1紫外、可見、近紅外分光光度計檢定規(guī)程本規(guī)程適用于波長范圍190nm～2600nm,波長連續(xù)可調的可見、紫外-可見、紫外-可見-近紅外分光光度計的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗。2.引用文獻本規(guī)程引用下列文獻：國際法制計量組織(OIML)國際建議R135《醫(yī)學實驗室分光光度計》(InternationalrecommendationOIMLR135Edition2004Spectrophotometersformedicallaboratories)JJF1001—1998《通用計量術語及定義》JJF1059—1999《測量不確定度評定與表示》使用本規(guī)程時，應注意使用上述引用文獻的現行有效版本。3概述紫外可見近紅外分光光度計(以下簡稱儀器)是根據物質的分子對紫外、可見、近紅外區(qū)輻射(光)的選擇性吸收和朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律對物質進行定量分析和定性鑒別的儀器。郎伯-比爾定律的數學表達式為：式中：A——物質的吸光度；I。—-入射的單色光強度；I——透射的單色光強度；T——物質的透射比；k——物質的吸光系數；l——被分析物質的光程；c——物質的濃度。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理和顯示與存儲系統組成。4計量性能要求為便于描述計量性能要求，將儀器的工作波長劃分為三段，分別是A段(190nm~340nm)、B段(340nm～900nm)、C段(900nm～2600nm)。按照計量性能的高低將儀器劃分為I、Ⅱ、Ⅲ、IV共4個級別。4.1波長最大允許誤差儀器波長最大允許誤差應符合表1的要求。2表1波長最大允許誤差nmA段IⅡ十0.5Ⅲ4.2波長重復性儀器波長重復性應滿足表2要求。A段IⅡⅢ4.3噪聲與漂移儀器噪聲與漂移應符合表3的要求。%表3儀器噪聲與漂移的要求%透射比為100%噪聲注：非掃描儀器不作漂移指標。4.4最小光譜帶寬儀器的最小光譜帶寬誤差應不超過標稱光譜帶寬的士20%。4.5透射比最大允許誤差儀器透射比最大允許誤差應滿足表4要求。%表4透射比最大允許誤差%I士0.3土0.3Ⅱ土0.5士0.5Ⅲ士2.0士2.034.6透射比重復性儀器透射比重復性應滿足表5要求。A段IⅡⅢ4.7基線平直度儀器基線平直序地象光度表示，應符合表6要求士0.001士0.002Ⅱ士成土0.002士0.005Ⅲ士0.005士0.005任士0.010M十0.01Cd士0.020電源電日適應性儀器的射示值變化應滿電流違壓的適應性7要求。%級透射比示值變1士0.2Ⅲ士1儀器雜散光應符合表8要IⅡⅢ44.10吸收池的配套性吸收池配套性應符合表9要求。表9吸收池配套性要求%吸收池類別波長配套誤差石英玻璃5通用技術要求5.1安全性能儀器的絕緣電阻應不低于20MΩ。5.2標志儀器應有下列標志：名稱、型號、編號、制造廠名、出廠日期、工作電源電壓、頻率。國產儀器應有制造生產許可標志及編號。5.3外觀儀器各緊固件均應緊固良好，各調節(jié)旋鈕、按鍵和開關均能正常工作，電纜線的接插件均能緊密配合且接地良好。儀器應能平穩(wěn)地置于工作臺上，樣品架定位正確。指示器刻線粗細均勻、清晰，數字顯示清晰完整，可調節(jié)部件不應有卡滯、突跳及顯著的空回。5.4吸收池吸收池不得有裂紋，透光面應清潔，無劃痕和斑點。6計量器具控制計量器具控制包括首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗。6.1檢定條件6.1.1波長標準物質6.1.1.1汞燈；6.1.1.2附有1,2,5nm三個光譜帶寬下波長標準值的氧化鈥、鐠釹、鐠鉺濾光片；6.1.1.3氧化鈥溶液，質量濃度為40g/L;6.1.1.41,2,4-三氯苯(分析純);6.1.1.5干涉濾光片：峰值波長標準不確定度≤1nm,光譜帶寬<15nm。6.1.2透射比標準物質6.1.2.1質量分數為0.06000/1000重鉻酸鉀的0.001mol/L高氯酸標準溶液；6.1.2.2紫外光區(qū)透射比濾光片；6.1.2.3光譜中性濾光片，其透射比標稱值為10%,20%,30%。