第四節(jié)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)

條件和培養(yǎng)基細(xì)胞體外培養(yǎng)基本條件:①無菌②營(yíng)養(yǎng)充足,防止有害物質(zhì)③氧氣第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2④隨時(shí)清除代謝有害物質(zhì)⑤良好的生存外環(huán)境⑥及時(shí)分種第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2一、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件⒈器材的清洗和消毒⑴器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、沖洗⑵器材的消毒滅菌物理消毒化學(xué)消毒第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒉水質(zhì):電阻值大于18MΩ,

去熱原。⒊pH:7.2～7.4⒋滲透壓:290～300mOsm/kg⒌溫度:37±0.5C⒍空氣:氧的飽和質(zhì)60%,氧分壓

4～0.7kPa第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2二、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)

基的種類和組成分3類:⒈天然培養(yǎng)基⒉合成培養(yǎng)基⒊無血清培養(yǎng)基第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒈天然培養(yǎng)基

血清、羊水、腹水等,成分復(fù)雜、成分不穩(wěn)定⒉合成培養(yǎng)基

DME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⑴氨基酸⑵維生素⑶糖類⑷無機(jī)鹽⑸其它成分添加小牛血清：第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2添加小牛血清的作用⑴提供生長(zhǎng)因子和激素⑵提供貼附因子和伸展因子⑶提供結(jié)合蛋白⑷提供必需脂肪酸和微量元素第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒊無血清培養(yǎng)基①提高重復(fù)性②減少微生物污染③供應(yīng)充足穩(wěn)定④產(chǎn)品易純化⑤避免血清因素對(duì)細(xì)胞的毒性⑥減少血清中蛋白對(duì)生物測(cè)定的干擾第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2無血清培養(yǎng)基加入添加劑⑴生長(zhǎng)因子和激素⑵結(jié)合蛋白⑶貼附因子和伸展因子⑷有利細(xì)胞生長(zhǎng)的因子和元素第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2第五節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方

法和操作方式一、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法依細(xì)胞種類:

原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)依培養(yǎng)基:

液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2

依培養(yǎng)器和方式:

靜止培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、中空纖維培養(yǎng)、固定床或流化床培養(yǎng)第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2

從生產(chǎn)實(shí)際分為:

懸浮培養(yǎng)貼壁培養(yǎng)貼壁-懸浮培養(yǎng)第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒈懸浮培養(yǎng)讓細(xì)胞自由的懸浮于培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。⒉貼壁培養(yǎng)讓細(xì)胞貼附在某種基質(zhì)上生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)方法。⒊貼壁-懸浮培養(yǎng)第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒊貼壁-懸浮培養(yǎng)⑴微載體培養(yǎng)⑵包埋和微囊培養(yǎng)⑶結(jié)團(tuán)培養(yǎng)第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作

方式⒈分批式操作⒉半連續(xù)式操作⒊灌流式操作第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2第六節(jié)動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)

器及其檢測(cè)控制系統(tǒng)一、動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的類型及其基本結(jié)構(gòu)⒈攪拌式生物反應(yīng)器⒉氣升式生物反應(yīng)器⒊中空纖維式生物反應(yīng)器⒋透析袋或膜式生物反應(yīng)器⒌固定床或流化床式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒈攪拌式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒉氣升式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒊中空纖維式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2平床式中空纖維式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒋透析袋或膜式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒌固定床或流化床式生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2CellGenplus生物反應(yīng)器第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2二、動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的

檢測(cè)控制系統(tǒng)⒈培養(yǎng)過程需檢測(cè)的物化參數(shù)直接在線檢出取樣離線檢測(cè)檢測(cè)后計(jì)算⒉主要參數(shù)的檢測(cè)和控制方法第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⒉主要參數(shù)的檢測(cè)和控制方法⑴溫度⑵pH①在培養(yǎng)初期，控制進(jìn)氧量②當(dāng)細(xì)胞密度提高后控制

NaHCO3的量第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2⑶溶氧⑷攪拌⑸進(jìn)出液流量⑹其它第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2第七節(jié)動(dòng)物細(xì)胞制藥的前

景與展望一、提高產(chǎn)量降低成本和改進(jìn)質(zhì)量方面的研究二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究三、組織工程的研究第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2一、提高產(chǎn)量、降低成本和改

進(jìn)質(zhì)量方面的研究

為了提高產(chǎn)量,要提高細(xì)胞表達(dá)水平。為降低成本，須改進(jìn)培養(yǎng)基配方。為改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量，關(guān)鍵是糖基化質(zhì)量。改進(jìn)工藝，生產(chǎn)設(shè)備等第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究

自1982年P(guān)alimiter提出用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物來生產(chǎn)藥用蛋白以來，發(fā)展迅速。優(yōu)點(diǎn)：產(chǎn)量高成本低質(zhì)量與天然一樣。現(xiàn)還有不成熟之處。對(duì)動(dòng)物和人的健康的影響。第5章動(dòng)物細(xì)胞制藥2三、組織工程的研究

組織工程：通過對(duì)大量細(xì)胞的培