潔凈區環境監控目錄第一章————什么是潔凈區？第二章————潔凈區環境監控第三章————潔凈區環境如何控制？第一章——什么是潔凈區？什么是潔凈室（區）？GB5047-2008對醫藥潔凈室（區）的定義空氣懸浮粒子和微生物濃度，以及溫度、濕度、壓力等參數受控的房間或限定空間國家新版GMP對潔凈區的定義潔凈區：需要對環境中塵粒及微生物數量進行控制的房間（區域），其建筑結構、裝備及其使用應能減少該區域內污染物的引入、產生和滯留潔凈區圖潔凈區圖潔凈區環境相關術語潔凈室狀態空態：潔凈室（區）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產設備、原材料或人員的狀態。靜態：靜態a：潔凈室（區）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，生產工藝設備已安裝、潔凈室（區）內沒有生產人員的狀態。靜態b：潔凈室（區）在生產操作全部結束，生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后。動態：潔凈室（區）已處于正常生產狀態，設備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規范操作。潔凈區環境相關術語氣流形式

單向流：沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流，與水平面平行的叫水平單向流。

非單向流：具有多個通路循環特性或氣流方向不平行的氣流。潔凈區環境相關術語潔凈區環境相關術語潔凈區環境相關術語潔凈工作臺一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區。其特點是自身能夠供給經過過濾的空氣或氣體，按氣流形式分為垂直單向流工作臺、水平單向流工作臺等潔凈度潔凈環境內單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的統計數量來區分的潔凈程度。懸浮粒子用于空氣潔凈度分級的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1-1000mm的固體和液體粒子。對于懸浮粒子計數測量儀，一個微粒球的面積或體積產生一個響應值，不同的響應值等價于不同的微粒直徑。潔凈區環境相關術語菌落微生物培養后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU。浮游菌

按照標準（GB/T16293-2010）提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。浮游菌濃度單位體積空氣中含浮游菌菌落數的多少，以計數濃度表示，單位是CFU/m3或CFU/L潔凈區環境相關術語沉降菌用標準（GB/T16294-2010）提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。沉降菌菌落數規定時間內每個平板培養皿收集到空氣中沉降菌的數目，以CFU/皿表示。潔凈區環境的法規依據新版GMP對藥品生產環境的要求第四十六條為降低污染和交叉污染的風險，廠房、生產設施和設備應當根據所生產藥品的特性、工藝流程及相應潔凈級別要求合理設計、布局和使用。

無菌藥品，附錄1

第三十八條無菌藥品生產的潔凈區空氣凈化系統應當保持連續運行，維持相應的潔凈度級別。因故停機再次開啟空氣凈化系統，應當進行必要的測試以確認仍能達到規定的潔凈度級別要求。潔凈區環境的法規依據第十條應當按以下要求對潔凈區的懸浮粒子進行動態監測：

（一）根據潔凈度級別和空氣凈化系統確認的結果及風險評估，確定取樣點的位置并進行日常動態監控。

（二）在關鍵操作的全過程中，包括設備組裝操作，應當對A級潔凈區進行懸浮粒子監測。A級潔凈區監測的頻率及取樣量，應能及時發現所有人為干預、偶發事件及任何系統的損壞。第十一條應當對微生物進行動態監測，評估無菌生產的微生物狀況。監測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）等。動態取樣應當避免對潔凈區造成不良影響。成品批記錄的審核應當包括環境監測的結果。對表面和操作人員的監測，應當在關鍵操作完成后進行。潔凈室（區）級別懸浮粒子最大允許數/立方數靜態動態≥0.5μm≥5μm≥0.5μm≥5μmA(100)級352020352020B(1000)級3520203520002900C(10000)級3520002900352000029000D(100000)級352000029000不作規定不作規定潔凈區環境的法規依據等級浮游菌CFU/m3沉降法（φ90mm）

(CFU/4小時)表面微生物接觸(φ55mm)

