關(guān)于病毒感染的檢查方法與防治原則1第一節(jié)病毒感染的檢查方法檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀(guān)察光鏡檢查包涵體分離培養(yǎng)第2頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，還特別注意以下原則：采集急性期標(biāo)本使用抗生素：標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理冷藏保存、快速送檢采集雙份血清第3頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)（cell

culture）雞胚接種（egginoculation）動(dòng)物接種（animalinoculation）第4頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無(wú)菌處理動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽(yáng)性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性第5頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)生長(zhǎng)方式分類(lèi)：?jiǎn)螌蛹?xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）從細(xì)胞來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)分類(lèi)：

原代細(xì)胞（primarycell）二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）（一）病毒的分離培養(yǎng)第6頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞第7頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.細(xì)胞培養(yǎng)（1）原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織塊分散的單個(gè)細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感

②生長(zhǎng)能力有限,獲取成本高

③可攜帶潛伏病毒第8頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）二倍體細(xì)胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感②不帶異種蛋白(人源性)③不帶病毒，無(wú)致瘤潛能④可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)第9頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感性高②繁殖能力高，傳代時(shí)間長(zhǎng)③有致癌危險(xiǎn)，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)第10頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指征：致細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒干擾作用（viralinterference）細(xì)胞代謝改變（一）病毒的分離培養(yǎng)第11頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第12頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落（1）致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）第13頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞（1）致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）第14頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天③形成包涵體(inclusionbody)（1）致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）第15頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天腮腺炎病毒感染細(xì)胞（2）紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體第16頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋猴腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋猴腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋猴腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒埃可病毒埃可病毒被抑制，CPE(－)（4）細(xì)胞代謝改變第17頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.

雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）

痘苗病毒、人類(lèi)皰疹病毒

尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒

羊膜腔（amnioticcavity）

流感病毒的初次分離

卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒第18頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第19頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜第20頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第21頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.動(dòng)物接種應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀(guān)察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒第22頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）病毒的鑒定1.形態(tài)學(xué)鑒定：電子顯微鏡2.血清學(xué)鑒定：鑒定病毒種、型、亞型，免疫標(biāo)記法、血凝抑制試驗(yàn)等。血凝抑制試驗(yàn)

—正粘病毒型與亞型鑒定病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗(yàn)）第23頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）病毒的鑒定3.分子生物學(xué)鑒定：抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測(cè)序第24頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.50%組織細(xì)胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）測(cè)定3.空斑形成試驗(yàn)（plaqueformationtest）：空斑形成單位（

plaqueformationunit，PFU）（三）病毒數(shù)量與感染性測(cè)定感染性病毒量第25頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、病毒感染的診斷（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查：包涵體第26頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、病毒感染的診斷（二）病毒成分檢測(cè)1.病毒蛋白抗原檢測(cè)：免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測(cè)：核酸擴(kuò)增技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、基因芯片技術(shù)、基因測(cè)序第27頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、病毒感染的診斷（三）病毒感染的血清學(xué)診斷中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)特異性IgM抗體檢測(cè)其他：早期抗原的抗體檢測(cè)第28頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防生物制品：微生物及其代謝產(chǎn)物、動(dòng)物免疫血清、免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子。防治和診斷感染性疾病。第29頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品滅活疫苗（inactivatedvaccine）減毒活疫苗（attenuatedvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）基因工程疫苗（geneticallyengineeringvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）第30頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品免疫球蛋白：血清丙種球蛋白細(xì)胞免疫制劑：

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF第31頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)病毒感染的治療（一）抗病毒化學(xué)制劑核苷類(lèi)藥物：阿昔洛韋、阿糖腺苷、齊多夫定（AZT）非核苷類(lèi)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑：奈韋拉平、吡啶酮蛋白酶抑制劑：沙奎那韋其他抗病毒藥物：金剛烷胺（二）干擾素和干擾素誘生劑（三）中草藥防治病毒感染（四）新抗生素類(lèi)（五）治療性疫苗（六）治療性抗體：帕利珠（七）基因治療劑：反義寡核苷酸、干擾RNA、核酶第32頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有