《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》

國家標準編制說明

1任務來源

本國家標準的制定任務是根據(jù)國家標準化管理委員會下達的國家標準制定

計劃《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》項目（計劃號為

20193344-T-424）起草。國家標準計劃《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液

相色譜法》由北京化工大學上報，中國標準化研究院歸口及執(zhí)行，主管部門為

國家市場監(jiān)督管理總局(質檢)。本標準由北京化工大學，中華全國供銷合作總

社濟南果品研究院，中國標準化研究院，中國農業(yè)大學、大連依利特分析儀器

有限公司等單位共同起草。本標準主要起草人：魏蕓、鄭曉冬、席興軍、蘭韜、

倪漢文、車芬芳、劉聰、唐濤。

2起草的目的意義

甘蔗，（學名：Saccharumofficinarum）甘蔗屬，多年生高大實心草本植物。

甘蔗中含有豐富的糖分、水分，還含有對人體新陳代謝非常有益的各種維生素、

脂肪、蛋白質、有機酸、鈣、鐵等物質，深受人們的喜愛。甘蔗在加工過程中

會產生大量的甘蔗皮渣等副產品，這些副產品并沒有得到有效的利用，造成了

巨大的資源損失和浪費，同時對環(huán)境造成嚴重的污染。甘蔗皮渣提取物的主要

活性成分為對香豆酸(p-Coumaricacid，CAS501-98-4)。研究表明,對香豆酸具

有抗氧化、清除自由基、抗菌消炎、抗心血管類疾病、抗突變防癌，抗血栓、

調節(jié)免疫、利膽美白、提高精子活力、促進雙歧桿菌增殖等生物活性。針對甘

蔗皮渣中的對香豆酸檢測，由于不同產地、不同品種的甘蔗皮中活性成分的類

型、含量均存在差異，因此，建立甘蔗皮中對香豆酸的高效液相色譜定性定量

檢測方法對于農副產品中對香豆酸的質量控制非常重要。

2.1企業(yè)產品質量控制的需要

我國臺灣、福建、廣東、海南、廣西、四川、云南等南方熱帶地區(qū)廣泛種植

甘蔗，甘蔗種植面積大、產量高，是我國主要制糖原料，年產量超過1億噸。

在加工過程中會產生大量的甘蔗皮渣等廢棄物，年產量在2000-3000萬噸左右

（約占甘蔗重量20%-25%）。同時，以甘蔗為原料生產甘蔗皮提取物，從而實

現(xiàn)農副產品再利用，這越來越受到重視。但是，對香豆酸含量測定尚無國家標

1

準,且對香豆酸原料的提取工藝不同,導致原料質量標準不統(tǒng)一,藥品臨床療

效不穩(wěn)定。因此，本標準的制定是企業(yè)進行產品質量控制的需要。

2.2完善國家標準的需要

我國現(xiàn)行檢測方法標準中，尚無對香豆酸檢測方法標準。為了貫徹落實《國

務院辦公廳關于促進熱帶作物產業(yè)發(fā)展的意見》（國辦發(fā)[2010]45號）文件精神，

科學指導甘蔗生產、加工產業(yè)的發(fā)展，急需制定《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方

法-高效液相色譜法》國家標準，建立甘蔗皮渣中對香豆酸含量檢測標準，為對

香豆酸原料的質量控制提供方法，為對香豆酸產品研發(fā)及甘蔗綜合開發(fā)利用提

供依據(jù)，進而引導生產，規(guī)范市場。所以，本標準的制定也是完善甘蔗皮渣加

工產品檢測方法國家標準的需要。

3對香豆酸研究、應用與標準現(xiàn)狀

3.1對香豆酸研究

國內外對對香豆酸的研究十分廣泛，可查詢到大量的論文與專利，研究范圍

包括提取分離、純品制備、分析檢測、結構表征、藥理活性、毒性、分子結構

改性、產品加工等方面。

3.2對香豆酸開發(fā)應用

以對香豆酸為活性成分的加工產品有甘蔗皮渣提取物、白花蛇舌草提取物、

海金沙草提取物、杜仲葉提取物、復方中成藥等。

對香豆酸可以用于食品添加劑和食品保鮮劑，也可用于醫(yī)藥防治疾病和化妝

品添加劑以抑制黑色素的形成，抵抗紫外線輻射。廣泛存在于于食品、化工、

醫(yī)藥行業(yè)。總的說來，對香豆酸的開發(fā)利用尚處于初級發(fā)展階段，沒有一定規(guī)