(CFU/碟)五指手套CFU/手套A<1<1<1<1B10555C1005025/D20010050/注：1.表中各數值均為平均值。2.單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續進行監測并累計計數。潔凈區環境的法規依據潔凈區環境其他測試指標溫度和相對濕度的測試：潔凈室（區）的溫度和濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18-26℃，相對濕度在45-65%為宜）。靜壓差的測試：潔凈室與非潔凈室之間的靜壓差應大于10Pa；相鄰不同潔凈級別的潔凈室之間的壓差應大于5Pa；潔凈區與室外壓差應大于10Pa。風量、風速的測試

a)非單向流潔凈室系統的各項實測風量及換氣次數應大于各自的設計風量或換氣次數，但不應超過20%；室內各風口的風量與各風口設計風量之差均不應超過設計風量的±15%。

b)單向流潔凈室實測室內平均風速應大于設計風速，但不應超過15%。潔凈區環境的控制參數1

懸浮粒子和微生物：主要影響產品純度、交叉污染和無菌程度。2

溫度和相對濕度：主要影響產品工藝條件和細菌的繁殖條件、由操作舒適度帶來的對產品質量的影響。3換氣次數：影響潔凈度和人員舒適度。4工作面截面風速：影響潔凈度和人員舒適度。5靜壓差：影響潔凈度。6

照度：影響產品的工藝條件。7噪聲：影響人員舒適度。8新風量：影響人員舒適度。9自凈時間：代表系統的“恢復能力”。第二章——潔凈區環境監控潔凈區環境的監控目的提供工藝環境的質量信息防止微生物污染防止交叉污染評估清潔和消毒的程序識別和消除風險保證產品制造過程的質量潔凈區環境的監控要素監控對象（人、機、料、法、環）監控要素懸浮粒子微生物（浮游菌/沉降菌、表面微生物）壓差換氣次數、風速溫濕度什么是人、機、料、法、環？人機料法環是對全面質量管理理論中的五個影響產品質量的主要因素的簡稱。人，指制造產品的人員；機，制造產品所用的設備；料，指制造產品所使用的原材料；法，指制造產品所使用的方法；環，指產品制造過程中所處的環境。潔凈區環境的監控要素懸浮粒子監測設備常見便攜式空氣懸浮粒子計數器遠程采樣系統傳感器潔凈區環境監控——懸浮粒子懸浮粒子監控方法：在空態或靜態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其布置應力求均勻，并不得少于最少采樣點數目；在動態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其布置應根據產品的生產及工藝關鍵操作區設置。按公式求出最少的采樣點數目：式中NL—最少采樣點數（四舍五入為整數）

A—潔凈室或潔凈區的面積，以㎡計注：在水平單向層流時，面積A可以看作是與氣流方向呈垂直流動的空氣的截面積。對任何小潔凈室（區）或局部空氣凈化區域，采樣點數目不得少于2個，總采樣點次數不得少于5次。每個采樣點的采樣次數可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數可以不同。潔凈區環境監控——懸浮粒子懸浮粒子監控方法：每個采樣點的每次采樣量VS用下式確定：式中：VS—每個采樣點每次最少采樣量，用升表示

Cn·m—為相關等級規定最大被考慮粒徑之等級限值（pc/m3空氣）。

20—粒子濃度處于該等級限值時，可被檢測到粒子數潔凈區環境監控——懸浮粒子

懸浮粒子采樣點位置：

a)采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。

b)采樣點多于5點時，也可以在離地面0.8-1.5m高度的區域內分層布置，但每層不少于5點。潔凈區環境監控——懸浮粒子潔凈區環境監控——懸浮粒子

懸浮粒子測試狀態：

a)空態、靜態和動態三種狀態均可進行測試。

b)空態或靜態時，室內測試人員不得多于2人。

懸浮粒子測試時間：

a)在靜態測試時，對單向流潔凈室（區），測試宜在生產操作人員撤離現場并經過10min自凈后開始；對非單向流潔凈室（區），測試宜在生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后開始；

b)在動態測試時，則須記錄生產開始的時間以及測試時間。潔凈區環境監控——懸浮粒子懸浮粒子采樣：按照粒子計數器的操作規程，選擇合適的粒徑、采樣量、采樣時間及每個采樣點的采樣次數進行采樣。結果計算

a）計算每個采樣點的平均懸浮粒子濃度（粒/m3）

b）計算潔凈室的平均粒子濃度（粒/m3）

c）計算標準差SE結果評定：判斷懸浮粒子的潔凈度級別應同時滿足以下兩個條件

a)每個采樣點的平均懸浮粒子濃度必須不大于規定的級別界限；

b)全部采樣點才懸浮粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須不大于規定的級別界限。潔凈區環境監控——懸浮粒子