6.1.3雜散光標準物質6.1.3.1截止濾光片，使用波長分別為220,360,420nm,半高波長分別為260,5400,470nm,截止波長分別不小于225,365,430nm,截止區(qū)吸光度不小于3,透光區(qū)平均透射比不低于80%;6.1.4標準石英吸收池：規(guī)格為10.0mm,其透射比配套誤差不大于0.2%。6.1.5.1調壓變壓器：輸出功率不小于500W,輸出電壓(0～250)V;6.1.5.2兆歐表：試驗電壓500V,10級；6.1.5.3萬用表：不低于2.5級；6.1.6.2相對濕度不大于85%;表10.檢定項目一覽表序號檢定項目首次檢定后續(xù)檢定123456789通用技術要求波長示值誤差與重復性噪聲與漂移光譜帶寬透射比示值誤差與重復性基線平直度電源電壓的適應性雜散光吸收池的配套性十十十一十十十十十一十十.注：“十”為應檢項目，“一”為可不檢項目。6.3檢定方法6.3.1.1安全性能用500V兆歐表，測量儀器電源進線端與機殼(或接地端子)間的絕緣電阻。測試時電源插頭不接入電網，電源開關置于接通位置，用導線將電源插頭的相線與零線短路，用兆歐表讀取電源插頭的相線與儀器接地端子之間的絕緣電阻。6.3.1.2外觀、標志及吸收池66.3.2波長最大允許誤差及波長重復性6.3.2.1標準物質的選擇根據儀器選擇標準物質，參見表11。可供選擇的標準物質是：①低壓石英汞燈②氧化鈥濾光片，③氧化鈥溶液，④標準干涉濾光片，⑤鐠釹濾光片，⑥錯鉺濾光片⑦1,2,4-三氯苯(分析純),⑧儀器的氘燈，⑨高壓汞燈。表11波長標準器的選擇I①、②、(⑨、⑦Ⅱ⑨、⑦Ⅲ⑧⑨、⑦⑨、⑦根據儀器的工作速長施圍正確選一個波長檢定點，↓根據儀器的波長長檢定點。根據儀器的工作速長施圍正確選一個波長檢定點，↓根據儀器的波長長檢定點。a)非自動掃描似器或吸光度測量方式，在測量的波使用溶液或慧光片標準物質時，長點用空氣作空河整儀器透射比為后將標準物質垂直面于樣品光路中，標準物擋光板調整透測量值，重復或吸光度測量方式，在測量的波使用溶液或慧光片標準物質時，長點用空氣作空河整儀器透射比為后將標準物質垂直面于樣品光路中，標準物擋光板調整透測量值，重復檢定點附近單向連則出標準物質的透比或吸光度，求出相應的透射用本值或吸光度峰值波長λ,連續(xù)源重3次。選擇汞燈時，將形燈置于光源室使、單色器入射狹組選取儀器的能量測量方式，設定合后的增益，調酸表的位管使能達到最大，在峰值波長附近單向逐點測出能量最人值對應的明b)自動掃描儀器波長根據選擇的檢定波長設定儀器的波長掃描范圍(如果波長臺范圍較寬允許分段掃波長采樣間隔，應選取較慢的掃描之件人。例用容光片標準物質時，采用透射比或吸光度測量方式，根據設定的掃描參數用空氣作空白進行儀器的基線校正，用擋光板進行暗電流校正，然后將標準物質垂直置于樣品光路中，設置合適的記錄范圍，連續(xù)掃描3次，分別檢出(或測量)透射比谷值或吸光度峰值波長λ;。使用低壓石英汞燈時，按6.3.2.2a)連續(xù)掃描3次，分別檢出(或測量)能量的6.3.2.3結果計算將每個測量波長按照式(1)計算波長示值誤差：7式中：λ——3次測量的平均值；按照式(2)計算波長重復性：分別為3次測量波長的最大值與最小值。6.3.3噪聲與漂移根據儀器的工作波段范圍選取A段250nm,B段500nm,C段1500nm作為噪聲的測量波長，500nm為漂移的測量波長設置儀器的掃描參數為而掃指入S成方人長掃描),光譜帶寬2nm(固定光譜帶寬的儀器不設),時間采樣間隔(或積分時間，光度測量方式為透射比，記錄范圍99%～101%(共掃描儀器不設),在每個測量波民眾青參比光束與樣品光束皆為(非掃描儀器，訂是二min內的最光路中插入擋半板調整儀器透射差(非掃描儀部記泉2min內的真波長切允許見光穩(wěn)定5值與最小值nin,測量和蘭上最大值與最小值之即為儀器透用華○%噪聲。自動掃鹽心器，按上述要求測試透射比0%和100%噪聲后，置于500nm處，掃描30mir,讀出掃描圖譜包100%線漂本。6.3.4最小實譜帶寬具有氘的儀器選擇氘燈中心線的最大值和最小值之差訓為儀器的透射比工56.11譜線，沒有氘5的儀器選擇汞燈546.1nm(或253.7nm)的特征增，選擇最小無譜帶寬，按照b32.2方法記錄氘燈或汞燈的特往部線圖譜，測量半6.3.5透射比最大允許誤差和重a透射比三次。在235313,350nm處測量也可用6.1.2.2的紫外區(qū)透射比濾光片測量。b)用透射比標稱值出G30光中住濾光片，分別在440,546,635nm處，以空氣為參比，測血透射M6.3.5.2結果計算按式(3)計算透射比示值誤差：式中：T——3次測量的平均值；T,——透射比標準值。