地方標準編制說明標準名稱亳菊組培快繁與脫毒技術規程任務來源（項目計劃號）皖市監函〔2022〕550號“安徽省市場監督管理局關于下達2022年第二批安徽省地方標準制修訂計劃的通知”，共計229項。項目計劃號：2022-2-184負責起草單位安徽農業大學單位地址參與起草單位安徽農業大學、亳州興禾農業發展有限公司、安徽省亳州中醫藥集團有限公司、安徽省農業科學院園藝研究所、安徽中藥材種植聯合研究中心標準起草人（全部起草人，應與標準文本前言中起草人排序一致）序號姓名單位職務職稱電話12345678910111213編制情況1、編制過程簡介2022年9月26日，收到《安徽省市場監督管理局關于下達2022年第二批安徽省地方標準制修訂計劃的通知》后，成立標準編制小組，成員有高俊山、劉凱、李大輝、趙夢茹、黃舉飛、李衛文、周雪娟、陳情情、郭寧、楊忠、劉威、牛巖巖、陳娜。標準起草過程：2021年3月-2021年12月完成資料收集工作；2022年9月26日公示，正式立項；2022年10月1日-2023年11月30日在課題研究及實地調研的基礎上，確定標準編制工作的整體框架和詳細計劃，并完成標準初稿的制定工作；2023年12月向社會公開征求意見，并形成“征求意見稿”。征求意見情況：XXXX年XX月，由工作組牽頭負責通過網站宣傳、雜志登載、文稿郵寄、會議等方式公開征求意見，共向XX個有關行業單位、科研院所、大專院校及有代表性的標準利益方發函征求意見。截止XXXX年XX月底，本次征求意見共收到X家單位XX條意見，最終XX條采納，XX條未采納。審查情況：XXXX年XX月XX日，XXXXX在XX組織召開了《XXXXXX》地方標準審查會，來自XXXX等單位專家組成審查專家組。專家委員會認真聽取了編制單位的匯報，審閱了相關材料，經質詢和討論，提出了XX條修改建議，并一致認為，XXXXXXXXXXXXXXX，建議修改完善后報批。報批情況：工作組根據審查意見對標準送審稿作了修改和完善，于XXXX年XX月形成標準報批稿、編制說明及其它相關文件，報至XXXXXXXX。2、制定標準的必要性和意義亳菊[Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.]為菊科多年生宿根草本植物,花朵大、色白，主產地在安徽亳州、渦陽一帶,栽培歷史悠久。《中藥大辭典》中記載:“白菊產安徽亳州,稱亳菊,品質最佳”。《中國藥典》(2020年版)收錄亳菊為中藥材，是我國四大名菊之一。作為藥用菊花，亳菊花中含有綠原酸、木犀草苷、黃芩苷、槲皮素和金合歡素等有效成分，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降血脂、降壓和保護心血管等作用，用于風熱感冒、頭疼眩暈、目赤腫痛、眼目昏花、瘡癰腫毒等，在醫藥上具有廣泛的應用。亳菊是傳統的常用大宗藥材，藥用品種豐富，但在亳菊長期栽培過程中，藥農只種不選，自繁自留，而且不同區域，品種種苗混用，近緣物種雜交，導致病毒感染、種質混亂、種性退化嚴重，進而使亳菊抗逆性減弱、產量下降、品質不穩。同時，由于亳菊連年無性繁殖，病毒積累日趨嚴重，造成亳菊生長發育不良和品種退化，農民種植效益低下，亳菊種植面積逐年減少，正面臨著極大的困境。本規程探討亳菊組織培養的快繁與脫毒技術，通過脫毒快繁、提純復壯、規范栽培等研究，篩選最優技術方案，為亳菊品種的提純復壯，加快亳菊無病毒種苗繁育,促進亳菊規范化生產,恢復亳菊種植面積，確保亳菊的藥用價值提供理論依據。3、制定標準的原則和依據，與現行法律法規、標準的關系。