懸浮粒子采樣注意事項：

a)對于單向流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口應正對氣流方向；

對于非單向流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口宜向上。

b)布置采樣點時，應盡量避開回風口。

c)采樣時，測試人員應在采樣口的下風側，并盡量少活動。

d)采樣完畢后，宜對粒子計數器進行自凈。

e)應采取一切措施防止采樣過程的污染。微生物監測方法有：1.空氣微生物監測沉降菌法--被動法定量空氣浮游菌采樣法--主動法2.環境表面微生物監測表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）3.人員監測表面取樣法（接觸碟法）潔凈區環境監控——微生物潔凈區環境監控——微生物空氣微生物的監測方法：–沉降菌法（被動法）沉降碟在空氣中的暴露時間<4小時監控整個灌裝過程只能給出定性和半定量的數據應結合空氣浮游菌的數據，對沉降碟的結果進行評價–定量空氣浮游菌取樣法（主動法）?撞擊式，離心式和膜過濾（明膠）取樣儀?應取一定體積的空氣（取樣體積應有代表性）?儀器應經過校驗潔凈區環境監控——微生物取樣位置的選擇：?哪些部位的微生物污染最可能對產品質量造成不良影響？?在生產過程中，什么地點最容易長菌？?取樣點的選擇需要統計學設計或根據網格法來確定？在常規監測中，有一些點需要周轉取樣嗎？?哪些地方是清潔、消毒或滅菌時最難覆蓋/接觸或最難湊效的部位？?什么活動會導致污染的擴散？潔凈區環境監控——微生物取樣位置的選擇：系統取樣點潔凈區域空氣（灌裝線）接近敞開和/或者已灌裝的容器潔凈區域空氣最接近工作區域表面（廠房）

地面、門把手、墻、簾子表面（設備）

灌裝線、控制面板、供膠塞的料斗灌裝線操作人員至少要檢手指印單向流（例如，單向流罩）靠近活動最多的區域潔凈區環境監控——浮游菌浮游菌檢測設備潔凈區環境監控——浮游菌浮游菌測試方法：1

最少采樣點數目參照懸浮粒子測試方法。2

采樣點的位置參照懸浮粒子測試方法。3采樣次數每個采樣點一般采樣一次。4采樣量最小采樣量潔凈度級別采樣量

L/次100100010000500100000100300000100潔凈區環境監控——浮游菌5采樣注意事項

a)對于單向流潔凈室（區）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），采樣口向上。

b)布置采樣點時，應盡量避開塵粒較集中的回風口。

c)采樣時，測試人員應在采樣口的下風側，并盡量少活動。

d)應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。

e)培養皿在用于檢測時，為避免培養皿運輸或搬運過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養皿一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。6測試狀態（參照懸浮粒子測試方法）7測試時間（參照懸浮粒子測試方法）潔凈區環境監控——浮游菌8采樣及培養

按照浮游菌采樣器的操作規程進行采樣。全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配置的培養基經采樣后，在30-35℃培養箱中培養，時間不少于2d；采用沙氏培養基（SDA）配置的培養基經采樣后，在20-25℃培養箱中培養，時間不少于5d。9結果觀察及計算

用計數方法得出各個培養皿的菌落數，并計算出每個測點的浮游菌平均濃度（CFU/m3或CFU/L）。沉降菌測試方法：1最少采樣點數目（參照懸浮粒子測試方法）

2采樣點的位置（參照懸浮粒子測試方法）3采樣次數（參照懸浮粒子測試方法）4最少培養皿數在滿足最少采樣點數目的同時，還宜滿足最少培養皿數。最少培養皿數潔凈度級別最少培養皿數1001410000210000023000002潔凈區環境監控——沉降菌5采樣注意事項（參照懸浮粒子測試方法）6測試狀態（參照懸浮粒子測試方法）7測試時間（參照懸浮粒子測試方法）8采樣及培養

將已制備好的培養皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養皿蓋，使培養基暴露在空氣中。靜態測試時，培養皿暴露時間為30min以上；動態測試時，培養皿暴露時間為不大于4h。全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。培養方法同浮游菌測試培養方法。9結果觀察及計算

