廢用狀態下達烏爾黃鼠比目魚肌calpain和底物desmin的變化及其機制的研究研究目的：1.研究骨骼肌廢用及廢用后再負荷對大鼠比目魚肌鈣蛋白酶(calpain)和骨架蛋白desmin表達的影響及藥物川芎嗪的防護作用。2.研究骨骼肌廢用及廢用后再負荷對達烏爾黃鼠比目魚肌calpain和骨架蛋白desmin表達的影響。3.觀察廢用及廢用后再負荷大鼠和黃鼠比目魚肌Z線的變化。4.研究骨骼肌廢用及廢用再負荷后對大鼠比目魚肌肌細胞膜通透性的影響。研究方法：1.酪蛋白酶普法(CaseinZymography)檢測calpain的活性；2.蛋白免疫印跡法(Westernblotting)測定比目魚肌calpain及其抑制酶calpastatin的表達；3.實時定量RT-PCR測量desminmRNA的表達；4.透射電子顯微鏡觀察骨骼肌Z線的變化；5.伊文斯蘭(Evansblue)熒光染料檢測肌細胞膜通透性改變。研究結果：1.與正常大鼠相比,吊尾組大鼠比目魚肌calpains的活性明顯升高；川芎嗪灌藥組與單純吊尾組相比,calpain1活性下降了52%,具有極顯著意義(P<0.01),calpain2無顯著意義；吊尾再負荷組與吊尾組相比,calpain1有顯著性升高(P<0.05),calpain2無顯著性差異；冬眠不同時期中,黃鼠比目魚肌calpain1和2活性相對穩定,變化無統計學意義。秋季吊尾組與冬眠前組相比,calpain1的活性顯著升高(P<0.05),calpain2的變化無顯著意義；其它各組與冬眠前相比,calpain1和2的變化均無顯著性意義。2.與對照組相比白鼠吊尾組calpain1的表達變化不明顯,calpain2的表達有顯著性升高(P<0.01)；強迫運動組與單純吊尾組相比,calpain1和2的表達變化不明顯；川芎嗪灌藥組與吊尾組相比,calpain1的表達變化不明顯,calpain2有有顯著性降低(P<0.05)。各組calpastatin表達量沒有顯著性差異；黃鼠吊尾組與冬眠前組相比,calpain1和2都有明顯的升高,其中,calpain1的升高具有顯著性意義,calpain2的具有極顯著性意義；冬眠中、出面組與冬眠前組相比,calpains的變化均無明顯變化；出眠運動組與冬眠前相比calpain1的升高有極顯著性意義,Calpain2無顯著性變化；與冬眠前相比,冬眠中和出眠組calpastatin的升高具有極顯著性意義,其他各組無明顯變化。3.與正常對照組相比,吊尾組大鼠比目魚肌desminmRNA的表達顯著下降,川芎嗪灌胃組與正常對照組相比無顯著性差異,與單純吊尾組相比,desminmRNA的表達明顯升高(P<0.05)。吊尾后強迫運動組與同步對照組相比desminmRNA的表達顯著降低(P<0.01),與單純吊尾組相比,有下降趨勢,但沒顯著性變化。與冬眠前相比,冬眠中黃鼠比目魚肌desminmRNA的表達顯著性升高,出眠組無明顯變化,出眠后強迫運動組desminmRNA表達略有升高,但無統計學意義。4.經伊文思藍染料染色后,正常組和同步對照組細胞間隙內充盈熒光,但基本無染料進入細胞內部；吊尾組有部分染料進入細胞；吊尾后再負荷組充盈染料的細胞數目明顯增多,有較多細胞內部出現EB。5.電鏡觀察發現：對照組大鼠肌原纖維直徑均一,Z線寬度正常完整。吊尾組大鼠比目魚肌Z線排列扭曲,呈波浪鋸齒狀。川芎嗪灌藥組Z線排列扭曲,呈波浪狀,但基本一致。冬眠前黃鼠比目魚肌肌原纖維直徑均一,Z線寬度正常完整；冬眠中黃鼠比目魚肌肌原纖維與冬眠前黃鼠Z線排列相似,肌原纖維直徑均一整齊,Z線寬度正常；出眠黃鼠肌原纖維Z線縱向排列略有偏差,肌節寬度均一,明暗帶清晰。研究結論：1.由Calpian介導的細胞骨架蛋白的降解速率增強可能是導致大鼠廢用及廢用后再負荷骨骼肌損傷的重要機制,川芎嗪對蛋白降解途徑有抑制作用；黃鼠在非冬眠期也會出現蛋白降解能力加強,但是在冬眠期蛋白保存機制較優。2.吊尾及吊尾后強迫運動使大鼠比目魚肌desminmRNA下調,川芎嗪對其有抑制作用；黃鼠在冬眠不同時期desminmRNA保持穩定,并在冬