模的應用，而且產業(yè)化目前還沒形成。

3.3對香豆酸標準

可查詢到甘蔗及其相關產品標準四項：《糖料甘蔗》（GB/10498-2010）、《食

用甘蔗》（CNS2876）、《造紙用原料蔗渣標準》（QB/T3701-1999）、《甘蔗糖蜜行

業(yè)標準》（QB/T2684-2005），見附表1、附表2、附表3。然而，未查到與對香

豆酸相關的國家標準、行業(yè)標準、地方標準和企業(yè)標準。對香豆酸分析方法標

準的缺失，使得相關企業(yè)在市場競爭中無標準可用，相關產品缺乏技術支撐，

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質量參差不齊。

因此，有必要盡快制定《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》

國家標準，以滿足相關企業(yè)和檢測、管理結構的需要。

4主要起草過程

4.1成立標準制定工作組

國家重點研發(fā)項目立項后，2017年11月10日在北京市西藏大廈召開了國

家標準《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》第一次工作會。參加

單位有北京化工大學、中華全國供銷合作總社濟南果品研究院，中國標準化研

究院，中國農業(yè)大學等。會議成立了由北京化工大學、中華全國供銷合作總社

濟南果品研究院，中國標準化研究院，中國農業(yè)大學等單位參加的標準工作組，

主要由從事標準制修訂、儀器分析、具有豐富技術經(jīng)驗的專業(yè)研究人員組成，

工作組制定了初步的標準編制工作計劃。

4.2確定工作計劃和標準制定原則

按照工作任務要求，工作組制定了標準起草工作計劃和任務分工。

在充分研究與討論的基礎上，制定了標準制定原則：

（1）先進性：其準確度、精密度和靈敏度達到較高水平。

（2）適用性：要適應我國農業(yè)加工副產品發(fā)展的要求，滿足農產品加工廢

棄物再利用的需要。

（3）可操作性：符合我國目前檢測儀器設備和試劑、材料的供應條件。

（4）實用性：符合檢測從業(yè)人員的技術水平，能被國內主要的分析實驗室

使用，并達到規(guī)定的要求；有利于提高農產品加工廢棄物的再利用率。

4.3查詢國內外相關標準和文獻資料

2017年，開始開展“甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法”方法

研究。由于在現(xiàn)行國家標準、行業(yè)標準、地方標準、團體標準和企業(yè)標準中，

均無相應的測定方法標準，所以我們查閱相關文獻并開展研究工作。分析對香

豆酸的結構特點，在225nm，308nm具有特征吸收。

中國知網(wǎng)、萬方等中文數(shù)據(jù)庫中查詢到的公開發(fā)表文獻中，關于甘蔗皮渣中

對香豆酸的測定幾大部分都是高效液相色譜法。通過對SpringerLink、Elsevier

3

ScienceDirect(SD)、Wiley等國外數(shù)據(jù)庫檢索到少量以液相色譜-串聯(lián)質譜法對對

香豆酸進行檢測。

液相色譜-串聯(lián)質譜法價格昂貴，對溶劑的純度要求高，高效液相色譜法憑

借著其高效、便捷、節(jié)省試樣使用量等優(yōu)點，考慮到標準的適用性與可操作性，

因此確定采用液相色譜法檢測樣品中對香豆酸。借鑒文獻中對香豆酸含量測定

的方法，以甘蔗皮渣為樣品，經(jīng)過初步試驗，證明方法是可行的。而后對方法

進行優(yōu)化，對方法進行驗證，結果表明方法的準確性、回收率、精密度等方面

都能達到國家標準的要求，并且基本符合制定國家標準的條件，并于2018年向

國家標準化管理委員會提出立項申請。

4.4研究建立標準方法，開展條件實驗

標準工作組按照計劃任務書的要求，結合制定標準的要求，研究建立標準

方法的實驗方案，并進行方法前處理條件的選擇、儀器條件的確定和方法精密

度、準確度及檢出限的測定等試驗。

2017年11月始，標準起草工作組赴廣西省等甘蔗主產地進行調研，獲取

了大量相關信息與數(shù)據(jù)，采集了10份甘蔗皮渣樣品。

第一批樣品采集后，開始開展實驗室研究及驗證工作，建立對香豆酸高效液

相色譜分析方法，包括線性范圍、相關系數(shù)、加標回收率、準確度、精密度、

檢出限、定量限等；甘蔗皮渣中對香豆酸的粗提。

4.5方法驗證

2019年4～5月，由5家單位對“甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色

譜法”進行驗證，分別是XXXXX，通過統(tǒng)計檢驗技術確認外部實驗室試驗結

果的準確性。

4.6形成標準討論稿和編制說明

2019年7月5日，起草工作組組織相關單位和專家，在山東青島中國科學

院蘭州化學物理研究所召開第二次標準起草工作會。參會單位包括北京化工大

學、中國標準化研究院、中國科學院蘭州化學物理研究所、中國農業(yè)大學、浙

江大學等。

與會專家對《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》標準草案中

的英文名稱、范圍、術語和定義、基本要求、主要技術指標、附錄等章條提出

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了詳細的意見，會后根據(jù)修改意見形成了《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效

