版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1豬A型塞內(nèi)卡病毒分離鑒定技術(shù)規(guī)范本文件適用于豬A型塞內(nèi)卡病毒的病原分離和鑒定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和NY/T541獸醫(yī)診斷樣本采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范4縮略語DNAmarker：DNA相對(duì)分子質(zhì)量5.1主要試劑25.2主要儀器設(shè)備穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀和水平電泳槽、凝膠成像儀、倒置生物用一次性注射器吸取臨床發(fā)病豬只水泡液0.5mL~1mL，并將水泡液裝入保存管，水泡液4℃3000r/min離心10min，以0.22μm無菌濾膜過濾除菌后，-73按常規(guī)方法將PK-15細(xì)胞分裝在25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶若接種細(xì)胞第1代72h后未出現(xiàn)明顯CPE，按上述收毒方法收獲細(xì)胞/病毒液再接種生長良好的單層PK-15細(xì)胞進(jìn)行盲傳，即1mL第一代細(xì)胞/病毒液加4mL細(xì)胞維持液，37°C培養(yǎng)。如此盲傳3代~5代，再進(jìn)行RT-LAMP和RT-PCR引物針對(duì)SVAVP1蛋白基因保守區(qū)域，引物取，并使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取核酸反轉(zhuǎn)錄成cDNA，于-20反應(yīng)體系中各組分見表2，反應(yīng)體系可根據(jù)表中各組分比例4體積(μL）BstDNA聚合酶緩沖液BstDNA聚合酶12221反應(yīng)體系見表3，反應(yīng)體系可根據(jù)表中各組分比體積(μL）5131159結(jié)果判定9.1RT-LAMP9.2RT-PCR9.3病毒分離鑒定6NaCl0.5mol/L（pH8.0）乙二胺四待上述混合物完全溶解后，加蒸餾水至1000mL，置4℃冰箱中備用，如配制1%的瓊脂糖凝膠和用A.31.0%瓊脂糖凝膠板制備微波爐充分溶解后，加入溴化乙錠，倒入凝膠板中，在距離底板0.5mm的位置上放置梳子，凝膠7CCGATCTCGACTACTGAATGTAATTAAGGTACTGGAGAAGCCACAGCAACAGGTGCACAGCAGGACGATGGTTACTTTTGTCTTCTAACACCGCTTCCCGACCCGCTACTCGTTTCGGCCTGTACGTCAACCCGTCTGACAGTTACAGTTTGGCCTGTTTCACTTACTTTAGATCAGACCTTGAAGTCACGGTGGTCTCACTGGAGATTTGGAATTCGCCGTGGGGTGGTTC
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025-2030中國尼莫地平行業(yè)市場(chǎng)深度調(diào)研及發(fā)展趨勢(shì)與投資前景預(yù)測(cè)研究報(bào)告
- 智能人力資源管理系統(tǒng)開發(fā)合作協(xié)議書
- 物流公司合同書協(xié)議書二零二五年
- 工程勞務(wù)合伙協(xié)議書二零二五年
- 品牌運(yùn)營合作協(xié)議書
- 攝影行業(yè)拍攝過程中意外傷害免責(zé)協(xié)議
- 企業(yè)級(jí)大數(shù)據(jù)分析平臺(tái)運(yùn)維協(xié)議
- 2025-2030年中國大理石底蠟行業(yè)深度研究分析報(bào)告
- 2025年活性炭纖維植絨布項(xiàng)目投資可行性研究分析報(bào)告
- 2025年中國礦業(yè)大學(xué)003力土學(xué)院081401巖土工程報(bào)錄數(shù)據(jù)分析報(bào)告
- 公司債權(quán)債務(wù)轉(zhuǎn)讓協(xié)議范本
- 2024年南陽農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院單招職業(yè)適應(yīng)性測(cè)試題庫附答案
- 2024年藥學(xué)服務(wù)技能大賽（省賽）備考試題庫（含答案）
- 《化工園區(qū)有毒有害氣體環(huán)境預(yù)警體系技術(shù)規(guī)范》
- 2.2.3 茶會(huì)場(chǎng)地布置
- 第10課和諧校園共同維護(hù)（課件）-【中職專用】高一思想政治《心理健康與職業(yè)生涯》（高教版2023·基礎(chǔ)模塊）
- MOOC 音樂與科學(xué)-南京郵電大學(xué) 中國大學(xué)慕課答案
- 初中地理實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)案例
- 《調(diào)相機(jī)運(yùn)行規(guī)程》
- 施工現(xiàn)場(chǎng)一級(jí)動(dòng)火作業(yè)審批表
- 污水管網(wǎng)巡查及養(yǎng)護(hù)投標(biāo)方案（技術(shù)標(biāo)）
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論