腎纖復元膠囊對慢性腎衰竭大鼠的治療作用

腎衰竭是由各種原因引起的腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎。腎纖維化包括腎小管間質(zhì)纖維化和腎小球硬化。大量研究表明腎小管間質(zhì)纖維化較腎小球病變在腎臟疾病進展中的意義更加重要。但無論腎間質(zhì),還是腎小管、腎小球,它們在纖維化過程中都涉及細胞因子誘導間質(zhì)成纖維細胞、腎小管上皮細胞或腎小球系膜細胞等轉(zhuǎn)分化為α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)陽性的肌成纖維細胞。肌成纖維細胞具有很強的增殖能力,可合成Ⅰ型膠原,分泌大量細胞外基質(zhì)(ECM),并抑制ECM降解,在腎纖維化的發(fā)展中有重要的作用。本研究擬通過對慢性腎衰竭大鼠進行實驗性治療,觀察“腎纖復元膠囊”抗腎纖維化延緩慢性腎衰竭進展的治療效果,從現(xiàn)代醫(yī)學角度闡明其作用機制。材料和方法1動物實驗中心雄性Wistar大鼠100只,體重(140±20)g,購自四川大學華西動物實驗中心。隨機分為假手術組20只,腎衰組40只,治療組40只。2小鼠igg2a-過氧化物酶抑制劑Beckman全自動生化儀,微量離心機,美國Spot圖像分析儀。抗小鼠IgG2a-過氧化物酶;抗α-SMA單抗,由德國Dako公司生產(chǎn);兔抗鼠Ⅰ型膠原抗體、馬抗兔IgA抗體,均由北京中山生物技術公司生產(chǎn);1∶50ABC試劑(卵白素過氧化物酶復合物)等。3模型方法參照文獻。以兩步法對腎衰組與治療組大鼠在1周內(nèi)施2次手術,共切除全部腎臟的5/6。4“腎纖復元膠囊”組“腎纖復元膠囊”根據(jù)我院康復科何成奇教授驗方制成,其成分為:三七、大黃、丹參、昆布、黃芪、雞內(nèi)金等,共為粉末裝膠囊。以“腎纖復元膠囊”制成湯劑,于第2次手術后次日灌胃予治療組大鼠(“腎纖復元膠囊”300mg·kg-1·d-1)。假手術組與腎衰組灌胃等量生理鹽水。5腎組織病理學檢測觀察并記錄各組大鼠一般情況(體重、毛色、進食、尿量),分別于第4周、8周、12周以代謝籠采集24h尿樣測尿蛋白定量、清潔處死部分大鼠,采集腹主動脈血進行腎功能檢測,并行病理切片對腎組織進行HE染色、α-SMA、Ⅰ型膠原免疫組化染色檢測。3組均在8周、12周選α-SMA、Ⅰ型膠原染色各5張切片,每張切片隨機選取200倍視野5處。每個視野經(jīng)Spot軟件標準數(shù)據(jù)化后,取其平均積分光密度值進行統(tǒng)計分析。6統(tǒng)計方法實驗結(jié)果采用MicrosoftExcel軟件進行統(tǒng)計分析,以(xˉ±s)(xˉ±s)表示,進行t檢驗。結(jié)果1大鼠尿總情況變化實驗動物外觀表現(xiàn)及死亡率(實驗分組中非正常處死的死亡鼠只數(shù)/該組總只數(shù)):假手術組:外觀、活動正常,體重逐漸增大,到實驗結(jié)束時達(240±24)g,動物無死亡。腎衰組:與正常組比較,該組鼠從第2周開始出現(xiàn)明顯多尿、食量減少、毛色發(fā)黃、弓背;第3周,上述表現(xiàn)加重,并出現(xiàn)明顯消瘦、眼珠紅色變淡;第4周,毛色萎黃、消瘦、眼珠變淡等進一步加重,食量仍少,被抓時反射性排尿量漸減少;第5周,前述變化進一步加重,動物少尿,開始有大鼠死亡,死亡鼠極消瘦,所剩鼠體重(109±14)g,死亡率15%。治療組:第1～3周,變化與腎衰對照組相同;第4周大多數(shù)鼠毛皮光柔度、眼珠紅色度、食量等比腎衰組明顯改善,反射性排尿不減少反增多;少數(shù)幾只與腎衰對照組相似;第5周,個別鼠死亡,大多數(shù)鼠癥狀已出現(xiàn)好轉(zhuǎn),實驗結(jié)束時體重(203±22)g,死亡率12.5%。224h尿蛋白試驗和腎臟功能見表1。