細胞周期同步化常用的方法在一般培養條件下，群體中的細胞處于不同的細胞周期時相之中。為了研究某一時相細胞的代謝、增殖、基因表達或凋亡，常需采取一些方法使細胞處于細胞周期的同一時相，這就是細胞同步化技術。細胞同步化的方法有選擇同步化和誘導同步化，其中，選擇同步化常用的方法有有絲分裂選擇法和細胞沉降分離法。選用DNA合成抑制劑可逆地抑制S期細胞DNA合成而不影響其他細胞周期運轉，最終可將細胞群體阻斷在G1/S期交界處；一些抑制微管聚合的藥物，因抑制有絲分裂裝置的形成和功能行使，可將細胞阻斷在有絲分裂中期，即使細胞同步于M期。一、M期同步化方法1．振蕩收集法該法利用M期細胞變圓易脫落的特點，將生長旺盛的貼壁細胞按一定的時間間隔振蕩，使M期細胞脫落，逐步收集培養基，并補充新的培養基。收集的細胞放4℃冰箱中保存，離心沉淀后即獲得M期細胞。2．秋水仙素阻抑法（1）將細胞傳代培養至指數生長期。（2）加入秋水仙胺，使最終濃度為0.05－0.1μg/mL培養基，作用6－7h。如使用秋水仙素，使用濃度應加大5～10倍。（3）振蕩收集細胞，800r/min離心5－10min，棄上清，收集的沉淀細胞即為M期細胞。加入一定量培養基將細胞接種到培養瓶中或直接進行離體實驗。由于秋水仙素或秋水仙胺對細胞有一定毒性，用量較小或作用時間較短細胞活性尚可恢復，而用量過大或時間過長則細胞不能存活，因此使用時應嚴格控制其劑量和作用時間。3．N2阻斷法此方法較秋水仙素阻抑法好（1）將細胞傳代培養至指數生長期。（2）將培養瓶置于N2罐中通入適量CO2（約相當于罐中體積的5％）。（3）關閉好N2罐，接上N2管子及壓力表，緩緩向罐中充氣一直到壓力為80-90磅/英寸2為止。（4）將N2裝置放在37℃培養箱中10－16h（通常過夜）。次日從培養箱中取出，然后緩緩將N2放出（最好放出窗外）。（5）取出細胞在鏡下觀察同步化效果，用振蕩法收集細胞于離心管中。（6）800r/min離心10min收集細胞。二、S期同步化方法胸腺嘧啶核苷（TdR）雙阻斷法：該法利用過量TdR能阻礙DNA合成的原理而設計，為了加強細胞同步化效果，常采用兩次TdR阻斷法，即雙阻斷法。第1次阻斷時間相當于G2、M和G1期時間的總和或稍長，釋放時間不短于S期時間，而小于G2+M+G1期時間，這樣才能使所有位于G1/S期的細胞通過S期，而又不使沿周期前進最快的細胞進入下一個S期。第2次阻斷時間同第1次，再釋放。現以HeLa細胞為例加以說明（HeLa細胞周期時間為21h，其中G1期為10h，S期為7h，G2期為3h，M期為1h）。1．將細胞培養至指數生長期的早期。2．加入含2mmol/LTdR的培養基（2－2.5mmol/L用于腫瘤細胞的同步化培養），作用16h。3．棄掉TdR培養基，用Hanks液洗2－3次，再換上新鮮培養基繼續溫浴9h。4．重新加入TdR培養基（濃度同上）進行第2次阻斷，作用16h。5．再棄掉TdR培養基，Hanks液洗2－3次后換上普通培養基。第2次TdR釋放0h時取樣則細胞處于G1/S期交界處；如2－7h取樣則為不同階段的S期細胞。注意：具體TdR作用和釋放的時間應參考每一種待同步化細胞的細胞周期各時相測定的參考值，也可根據經驗確定。三、G1期和G2期細胞的獲得1．G2期細胞的獲得根據細胞周期測定的數值，采用TdR雙阻斷法使細胞同步在G1/S期交界處后，洗去TdR使細胞釋放后繼續培養。其培養時間應大于S期時間而小于S+G2期時間。然后先用振蕩法使已進入M期的細胞脫落，棄去上清培養基；再用胰酶消化，加入新鮮培養基制成細胞懸液，離心收集細胞，即為G2期細胞。2．G1期細胞的獲得（1）將用M期阻斷法獲得的細胞加入一定量的培養基，繼續培養1－10h即可獲得各階段的G1期細胞。（2）用缺乏異亮氨酸的培養基培養細胞，培養時間超過一個細胞周期，即可獲得中G1期細胞。四、G0期細胞的獲得可采用血清饑餓法得到G0期細胞。1．取處于對數生長期的細胞。2．用含0.5％－1％小牛血清的培養基培養細胞48－72h。或用無血清的培養基培養24h。3．用0.1％－0.25％胰蛋