gjb2、slc26a4和線粒體dna12srrna基因在近親結婚配家系中的突變率分析

目前，50%以上的先天性聽力損失是由遺傳因素引起的，通常染色體的隱性遺傳大約占77%。對非綜合征性聽力損失的基因gjb2、slc26a4和mrnasrnas565g進行基因檢測。作者：成為聽力損失的常規基因篩選項目。本研究對甘肅省的聾啞學校學生共801人進行基因篩查,發現了29個有近親結婚史的耳聾先證者,并對其進行常見致聾基因的篩查工作,現總結如下:1數據和方法1.1體格檢查和數據檢查來自甘肅省7所聾啞學校因近親結婚致聾的學生29名,其中男18人,女11人,抽血時年齡1～21歲,中位數為14歲,在聾校老師的配合下填寫耳聾情況調查表,進行全面的體格檢查排除藥物性聾和綜合征型耳聾后,進行全面的聽力學檢查:純音測聽、耳聲發射、聽性腦干反應等,并建立數字化檔案。1.2pcr擴增和酶切鑒定繪制家系圖,進行系譜分析。提取基因組DNA,用Primer5軟件針對GJB2基因、SLC26A4基因的編碼區和線粒體DNA12SrRNA1555位點設計引物,通過PCR擴增,產物純化后測序,用DNAStar軟件進行序列分析,具體方法如下:1.2.1GJB2基因分析方法采用25μl反應體系,用美國GeneAmpue617PCRSystem9700型熱循環儀進行擴增,反應條件為94℃預變性5分鐘,94℃變性持續30秒,58℃復性持續30秒;72℃延伸反應持續30秒,設30次循環,最后72℃延伸反應持續7分鐘,用4℃溫育,擴增出約800bp的片段,通過1%的瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產物并純化,送測序分析。1.2.2線粒體DNA12SrRNAA1555G突變檢測分析方法采用25μl的PCR反應體系,反應條件為95℃預變性5分鐘,95℃變性30秒,62℃退火30秒,72℃延伸70秒,30個循環,最后用72℃延伸7min,4℃溫育。以1.5%的瓊脂糖凝膠電泳觀察PCR擴增結果。然后取PCR反應產物6μl,加TangoBuffer2μl,Alw26I內切酶0.2μl,補充雙蒸水至20μl。37℃水浴箱內消化150分鐘,以2%的瓊脂糖凝膠電泳觀察酶切結果。對于酶切反應不能切開的病例,取相應的PCR產物純化后直接測序分析結果。1.2.3SLC26A4基因檢測分析方法針對SLC26A4基因共21個外顯子的區域設計20對引物,用25μl的PCR反應體系和不同的反應條件進行目的片段的擴增,瓊脂糖凝膠電泳觀察結果,然后直接進行測序分析。2家系和采用的方式多為共同進展近親結婚家系的耳聾學生聽力情況:全部為極重度聾(純音聽閾>95dBHL),ABR、DPOAE均未引出。先證者全部為語前聾,父母為近親的有26人,多為姨表親、姑表親;祖父母為近親結婚的2人,有1個先證者的曾祖父母為近親結婚,其父母也是近親結婚。29個近親結婚的家系中,父母一代及祖父母一代均無耳聾癥狀,所有家庭均有2個以上的耳聾患者出現,家系圖譜有16種類型(圖1)。GJB2基因檢測結果:299—300delAT突變的1人(純合型),檢測到79G>A突變21人(純合型6人,雜合型15人)、109G>A突變3人(均為雜合型)、341A>G突變15人(純合型2人,雜合型13人)和558G>A突變1人(雜合型),5人未檢測到突變。79G>A和341A>G都出現的11人,79G>A和109G>A都出現的2人,三者都出現的1人。SLC26A4基因突變的1人(H723R雜合型);線粒體DNA12SrRNAA1555G純合突變的1人,并伴有GJB2基因79G>A和341A>G多態表現。3u3000說近親結婚(consanguineousmarriage)通常指兩個配偶在3～4代之內曾有共同祖先的婚配,近親通婚的夫婦從共同祖先那里獲得相同基因的概率更高,兩人攜帶相同的隱性致病基因的可能性很大,容易在子代相遇。而在隨機婚配(非近親婚配)時,由于夫婦兩人無血緣關系,相同的基因很少,所攜帶的隱性致病基因不同,因而不易形成隱性致病基因的純合體。因此在近親結婚時,其后代遺傳病的發病率升高,增加了某些常染色體隱性遺傳疾病的發生風險。本研究通過對29個近親結婚的家系的調查發現,其系譜圖遺傳方式的特點是:先證者的雙親表現正常,系譜圖中看不到連續遺傳現象,至少有2個發病者出現,男女發病機會均等,患者大部分出現在同胞之間。完全符合常染色體隱性遺傳的遺傳學特點,說明對近親婚配家系的基因研究,尤其是常染色體隱性遺傳疾病,更有意義。本研究對29個近親婚配的耳聾先證者的常見致病基因GJB2的篩查中并未發現文獻報道的中國人群中最常見的235delC突變,僅發現1例299—300delAT純合突變,而79G>A、341A>G等多態表現出現的頻率為75.9%;有5人未檢測到突變,占17.2%。而mtDNA12SrRNA1555G位點有1例檢測到突變,占3.3%;SLC26A4基因僅檢出1例雜合突變(占3.44%)。三種基因突變率都是3.3%,GJB2基因突變攜帶率為3.4%,SLC26A4基因突變攜帶率為1.7%。與郭玉芬等報道的同是西北地區的聾啞人群GJB2基因近9%、SLC26A4基因5.6%的突變率相比要低一些。而mtDNA12SrRNA1555G的突變率接近國外的統計數據,比有文獻報道的西北地區8.3%的統計要低。體現了在同一地區的不同人群耳聾基因突變譜也不盡相同。GJB2、SLC26A4和mtDNA12SrRNA三個耳聾常見基因在近親結婚家系中突變檢出率較低,不能排除遺傳漂變(geneticdrift)在小群體中的作用,還有入選人群先證者的始祖效應,也不能忽視遺傳異質性以及遺傳易感性等情況,是否有新的突變位點或致聾基因有待于進一步研究。