-44-2）：純度≥95%準品。二氫楊梅素（CAS號：27200-12-0）：純度≥95%書的標準品。木犀草素（CAS號：491-70-3）：純度≥95%標準品。蕓香柚皮素（CAS號：14259-46-2）：純度≥95%書的標準品。柚皮素（CAS號：480-41-1）：純度≥95%準品。標準溶液制備標準儲備液（10mg/mL）：準確稱取適量的標準物質（5.3），分別用甲醇10mg/mL的標準儲備液。標準儲備液在-18℃及以下避光保存。混合標準中間液（1mg/mL）:吸取上述標準儲備液（5.4.1）1mL10mL1mg/mL混合標準中間液。標準系列工作液：移取適量混合標準中間液（5.4.2），70%甲醇溶液（5.2.1）稀1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的混合標準工作溶液。臨用現配。儀器和設備液相色譜儀：帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器。6.2 0.00001g0.001g。高速冷凍離心機：15000r/min。渦旋混合器。超聲波振蕩器。10000r/min。微孔濾膜：0.45μm，有機相。分析步驟試樣制備枸杞（鮮果樣品用組織搗碎機制成勻漿（200g30瓶中，-18℃冷凍備用。試樣的提取5g（0.01g）50mL塑料離心管中，加入20mL70%甲醇溶液（5.2.1），渦旋混勻1min,超聲提取20min25mL容量瓶中,用70%甲醇溶液（5.2.1）定容至刻度并充分混勻后，轉入離心管,15000r/min5min0.45μm濾膜，濾液待上機測定。液相色譜參考條件a)色譜柱：C8色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）,或同等性能色譜柱；b)柱溫：35℃；檢測波長：290nm（蕓香柚皮素、柚皮素、二氫楊梅素），260nm（楊梅素、木犀草素）；進樣量：10μL；流速：1.0mL/min；AB：乙腈（5.1.1）1。表1流動相梯度洗脫條件時間/min流動相A/%流動相B/%0.00901010.0901020.0802030.0703040.0208044.0208044.1901048.09010測定標準曲線測定5A。試樣溶液的測定物質的濃度。分析結果的表述試樣中黃酮類化合物的含量按式（1）計算。XCV1000

……（1）m1000式中：X—試樣中黃酮類化合物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C—由標準曲線計算得到的待測液中黃酮類化合物濃度，單位為微克每毫升（μg/mL)；V—樣品測定液總體積，單位為毫升（mL）；m—試樣的質量，單位為克（g）；1000—換算系數。計算結果保留2位有效數字。精密度在重復性測定條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過其算術平均值的10%。其他本方法中，當樣品取樣量為2g,定容體積為50mL時,二氫楊梅素、柚皮素、木犀草素、楊梅素的檢出限均為1.5mg/kg,定量限均為5.0mg/kg,柚皮素的檢出限為0.6mg/kg,定量限