液相色譜法》標準討論稿及其編制說明。

4.7形成標準草案

標準起草工作組查閱、收集和整理了國內外有關研究進展和專利、標準、法

規(guī)等文獻資料，掌握了相關標準的現(xiàn)狀；對文獻中對香豆酸測定方法進行了對

比和總結，為標準文本的編制奠定理論基礎。在《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方

法-高效液相色譜法》國家標準第一次起草工作會議的基礎上，起草工作組相關

單位共同討論起草形成了《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》國

家標準的技術框架和主要內容，初步形成了《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-

高效液相色譜法》標準草案。

4.8形成標準征求意見稿和編制說明

在前期工作的基礎上，起草工作組組織相關單位和專家于2019年10月22

日在北京的中國標準化研究院召開第三次標準起草工作會。參會單位包括北京

化工大學、中國標準化研究院、中國科學院蘭州化學物理研究所、浙江大學等。

與會成員認真討論《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》標準討論

稿后，根據(jù)討論結果修改形成了《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜

法》征求意見稿及編制說明。會議同時討論了下一階段征求意見的單位和專家

名單。

4.9征求意見并形成標準送審稿和編制說明

2020年3月27日-2020年4月30日，起草工作組根據(jù)討論的專家和單位名

單，分別向相關的行業(yè)主管部門、科研機構、檢測部門和企業(yè)等XX個單位和

專家發(fā)出了標準征求意見稿，向相關單位和專家征求標準修改意見。截止到2020

年4月30日，共收集到中國農科院、…等XX家科研機構、檢測機構、管理部

門、生產企業(yè)等單位提出的反饋意見XX條。起草工作組對提出的意見經(jīng)過反

復研究、討論和處理后，修改形成了《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相

色譜法》送審稿及編制說明。具體意見匯總和處理表見《甘蔗皮渣中對香豆酸

檢測方法-高效液相色譜法》征求意見稿及編制說明。

5

5本標準與國內外分析方法的關系

本標準研究旨在建立一項滿足我國常用水果甘蔗的副產物甘蔗皮渣中對香

豆酸含量檢測要求，在質量控制目標和技術手段上與國際接軌，適應我國大部

分農副產品質控實驗室儀器設備和技術能力的檢測方法標準。通過查閱國內外

相關文獻資料，制定條件優(yōu)化方案，確保本方法前處理所采用的裝置操作簡便，

能夠滿足國內實驗室的條件要求。本標準擬采用高效液相色譜-紫外檢測分析方

法（HPLC-UV）測定對香豆酸。樣品的前處理，即甘蔗皮渣中對香豆酸的提取，

檢測方法參考文獻資料，選擇合適的色譜柱以及儀器條件。力求方法在穩(wěn)定、

可靠和實用的基礎上，達到國際先進水平，以適應我國農副產品甘蔗皮渣中對

香豆酸含量檢測、質控與管理的需要。

6主要技術指標依據(jù)與說明

6.1標準名稱

本標準主要解決甘蔗皮渣中對香豆酸測定的技術問題，所以將本標準的名

稱定為：《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》。翻譯為

“Determinationofp-coumaricacidinsugarcanerinds-Highperformanceliquid

chromatographymethod”。

6.2前言

明確了本標準的歸口單位及主要起草單位、起草人。

6.3主體內容

標準的主體內容包括：范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器和設備、

測定步驟、空白試驗、結果計算與表示、精密度和回收率、檢出限、檢驗報告

等。

6.4“范圍”的界定

本標準規(guī)定了用高效液相色譜法測定甘蔗皮渣中對香豆酸含量的原理、材

料、儀器與設備、測定步驟、結果計算與表示、精密度和回收率、檢驗報告。

本標準適用于甘蔗皮渣中對香豆酸含量的測定。

6

6.5原理

樣品經(jīng)提取后，將提取液過濾，經(jīng)高效液相色譜分離測定，在254nm下檢

測，根據(jù)保留時間定性，外標峰面積定量。

6.6試劑

6.6.1甲醇（CH4O）：色譜純。

6.6.2乙酸（CH3COOH）：色譜純。

6.6.3乙腈（CH3CN）：色譜純。

6.6.4對香豆酸（CAS:501-98-4）標準品：純度≥98%。

6.6.5有機濾模：孔徑0.45μm。

6.6.6流動相：A.甲醇B.0.1%乙酸溶液，0-30min：30%-80%A，流速：1.0

mL/min；乙酸溶液使用前經(jīng)濾膜過濾。

6.6.7對香豆酸標準儲備溶液（1.0mg/mL）：準確稱取對香豆酸標準品25mg

（精確至0.1mg）于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為

1.0mg/mL的標準儲備液。放置于4℃冰箱避光保存，有效期為一個月。

6.6.8對香豆酸中間濃度標準溶液（400μg/mL）：準確吸取10.0mL對香豆酸

標準儲備液（6.6.7）于25mL容量瓶中，用甲醇定容。放置于4℃冰箱避光保存，

有效期為一個月。

6.6.9對香豆酸系列標準工作液：分別吸取對香豆酸標準中間液（6.6.8）0.1mL、

0.25mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL至10mL

容量瓶中，用甲醇定容。該標準系列濃度分別為4.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0

μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、80.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL。

