實驗七、逆境對植物的傷害及植物對逆境的適應性調節實驗原理磺基水楊酸對脯氨酸有特定反應，當用磺基水楊酸提取植物樣品時，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中。然后用酸性茚三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸反應，生成穩定的紅色化合物，再用甲苯處理，則色素全部轉移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長下測定吸光度，即可從標準曲線上查出脯氨酸的含量。脯氨酸的測定脯氨酸的測定（一）材料及試劑1.材料：植物葉片。2.試劑及配制：2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：將1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol·L－1磷酸中，攪拌加熱（70℃）溶解，貯于冰箱中。(配置的酸性茚三酮溶液僅在24h內穩定，因此最好現用現配。)3％磺基水楊酸配配制：3g磺基水楊酸加蒸餾水溶解后定容至100ml。100μg·mL-1脯氨酸標準母液配制：精確稱取20mg脯氨酸，倒入小燒杯內，用少量蒸餾水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度（為100μg·mL－1脯氨酸母液）。冰醋酸；甲苯。（二）實驗步驟1.

脯氨酸標準曲線的制作

用100μg·mL－1脯氨酸母液配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μg/mL的標準溶液。取標準溶液2mL，然后向各管分別加入2ml3％的磺基水楊酸溶液，加入2ml冰醋酸及4mL2.5﹪酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱1h，溶液即呈紅色。冷卻后加入4ml甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻，取上層液，以甲苯溶液為空白對照，在520nm波長處測定吸光度（A）值。OD值為縱坐標，脯氨酸濃度（μg/mL）為橫坐標繪制標準曲線?；貧w方程式2.樣品的測定2.1脯氨酸的提取

稱取不同處理的植物葉片各0.5g，分別置大試管中，然后向各管分別加入5mL3％的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取過程中要經常搖動），冷卻后3000r/min離心10min。取上清液待測。2.2測定吸取2ml提取液于帶玻塞試管中，加入2mL去離子水，2mL冰醋酸及4mL2.5﹪酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱1h，溶液即呈紅色。冷卻后加入4mL甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻。用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液為空白對照，在520mm波長處測定吸光度（A）值。從標準曲線上查出樣品測定液中脯氨酸的含量，按下公式計算樣品中脯氨酸含量：

X×提取液總量（mL）脯氨酸含量（μg·g－1Fw）＝—————————————————樣品鮮重（g）×測定時提取液用量（mL）公式中：X－從標準曲線中查得的脯氨酸含量（μg/mL）（三）計算結果依據回歸方程式計算得到脯氨酸含量（μg/mL）自然含水量=×100％相對含水量（RelativeWaterContent，RWC）植物組織含水量的指標RWC=自然鮮重-干重水飽和鮮重-干重=×100％×100％植物含水量的測定

組織飽和含水量有較好的重復性，而組織的鮮重、干重不太穩定（鮮重常隨時間及處理條件而有變化）。蒽酮試劑：稱取1.0g蒽酮，溶于80%濃硫酸（將98