本標準制定的原則是在對國內相關方法標準和技術資料調查研究的基礎上，結合實驗研究數據，既考慮技術的科學性，又考慮實際的有效性和可操作性；既考慮遵循統一的國家標準以及出口質量檢測項，又考慮環境保護的特點，力求制定規范，簡便易懂，切實可行。4、主要條款的說明，主要技術指標、參數、試驗驗證的論述（詳細說明）4.1主要條款本文件的章節由術語和定義、外植體材料選擇、消毒滅菌、初代培養、繼代培養、生根培養、病毒檢測、煉苗移栽及苗床管理等主要部分組成。本文件規定了本規程的術語和定義、外植體材料選擇、消毒滅菌、初代培養、繼代培養、生根培養、病毒檢測、煉苗移栽及苗床管理等。4.2主要技術指標、參數、試驗驗證的論述主要技術指標、參數、試驗驗證的論述來自于試驗取得的結果和相關文獻的查閱，主要內容如下：4.2.1外植體材料選擇供試材料采自安徽亳州興禾農業發展有限公司中藥材種植示范園區。為多年生草本，高70～90cm，莖直立，多分枝，被白色絨毛。葉淡綠色，卵狀三角形，長4.0～5.5cm，寬3.5～5.2cm。葉兩面均被白色絨毛，葉羽狀裂，葉緣具鈍鋸齒。頭狀花序著生枝上部，疏散排列成傘房狀。花序直徑3.05.0cm，總苞3～4層，舌狀花白色或微黃色,8～12層。管狀花少，黃色。每花序有舌狀花148～286朵,管狀花4～50朵。選取當年種植的亳菊植株，將大小適宜的亳菊嫩莖作為外植體材料。4.2.2消毒滅菌取當年生長約20.0cm幼嫩莖段，先用自來水沖洗30分鐘去除表面泥土灰塵，然后移至超凈工作臺。將嫩莖置于無菌瓶中，倒入適量75%乙醇，使嫩莖浸泡并震蕩無菌瓶消毒30s，迅速倒出酒精，再用0.1%HgCl2浸泡消毒8～10min，期間不斷震蕩，倒出升汞后用無菌水沖洗4～5次，靜置晾干待用。4.2.3初代培養取消毒處理后的亳菊嫩莖，在解剖鏡下仔細剝離0.3～0.5mm莖尖，接種于不同激素配比的初代誘導培養基上，以MS為基本培養基，不同激素配比為：①MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L；②MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L；③MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L。以每瓶接種3-5個莖尖，每個處理接種10瓶，放置在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強度1500～2000lx的培養室中培養，30d左右統計結果。如表1所示，接種7d后，生長點開始膨大，30d左右綠色芽點冒出，繼而分化出不定芽或愈傷組織。隨著6-BA濃度的增加，愈傷組織大量形成，且叢生芽的質地逐漸變脆，而NAA濃度水平的提高易增加愈傷組織的形成。試驗結果表明，當6-BA為2.0mg/L、NAA為0.2mg/L時能夠分化出大量叢生芽，且芽苗壯實，無愈傷組織，為亳菊叢生芽分化的最佳培養基配方。表1不同激素配比誘導叢生芽情況4.2.4繼代培養將經過初代誘導培養獲得的叢生芽或組培苗切成1.5-2cm帶有2-3個葉片的莖段，接種至增殖壯苗培養基中，培養基配方為：①MS；②MS+6-BA0.10mg/L；③MS+6-BA0.30mg/L；④MS+6-BA0.50mg/L。每瓶接種8-10個莖段，放置在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強度2200～4000lx的培養室中培養，20d左右觀察植株的長勢。由表2可知，隨著6-BA濃度的增加，植株顏色逐漸加深，植株長高逐漸變緩，長勢無明顯差別，基于成本等因素考慮，選擇MS培養基作為增殖培養的培養基。