臨用時配制。

6.6.10除另外有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水應復合GB/T6682中一級水的

要求。

6.7儀器和設備

6.7.1液相色譜儀：配紫外（UV）檢測器或PDA檢測器。

6.7.2超聲波清洗器

6.7.3分析天平：根據(jù)方法準確度的要求，對香豆酸對照品的稱樣量需精確到

0.0001mg，因此使用感量為0.0001mg的分析天平。

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6.7.4電子天平：感量0.01mg。

6.7.5組織搗碎機，榨汁機

6.7.6旋轉蒸發(fā)儀

6.7.7色譜柱：C18液相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）或其他等效色譜柱。

6.7.8針式微孔濾器：0.45μm有機相過濾器。

6.7.9油浴鍋

6.7.10容量瓶：10mL，25mL。

6.7.11圓底燒瓶：25mL。

6.8甘蔗皮渣樣品制備

直接購買甘蔗皮渣或將甘蔗用清水沖洗數(shù)次，擦干，按取樣要求取200g樣

品將其切小塊，用榨汁機榨汁留皮渣，接著置于45℃烘箱中烘干，保存待用。

6.9甘蔗皮渣粗品的的提取

稱取1.00g（精確至0.01g）甘蔗皮樣品于25mL圓底燒瓶中，加入10mL2

mol/LNaOH溶液混合均勻，在室溫下磁力攪拌6h。之后逐滴加入6mol/L的

HCI溶液，調節(jié)pH值至2左右。將上述酸性溶液移入分液漏斗中，加入等體

積的乙酸乙酯，劇烈振蕩，靜置、分層，移取乙酸乙酯。然后重復上述步驟萃

取三次，合并三次所得乙酸乙酯相，用旋轉蒸發(fā)儀將萃取液在50℃蒸干，最后

得到0.2638g膏狀物，密封保存于4℃冰箱待后續(xù)使用。準確稱取100mg用10.0

mL色譜甲醇定容，過0.45μm針筒式有機相過濾器，即為試樣液。

6.10對香豆酸HPLC定量分析方法的建立

6.10.1檢測波長選擇

為了了解對香豆酸標樣在全波長下主成分與雜質的響應強度，采用HPLC法

以PDA檢測器對樣品進行全波長掃描（200～400nm），結果如圖1。

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b

圖1對香豆酸標準品的三維色譜圖

分析條件：液相色譜柱，ODS-3C18(250×4.6mmID,5μm)；流動相，甲

醇:0.1%乙酸水=55:45(v/v)；流速，1.0mL/min；柱溫，30℃；進樣體積，10μL；

運行時間，20min；檢測波長，190-800nm。除溶劑峰外，其他波長下無雜峰

出現(xiàn)。由于大多數(shù)雜質在254nm下有紫外響應，因此選用254nm作為檢測波

長。

6.10.2色譜柱的選擇

采用兩根不同的C18色譜柱，建立檢測對香豆酸的方法。

（1）AgilentEclipseXDBC18(150×4.6mmID,5μm)柱

分析條件：流動相，甲醇:0.1%乙酸水=35:65(v/v)；流速，1.0mL/min；柱溫，

30℃；進樣體積，10μL；運行時間，15min；檢測波長，254nm。