按照式(4)計算透射比重復性：δr=Tmx—Tmin式中：Tmx,Tmin——3次測量透射比的最大值與最小值。86.3.6基線平直度按儀器要求進行基線校正后，設置儀器光譜帶寬2nm(無光譜帶寬調整擋的儀器不設),掃描速度中速，取樣間隔1nm,參照儀器說明書設定合適的吸光度量程，在波長下限加10nm,波長上限減50nm進行掃描，測量圖譜中起始點的吸光度與偏離起始點的吸光度(取最大偏離點)之差即為基線平直度(在更換光源或接收器時允許有瞬間6.3.7電源電壓的適應性用調壓器輸入220V電壓，在選擇波長.250,500,1500nm處，調整透射比示值為100%,改變輸入電壓，分別記錄儀器在198V和242V時的透射比示值，并計算與100%的差值即為電源電壓的適應性。6.3.8雜散光選擇6.1.3規(guī)定的雜散光測量標準物質，在相應波長處測量標準物質的透射比，其透射比值即為儀器在該波長處的雜散光。a)A段用碘化鈉標準溶液(或截止濾光片)于220nm,亞硝酸鈉標準溶液(或截止濾光片)于360nm(鎢燈),10nm標準石英吸收池，蒸餾水作參比，光譜帶寬2nm(無光譜帶寬調整擋的儀器不設)測量其透射比示值。b)B段棱鏡式儀器，用截止濾光片，在波長420nm處，以空氣為參比，測量其透c)C段用H?O于1420nm波長處，測量其透射比示值，以空氣為參比。d)對于需要測量儀器的低雜散光值時，使用衰減片，先測出衰減片的透射比值；再以衰減片為參比，測量上述標準物質透射比值，兩者透射比值的乘積即為雜散光，6.3.9吸收池的配套性儀器所附的同一光徑吸收池中，裝蒸餾水于220nm(石英吸收池)、440nm(玻璃吸收池)處，將一個吸收池的透射比調至100%,測量其他各池的透射比值，其差值即為吸收池的配套性。對透射比范圍只有0～100%擋的儀器，可用95%代替100%。6.3.10對于測量方法沒有完全包括在本規(guī)程范圍內的其他類型分光光度計，其主要技術指標可參照上述檢定方法進行檢定，技術要求可參照儀器出廠技術指標要求。6.4檢定結果的處理6.4.1新制造的儀器應全面按6.2表10中的首次檢定項目進行檢定。后續(xù)檢定、使用中檢驗，原則上按表10中的后續(xù)檢定和使用中檢驗的內容進行，必要時按首次檢定要6.4.2按本規(guī)程檢定合格的儀器，發(fā)給檢定證書，并以檢定結果中最低級別注明儀器合格級別；若應檢項目中(不包括4.10),有一項指標不符合要求，即判為不合格，發(fā)給檢定結果通知書，并注明不合格項目。6.5檢定周期檢定周期一般不超過1年，在此期間內，儀器經修理或對測量結果有懷疑時，應及9附錄A波長標準物質的參考波長表A.1汞燈參考波長值nm編號波長編號波長編號波長編號波長172839456注：當光譜帶寬大于0.5nm時不要選擇365.02nm與365.48nm的譜線；當光譜帶寬大于2.5nm時不要選擇365.02nm與365.48nm及576.96nm與579.00nm的譜線。表A.2低壓汞燈譜線強度(供參考)強度強度強度511注：譜線強度與光源和檢測器等因素有關。nmnm編號波長編號波長編號波長1279.459484.52287.56418.737453.2637.548460.0注：不同廠家不同批次濾光片的參考波長可能存在少許差異，參考波長值應以具有標準物質校準資格的機構的校準波長為準，并應定期進行校正。編號波長編號波長編號波長編號波長1357246附錄B重鉻酸鉀標準溶液在相應波長下不同溫度、不同光譜帶寬時的透射比值表B.1重鉻酸鉀標準溶液在相應波長下不同溫度時的透射比值%溫度/℃注：光譜帶寬2表B.2路酸鉀標準溶液在20*下同光譜帶寬的近%C1)234562附錄C標準溶液的配制方法稱取已干燥過的碘化鈉5.0g(稱準至士0.1g)于燒杯中，用蒸餾水溶解，然后移入500mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻并避光保存。稱取已干燥過的亞硝酸鈉25.0g(稱準至±0.1g),按上述方法配成500mL。稱取已干燥過的重鉻酸鉀60.00mg,移入1L容量瓶中，用蒸餾水溶解，加入1mL的1.0mol/L高氯酸溶液，再用蒸餾水稀釋溶液質量為1000.0g,避光密封保存。稱取已干燥過的氧化鈥(基準試劑)4g(準確至±0.1g),放置100mL容量瓶中，再加入10%高氯酸溶液至刻度，待溶解搖勻后，避光密封保存。檢定證書內頁格式4噪聲與漂移：透射比為100%噪聲