表2增殖培養結果4.2.5生根培養將增殖培養獲得的高度約為7-8cm的叢芽分離成單株，并切成3-4cm帶有3-4個葉片的莖段，以每瓶6-8株接種至生根培養基，配方為：①1/2MS；②1/2MS+NAA0.30mg/L；③1/2MS+NAA0.50mg/L；④1/2MS+IBA0.30mg/L；⑤1/2MS+IBA0.50mg/L。放置在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強度2200～4000lx的培養室中培養，觀察生長情況。由表3可知，亳菊生根較易，在5種生根培養基中培養7d后均有白根生出，加有IBA的④和⑤號培養基接種5d就有新根長出，綜合根數和根系生長狀況，亳菊生根最優配方為④號培養基:1/2MS+IBA0.30mg/L。表3試管苗生根培養結果4.2.6病毒檢測對即將煉苗的植株進行病毒檢測。采用PCR法對亳菊組培苗TAV、CMV、CVB、CSVD等病毒進行檢測。4.2.7煉苗在組培瓶中生長的根、莖、葉俱全的完整植株，將生長健壯、葉色正綠平展、根長2-4cm、高4-6cm的亳菊生根苗在溫室內進行閉瓶煉苗，然后打開瓶塞，移至溫室強光下煉苗3-5d后移栽。4.2.8移栽在保證組培穴盤苗正常生長的前提下，可因地制宜選擇基質種類。基質開袋倒槽，裝入穴盤中并稍壓緊待用。將水池用75%酒精噴灑消毒5min，隨后用自來水沖洗干凈。蓄水池內加入適量的水，輕輕取出煉苗馴化后的組培苗，用水洗凈根部附著的培養基且盡量防止傷苗，對洗凈后的亳菊苗進行75%酒精噴灑消毒，放置1-2min后清水沖凈。將穴盤基質挖出深2-4cm，直徑3cm的槽，然后把清洗處理后的苗移栽到槽中，填土輕輕按平。4.2.9放置苗床配置2000倍枯草芽孢桿菌和1000倍礦源黃腐酸鉀用噴霧機進行噴灑，使其充分澆勻澆透。穴盤苗分移栽日期，在苗床上整齊擺放。4.2.10苗床管理移栽后用遮陽網遮陽，煉苗后遮陽時間不少于7天，然后遮陽率調為75%左右最適宜亳菊苗健康生長。據天氣情況與季節特性及時澆水，保持土壤含水量50%-60%，且每次澆水都輔以2000倍枯草芽孢桿菌進行噴灌。煉苗7天后可以進行施加1000倍礦源黃腐酸鉀促進其根生長，后續可每隔10天進行噴灑1000倍枯草芽孢桿菌進行病蟲害防治和1000倍史丹利20-20-20保證土壤的肥力。參考文獻：[1]陳好,莫麗文,王澤峰等.地被菊花‘珍粉’組織培養與植株再生體系的建立[J].分子植物育種,2023,21(05):1633-1640.[2]張冰,楊星宇,駱美雯等.黃菊花組織培養研究進展及不同植物生長調節劑配方對愈傷組織誘導情況的研究[J].鄉村科技,2022,13(09):82-84.[3]武穎.菊花“粉十八”組織培養技術研究[J].現代園藝,2022,45(14):13-15.[4]曲曉慧.幾種菊屬野生植物再生體系的建立[D].南京農業大學,2022.[5]王俊俠,劉全鳳,王靜等.名貴菊花試管苗生根與移栽試驗研究[J].現代園藝,2020,43(01):24-25.[6]趙維萍,王艷琪,劉洋等.藥用菊花組織培養技術研究進展[J].安徽農學通報,2019,25(12):36-38+44.[7]鄧麗娟,萬子昱,駱淑媛.激素對菊花組織培養的影響[J].綠色科技,2018(24):177-178.[8]江芹,李衛文,董玲,廖華俊,俞年軍.亳菊的組織培養快繁技術研究[J],安徽農業科學,2010,38(34):19343-19345.5、標準中如果涉及專利，應有明確的知識產權說明無6、采用