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圖2AgilentEclipseXDBC18色譜柱對香豆酸標準樣品及空白HPLC圖譜

（2）ApolloC18(150×4.6mmID,5μm)柱

分析條件：流動相，甲醇:0.1%乙酸水=42:58(v/v)；流速，1.0mL/min；柱

溫，30℃；進樣體積，10μL；運行時間，15min；檢測波長，254nm。

圖3ApolloC18色譜柱對香豆酸標準樣品及空白HPLC圖譜

10

6.10.3不同洗脫條件

6.10.3.1等度洗脫

分析條件：液相色譜柱，ODS-3C18(250×4.6mmID,5μm)；流動相，甲

醇:0.1%乙酸水=55:45(v/v)；流速，1.0mL/min；柱溫，30oC；進樣體積，10μL；

運行時間，15min；檢測波長，254nm。

圖4對香豆酸標準品及空白甲醇等度洗脫HPLC圖譜

分析條件：液相色譜柱，ODS-3C18(250×4.6mmID,5μm)；流動相，乙

腈:0.1%乙酸水=30:70(v/v)；流速，1.0mL/min；柱溫，30oC；進樣體積，10μL；

運行時間，15min；檢測波長，254nm。

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圖5對香豆酸標準品及空白乙腈等度洗脫HPLC圖譜

6.10.3.2梯度洗脫

液相色譜柱，ODS-3C18(250×4.6mmID,5μm)；流動相，A為甲醇，B為

0.1%乙酸水，0-35min，20%A-100%A，35-40min，100%A；流速，1.0mL/min；

柱溫，30℃；進樣體積，10μL；運行時間：40min；檢測波長：254nm。

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圖6對香豆酸標準樣品及空白梯度洗脫HPLC圖譜

6.10.4對香豆酸HPLC法檢測優(yōu)化后的色譜條件

對香豆酸HPLC法檢測優(yōu)化后的色譜條件為：

高效液相色譜儀：配紫外檢測器；

色譜柱：C18液相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）或其他等效色譜柱。

紫外檢測波長：254nm；

流動相：A甲醇B0.1%乙酸溶液0-30min：30%-80%A；

流速：1.0mL/min；

進樣體積：10μL；

柱溫：30℃±1℃。

在該優(yōu)化色譜條件下，對實際甘蔗皮渣樣品中對香豆酸含量進行測定，典

型的液相色譜譜圖如圖所示，可以看出對香豆酸與雜質分離很好。

圖7實際樣品HPLC譜圖

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6.10.5標準曲線

按照“6.6.9標準溶液的配制”配制一系列濃度分別為4.0μg/mL、10.0μg/mL、

20.0μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、80.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、