3結(jié)構(gòu)不清,間質(zhì)纖維化(1)假手術組:腎小球、腎小管、血管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰,未見明顯病變。(2)腎衰組:部分腎小球萎縮消失,殘余腎小球偶有代償性肥大,多數(shù)結(jié)構(gòu)不清,主要表現(xiàn)球囊變小;毛細血管透明變性,有的僅見內(nèi)皮細胞核;大量單核/巨噬細胞、淋巴細胞浸潤;間質(zhì)纖維化,8周即有明顯的α-SMA及Ⅰ型膠原的表達,并且隨時間延長而明顯加重。(3)治療組:腎小球大部分存在,結(jié)構(gòu)欠清;腎小管上皮濁腫,有的嗜酸性變,胞核固縮,有的細胞脫落,在管腔內(nèi)形成細胞團;間質(zhì)纖維組織輕度增生,少量炎細胞浸潤;α-SMA及Ⅰ型膠原染色較腎衰組為輕。見圖1～圖5,表2。腎纖復元膠囊治療crf大鼠慢性腎衰竭的作用機制慢性腎衰竭是多種慢性腎臟疾病進展到晚期的嚴重綜合癥候群,是導致腎臟病患者死亡的主要原因,也為社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。腎纖維化則是各種原因腎臟疾病進展到慢性腎衰竭終末期的共同途徑。近年來大量研究證實,慢性腎臟疾病中,腎小管間質(zhì)纖維化程度更能體現(xiàn)腎臟疾病的嚴重性并與預后相關,在腎臟疾病的轉(zhuǎn)歸中起主導作用。因此,對抗腎纖維化,特別是腎小管間質(zhì)纖維化是當前研究的熱點之一。現(xiàn)代醫(yī)學對慢性腎衰竭的治療主要是治療基礎疾病、飲食治療、控制血壓和維持水、電解質(zhì)、酸堿平衡等。一旦慢性腎衰竭進展到終末期,除透析和腎移植外并無其他有效的治療方式。因此,開發(fā)保護殘余腎功能,延緩慢性腎衰竭進展的藥物具有重要的社會意義。中醫(yī)將慢性腎衰竭歸于“水腫”、“關格”、“癃閉”、“腎勞”、“腎風”、“溺毒”等范疇,認為本病大多屬于本虛標實之證,正虛為本,邪實為標。正虛方面多認為屬于脾腎陽虛、氣陰兩虛、肝腎陰虛;邪實方面則多集中在濕濁、瘀血、水氣的認識。虛、濁、瘀、毒四大因素互為因果,形成惡性循環(huán)。“腎纖復元膠囊”是將大黃、黃芪、昆布等一些具有腎保護作用的中藥按一定配方精心研制的復方制劑。方中大黃瀉下行瘀,化痰濕,推陳致新,解毒排濁,是為君藥;黃芪味甘,性溫,歸肺、脾經(jīng),功能益氣升陽、固表止汗、利水消腫,主治一切氣血虧虛之證,為臣藥;昆布具較強利水滲濕、通利小便之功,為使藥。方中補氣藥與瀉下藥同用,補氣可升清,瀉下可降濁,攻補兼施,有利于氣機調(diào)節(jié),從根本上消除痰瘀互結(jié),配以昆布利水滲濕、通利小便,使瘀祛新生、脾腎陽氣得復、水濕腫滿得消。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)“腎纖復元膠囊”治療的CRF大鼠(即治療組)一般情況如進食、毛色及反應、腎功能生化、24h尿蛋白定量等指標明顯優(yōu)于腎衰組,證實“腎纖復元膠囊”可延緩CRF大鼠慢性腎衰竭進展。“腎纖復元膠囊”保護腎功能的作用機制可能是:(1)抑制炎癥反應。光鏡下各組腎組織病理切片顯示治療組單核巨噬細胞浸潤數(shù)目較腎衰組明顯減少,炎癥程度較輕,腎小球硬化及腎小管損傷亦相對較輕,但由于條件所限,未能測量化性指標。(2)抑制肌成纖維細胞活化和轉(zhuǎn)分化。應用Spot圖像分析系統(tǒng)可見治療組腎小管間質(zhì)表達α-SMA染色陽性的肌成纖維細胞較腎衰組少。而肌成纖維細胞在腎纖維化的發(fā)展中有重要的作用。這種細胞增殖能力強,在慢性腎臟疾病中逐漸成為腎間質(zhì)的主要細胞,同時產(chǎn)生大量的ECM,是ECM積聚的主要來源。抑制肌成纖維細胞的活化可起到抑制腎纖維化,延緩慢性腎衰竭進展的作用。