用計數方法得出各個培養皿的菌落數，并計算出每個測點的沉降菌平均菌落數（CFU/皿）。潔凈區環境監控——沉降菌潔凈區環境監控——表面微生物表面微生物測試方法：擦拭法和接觸碟法均可使用接觸碟—用于平整表面表面擦試法—用于非規則表面表面取樣應在無菌操作結束時進行（以最大限度地降低無菌制造過程中關鍵表面污染的風險）應當對接觸產品的表面、地面、墻以及設備定期進行監測潔凈區表面微生物取樣點：C級區取樣點：一般為地面、墻面及操作人員十指手套。對C級下的局部A級區取樣宜在生產結束后進行，避免造成污染。地面取樣墻面取樣灌裝機（A級）產品轉移（A級）潔凈區環境監控——表面微生物潔凈區環境監控——表面微生物B級區接觸碟取樣位置應能及時發現潛在污染風險，在受污染可能性較高的位置布點。無菌分裝設備門進出B級區門把手儀器、設備操作鍵、觸摸屏等傳遞窗門把手潔凈區環境監控——人員監測人員是微生物的主要污染源：1.人在代謝過程中會釋放和分泌污染物。2.人體表面、衣服能沾染、攜帶污染物。3.人在潔凈室內的各種動作也會產生微粒和微生物。阻斷人體污染源的措施1.進入潔凈室（區）的人員不得化妝和佩帶飾物。2.凈化工作服必須包蓋全部頭發、胡須及腳部，并能阻留人體脫落物。3.手的衛生4.平時的衛生習慣每個手套(5只手指)胸口處衣帽結合處帽兜額頭處前臂靴子與工作褲接口處

潔凈區環境監控——人員監測無菌區人員更衣確認和監測第三章——潔凈區環境如何控制？潔凈區控制微粒污染的途徑A：有效地阻止室外的污染侵入室內（或防止室內污染逸出室外，如青霉素），迅速有效地排除室內已經發生的污染。

最主要途徑：空氣凈化系統、空氣壓差、清潔B：控制污染源，減少污染發生量

最主要途徑：潔凈服、潔凈區行為規范空氣凈化系統——空氣過濾初效——中效——高效初效主要對象是﹥10μm的塵埃用于新風過濾中效主要對象是﹥1～10μm的塵埃用于高效過濾器之前高效過濾器主要對象是﹤

1μm的塵埃對細菌的穿透率為0.0001%，對病毒的穿透率為0.0036%，所以，通過高效過濾器的空氣可視為無菌。空氣凈化系統——空氣過濾過濾器終端過濾器風機去濕器加熱盤管

帶檔水板表冷器生產廠房初效過濾器排風罩中效過濾器回風新風三級空氣過濾系統圖空氣凈化系統——空氣過濾空氣凈化系統——空氣過濾空氣凈化系統——空氣過濾潔凈區高效檢漏空氣凈化系統——換氣次數和風速空氣凈化系統——換氣次數和風速換氣次數如果只講風速的話，將無法對潔凈廠房進行評價。設想如果在廠房內只安裝了一個面積很小的過濾器，然而只需要很少的風量通過，就會在風口產生一定的風速，然而無論多大的廠房只要有這一點風速就可以算潔凈區的話很不合理。因為風速體現的是風量和面積（過濾器的面積）的流速關系，而換氣次數體現的是風量和體積（廠房體積）的倍數關系，也就是說體現了整個潔凈室內每小時潔凈空氣輪換的次數。空氣凈化系統——自凈時間自凈時間：自凈時間表明了潔凈室的“恢復能力”。有的廠房自凈能力很差，污染后會長時間的靜不下來。一般原因是風量不夠、壓差相反、氣流形式差等原因。其實自凈能力是衡量凈化系統好壞的一項重要指標。自凈能力強的廠房，動態狀況就比較好，并且最具有實用性。一般單向流潔凈室的自凈時間為10min以內比較好，而非單向流潔凈室的自凈時間則應不大于30min。本項測定必須在潔凈室停止運行相當時間，室內含塵濃度已接近大氣塵濃度時進行。先測出潔凈室室內懸浮粒子濃度，立即開機運行，定時讀數直到室內懸浮粒子濃度達到最低限度為止，這段時間即為自凈時間。自凈時間代表了凈化系統對污染源的稀釋或消除能力。空氣凈化系統——溫度與相對濕度主要影響產品工藝條件和細菌的繁殖條件、由操作舒適度帶來的對產品質量的影響可能存在的問題：因為溫濕度對風速風量、潔凈度、微生物都有一定的影響，特別是對潔凈度和微生物的影響，所以也要引起足夠的重視。（比如溫度升高塵埃粒子運動速度加快，如果濕度增加塵粒自重就增加，比較容易消除塵粒，但有利細菌生長、繁衍，微生物污染的風險顯著增大，還會產生靜電問題，可能使灰塵吸附在金屬表面，濕度降低塵粒還會更容易揚起）空氣壓差從理論上講，壓差有二個作用：A：在門窗關閉的情況下，防止潔凈室外的污染由縫隙摻入潔凈室內；B：在門開啟時，保證有足夠的氣流向外流動，盡量削減由開門動作和人的進入瞬時帶進來的氣流量，并在以后門開啟狀態下，保證氣流方向是向外的，以便把帶入的污染減小到最低程度。壓差的測試：