300μg/mL及400μg/mL、1000μg/mL、2000μg/mL的對香豆酸標準溶液，按

照“6.10.4參考色譜條件”進行HPLC分析，以對香豆酸標準溶液濃度X（μg/mL）

為橫坐標、色譜峰面積Y為縱坐標進行線性擬合，擬合結果見表4。

表1.對香豆酸的標準曲線、線性范圍、相關系數(shù)、檢出限及定量限

目標物標準曲線線性范圍相關系數(shù)檢出限定量限

(μg/mL)(r2)(ng/mL)(ng/mL)

對香豆酸Y=9.64X+202.644.0-20000.999112.4541.49

6.10.6檢出限和定量限

將對照品溶液逐步稀釋，進行液相色譜分析，計算其峰高與基線噪音高的

比，S/N=3（S為對照品峰高，N為基線噪音高）時的對照品濃度為檢出限（LOD），

得到對香豆酸的檢測限12.45ng/mL；S/N=10時的濃度為定量限（LOQ），得到

對香豆酸的定量限為41.49ng/mL。

6.10.7精密度

取1000μg/mL的對香豆酸標準樣品溶液，按照“6.10.4參考色譜條件”進

行HPLC分析，重復進樣6次，測得其保留時間和峰面積，計算其相對標準偏差

（RSD），結果見表2。由結果表2可知，該方法的精密度良好。

表2對香豆酸精密度實驗結果

序號保留時間峰面積

TimeRSD(%)AreaRSD(%)

116.29210427

216.28710416

316.3100.121104260.753

416.31310284

516.29310527

616.25810449

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6.10.8穩(wěn)定性

取1000μg/mL的對香豆酸標準樣品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h時，

按照“6.10.4參考色譜條件”進行HPLC分析，測得其保留時間和峰面積，計算

其相對標準偏差（RSD），結果見表3。由結果表3可知，該方法的穩(wěn)定性良好。

表3對香豆酸穩(wěn)定性實驗結果

檢測時間保留時間峰面積

（h）TimeRSD(%)AreaRSD(%)

016.49810780

216.50510752

416.5570.243107710.396

616.51110870

816.47610801

1016.43610824

6.10.9重復性

準確稱量10.0mg對香豆酸標準樣品6份，分別用甲醇定容到10mL，制

備得到濃度為1000μg/mL的對香豆酸標準樣品溶液6份。按照“6.10.4參考色

譜條件”進行HPLC分析，測得其保留時間和峰面積，計算其相對標準偏差

（RSD），結果見表4。由結果表4可知，該方法的重復性良好。

表4對香豆酸重復性實驗結果

序號保留時間峰面積

TimeRSD(%)AreaRSD(%)

116.3829734

216.3939608

316.3990.16896550.709

416.4349757

516.4399797

616.4489715

6.10.10方法的準確度

精密取甘蔗皮樣品1mL，按照“6.10.4參考色譜條件”進行HPLC分析，根

據(jù)對香豆酸的標準曲線計算出甘蔗皮渣樣品溶液中對香豆酸的濃度為503.9

μg/mL，換算成甘蔗皮渣中對香豆酸的含量為13292.88mg/kg。另精密取該已知

15

對香豆酸含量的甘蔗皮渣樣品9份，每份1mL，每3份分別精密加入濃度為1000

μg/mL的對香豆酸標準樣品0.4mL、0.5mL和0.6mL，混合均勻后，按照按照

“6.10.4參考色譜條件”進行HPLC分析，計算其回收率，結果見表5。

表5對香豆酸加標回收結果（n=5）

序號樣品含量添加量實測值回收率平均回收率RSD

(μg)(μg)(μg)(%)(%)(%)

1503.9400930.15102.9099.732.76

2884.8797.89

3889.4798.40

4500975.4997.1797.170.85

5983.6897.99

6967.1496.34

76001109.75100.53101.931.43

81123.79101.80

91141.91103.44

16

6.10.11小結

上述結果表明，高效液相色譜法測定甘蔗皮渣中對香豆酸，實驗室內方法檢出限為12.45ng/mL，定量限為41.49ng/mL。對甘蔗皮

渣實際樣品進行加標回收實驗，在添加濃度400mg/kg～600mg/kg濃度范圍內，回收率在95%～105%之間，相對標準偏差小于5%，

說明方法的精密度和準確度良好。

綜上所述，本標準方法能夠滿足甘蔗皮渣中對香豆酸含量測定要求。

6.11方法驗證

6.11.1參加驗證的實驗室

選擇5家具有資質的實驗室參加方法的驗證工作（表6）。向驗證單位提供方法草案、驗證方案、標準溶液和驗證報告格式。驗證

單位按照方法草案準備實驗用品，在規(guī)定時間內完成驗證實驗并反饋驗證結果報告。在方法驗證前，參加驗證的操作人員應熟悉和掌

握方法原理、操作步驟及流程。方法驗證過程中所用的試劑和材料、儀器和設備及分析步驟應符合方法相關要求。

17

7采用國際標準和國外先進標準程度，以及與國際、國外同類標準

水平的對比情況

目前對香豆酸含量測定方法無國際標準和國外先進標準可參照。本標準在制

訂過程中對以對香豆酸為活性成分的甘蔗皮渣的質量、檢測和市場進行了充分

的調查研究，并廣泛征求和采納了國內相關領域專家的意見和建議，所制定的

標準適合我國國情，具有先進性、科學性、實用性和可操作性，

8與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標準的關系

標準所確定的各項技術指標和內容符合我國現(xiàn)行的有關方針、政策，并與相

關法律、法規(guī)、標準吻合。

本標準頒布實施后，填補我國甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法的空白，更有利

于行業(yè)應用；與現(xiàn)行的法律、法規(guī)及其他國家標準沒有矛盾。

9標準作為強制性或推薦性標準的意見

建議本標準作為推薦性國家標準發(fā)布。

10實施標準的建議

如果本標準被批準并發(fā)布，為了貫徹好本標準，使其有效發(fā)揮作用，建議在

標準發(fā)布后，在相關企業(yè)和檢測機構進行宣傳和貫徹，并組織有關部門和人員

進行學習和培訓。

11參考文獻

參考文獻

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酸和肉桂酸的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2016,22(03):44-47.

19

附表1：農產品甘蔗標準

GB/10498-2010CNS2876

產品名稱糖料甘蔗食用甘蔗

外觀質量蔗莖不帶泥沙、須根和葉鞘，蔗梢削本品不得有萌芽，并應清潔去

至生長點下明顯見肉，蔗頭不帶“煙葉除根；

斗頭；本品應無裂痕（生長裂縫）。

不帶干枯莖、腐敗莖（包括水浸、火蟲孔率（3.2%以下）及機械之

燒、霜凍嚴重變質莖）、1m以下的蔗傷害，以上合計之容許度為

筍、嚴重病蟲鼠害莖和其他非蔗物。10%以下。

甘蔗蔗糖分大于或等于12%大于或等于8.7（錘度16度以

上）

蔗汁重力純度大于或等于80%

附表2：造紙用原料蔗渣標準QB/T3701-1999

項目一級二級三級

水分，%≤525252

蔗渣含髓率，%≤273441

堿抽出物含量,%≤373737

白度，%≥232315

蔗渣纖維均整度，%

保留于10目篩≥343330

保留于20目篩≥353433

附表3：甘蔗糖蜜行業(yè)標準

QB/T2684-2005UnitedStatesStandardsfor

GradesOfSugarcaneMolasses

名稱甘蔗糖蜜

感官要求色澤深棕、呈粘稠液體、無異味。

總糖分（蔗糖分+還原糖分）/%≥48.0A級：63

B級：61.5

C級：58.0

純度（總糖分/折射錘度）%≥60.0

酸度15

總灰分（硫酸灰分）%≤12A級：5.00

B級：7.00

C級：9.00

銅（以Cu計）（mg/kg）≤10

菌落總數(shù)/（cfu/g）≤5.0X105

20

《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》.................................................................I