應在所有的門都關閉的條件下，由高壓向低壓、由平面布置上與外界最遠的里間房間開始，依次向外測試；有孔洞相通的不同等級相鄰的潔凈室（區），其洞口處宜有合理的氣流流向等。空氣壓差空氣壓差壓差顯示裝置空氣壓差潔凈區的清潔——原則潔凈區清潔三原則原則一：使用純化水或注射用水和過濾后的清潔劑：原則二：使用潔凈的清潔工具以避免將污染物帶入潔凈室造成二次污染原則三：清潔過程中不得增加潔凈室的污染物潔凈區的清潔——清潔對象潔凈區：

100級房間；

10000級房間；

100000級房間；

300000級房間；氣鎖、傳遞窗；人流、物流通道；洗手池。潔凈區的清潔——清潔對象內環境系統：潔凈區內各種設備及管道;滅菌器、反應罐；接入潔凈室的各類管道；潔凈區的清潔——清潔程序ABCDE

潔凈室氣鎖走廊氣鎖無級別區壓力++壓力++壓力+壓力+壓力0

清潔消毒順序：A→B→C→D→E潔凈區的清潔——清潔程序潔凈室內清潔消毒順序：天花板、墻壁、與墻壁連接的物體、管道、臺面、設備、地面；從上往下，由里到外清潔；不要在已清潔過的地面上走動。潔凈區的清潔——清潔方法真空吸塵清潔：真空吸塵器僅對大粒子有效干擦：干擦可能脫落粒子，通常僅用于擦干潮濕表面潮濕擦拭：大多數清潔和除污必須通過濕或潮濕擦拭來完成以重疊的長直線方向擦拭，而不要做轉圈的刮擦動作；從最干凈的區域向最臟的區域清潔；從按氣流方向由高氣流向低氣流方向清潔；每擦一次都應將抹布折疊，露出干凈的一面；清潔液應倒在抹布上，而不應到或噴在待清潔的表面；潔凈區的清潔——清潔注意事項清潔時應特別注意不要損傷HEPA濾器或其他敏感的設備；只有在已清潔過的表面上才能進行消毒；清潔控制板及元件時，所有電源均應關閉;除非特許，清潔液決不允許流入設備內；所有的清潔液在用后須倒掉；清潔人員的正確行為在潔凈室中是至關重要的；所有的清潔活動必須有記錄。潔凈服進入無菌室工作的工作人員、設備維修、QA/QC取樣人員必須接收更衣程序的確認，并發放許可證，以確保進入無菌室所有人員是會穿“無菌衣”。無菌服可以保護藥品不被人員污染無菌服應維護良好并正確穿戴：無破縫，無污跡系好衣扣，無頭發或衣服外漏，要求帽子要包蓋全部頭發，口罩要遮住口鼻、胡須

更換下來的工作服應分區域集中，裝入專用容器中，標記明顯不同區域工作服應不同顏色、款式不能同時在同一洗衣機內洗滌潔凈服——歐洲GMP對無菌生產著裝的要求潔凈度級別著裝要求A、B級1、面罩應能完全罩住頭發、胡須，面罩下沿應藏到領口中2、滅菌口罩、無塵手套、滅菌或消毒的鞋套3、褲腳塞入鞋套，袖口塞入手套中4、無菌衣不同脫落纖維和顆粒物質，并能阻擋人體散發的塵埃潔凈服——歐洲GMP對無菌生產著裝的要求潔凈度級別著裝要求

C級1、頭發、胡須應全部罩住2、單層或雙層褲裝，腰部扎緊3、合適的鞋子或鞋套4、工作服不能脫落纖維和顆粒性物質

D級1、頭發、胡須應全部遮住2、一般的防護工作服3、合適的鞋子或鞋套4、有適當的措施防止來自潔凈室外的污染潔凈服——穿戴方式潔凈服——無菌室更衣流程（參考）1.脫外衣2.洗手、洗手臂、洗臉3.手消毒4.穿無菌襪套5.戴無菌帽穿無菌內衣6.穿無菌內衣完畢7.手消毒8.鏡前檢查潔凈服——無菌室更衣流程（參考