國家標準編制說明...........................................................................................................................I

1任務來源........................................................................................................................................1

2起草的目的意義............................................................................................................................1

2.1企業(yè)產品質量控制的需要.................................................................................................1

2.2完善國家標準的需要.........................................................................................................2

3對香豆酸研究、應用與標準現(xiàn)狀................................................................................................2

3.1對香豆酸研究.....................................................................................................................2

3.2對香豆酸開發(fā)應用.............................................................................................................2

3.3對香豆酸標準.....................................................................................................................2

4主要起草過程................................................................................................................................3

4.1成立標準制定工作組.........................................................................................................3

4.2確定工作計劃和標準制定原則.........................................................................................3

4.3查詢國內外相關標準和文獻資料.....................................................................................3

4.4研究建立標準方法，開展條件實驗................................................................................4

4.5方法驗證.............................................................................................................................4

4.6形成標準討論稿和編制說明.............................................................................................4

4.7形成標準草案.....................................................................................................................5

4.8形成標準征求意見稿和編制說明.....................................................................................5

4.9征求意見并形成標準送審稿和編制說明.........................................................................5

5本標準與國內外分析方法的關系...............................................................................................6

6主要技術指標依據(jù)與說明............................................................................................................6

6.1標準名稱.............................................................................................................................6

6.2前言.....................................................................................................................................6

6.3主體內容.............................................................................................................................6

6.4“范圍”的界定......................................................................................................................6

6.5原理.....................................................................................................................................7

6.6試劑.....................................................................................................................................7

6.7儀器和設備.........................................................................................................................7

6.8甘蔗皮渣樣品制備.............................................................................................................8

6.9甘蔗皮渣粗品的的提取.....................................................................................................8

6.10對香豆酸HPLC定量分析方法的建立..........................................................................8

6.10.1檢測波長選擇........................................................................................................8

6.10.2色譜柱的選擇.......................................................................................................9

6.10.3不同洗脫條件......................................................................................................11

6.10.3.1等度洗脫...................................................................................................11

6.10.3.2梯度洗脫...................................................................................................12

6.10.4對香豆酸HPLC法檢測優(yōu)化后的色譜條件......................................................13

6.10.5標準曲線.............................................................................................................14

6.10.6檢出限和定量限.................................................................................................14

6.10.7精密度.................................................................................................................14

6.10.8穩(wěn)定性.................................................................................................................15

6.10.9重復性.................................................................................................................15

I

6.10.10方法的準確度....................................................................................................15

6.10.11小結....................................................................................................................17

6.11方法驗證........................................................................................................................17

6.11.1參加驗證的實驗室.............................................................................................17

7采用國際標準和國外先進標準程度，以及與國際、國外同類標準水平的對比情況..........18

8與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標準的關系......................................................................................18

9標準作為強制性或推薦性標準的意見......................................................................................18

10實施標準的建議........................................................................................................................18

11參考文獻....................................................................................................................................18

II

1任務來源

本國家標準的制定任務是根據(jù)國家標準化管理委員會下達的國家標準制定

計劃《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液相色譜法》項目（計劃號為

20193344-T-424）起草。國家標準計劃《甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-高效液

相色譜法》由北京化工大學上報，中國標準化研究院歸口及執(zhí)行，主管部門為

國家市場監(jiān)督管理總局(質檢)。本標準由北京化工大學，中華全國供銷合作總

社濟南果品研究院，中國標準化研究院，中國農業(yè)大學、大連依利特分析儀器

有限公司等單位共同起草。本標準主要起草人：魏蕓、鄭曉冬