JJF2035—20231斑點酶聯免疫分析儀校準規范1范圍本規范適用于斑點酶聯免疫分析儀的校準,其他板型(48孔板或24孔板等)的斑點酶聯免疫分析儀可以參照本規范進行校準。2引用文件本規范引用了下列文件:ANSI/SLAS4-2004微孔反應板.井位置(Microplates—WellPositions)凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規范。3術語3.1斑點酶聯免疫分析儀enzyme-linkedimmunospotanalyzer通過在專用微孔反應板上包被抗體,捕獲分泌特定細胞因子的細胞,然后以酶聯技術顯色,形成與細胞對應的微小斑點,最后對顯色斑點進行自動顯微計數的分析儀器。4概述斑點酶聯免疫分析儀(以下簡稱分析儀)主要由成像系統、運動系統、控制處理系統和顯示系統組成。分析時,成像系統獲取微孔反應板上孔內斑點圖像,然后通過顯示系統進行斑點統計,得到該孔內斑點總數。5計量特性分析儀的計量特性及計量特性指標見表1。表1斑點酶聯免疫分析儀計量特性計量特性計量特性指標斑點計數示值誤差±5.0%重復性≤2.0%注:以上技術指標不適用于合格判別,僅供參考。6校準條件6.1環境條件6.1.1溫度:(15~30)℃;JJF2035—202326.1.2相對濕度:不大于80%;6.1.3供電電源:電壓(220±22)V,頻率(50±1)Hz。6.2標準物質模擬斑點計數標準物質應采用國家有證標準物質,技術要求如下:在模擬斑點計數標準物質四角設置4個定位孔,其中印有可識別字符,用來進行檢測器定位;孔板中間散落設置4個標準計數孔,每一個標準計數孔分別含有50個、100個、200個、500個模擬斑點(位置分布可參考附錄A所示),相對擴展不確定度應優于3.0%(k=2)。7校準項目和校準方法校準前按照分析儀使用說明書進行調試,將模擬斑點計數標準物質放入分析儀載物倉并固定,采用四角的4個定位孔進行定位(參照附錄A)。7.1斑點計數示值誤差分別對模擬斑點計數標準物質的4個標準計數孔拍照并計數,每孔重復測量3次, 按式(1)計算每孔內斑點個數的測量值與標準值之間的相對示值誤差。 ΔNr,i×100%(1)式中:ΔNr,i—第i孔內斑點計數的相對示值誤差,%;Ni—第i孔內斑點個數測量平均值,個;Ns,i—第i孔內斑點個數標準值,個。7.2重復性對模擬斑點計數標準物質標準值為200的標準計數孔連續拍照并計數6次,按式(2)計算斑點個數測量相對標準偏差,作為分析儀的重復性表征。RSD=(iN)2××100%(2)式中:RSD—相對標準偏差,%;Ni—第i次斑點個數測量的結果,個;N—6次斑點個數測量結果的平均值,個。8校準結果表達校準記錄應盡可能詳盡地記載測量數據和計算結果,推薦的校準記錄格式見附錄B。示值誤差的測量不確定度應按JJF1059.1—2012的要求評定,不確定度評定實例見附錄D。經校準的儀器應出具校準證書,校準證書應符合JJF1071—2010中5.12的要求,校準證書內頁格式見附錄C。JJF2035—202339復校時間間隔由于復校時間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質量等多因素所1年。4附錄A模擬斑點計數標準物質示意圖及孔內畫面圖模擬斑點計數標準物質外形參照標準96孔微孔反應板，長為12.7cm,寬為8.5cm,高為1.3cm,外部包括上、下金屬框架，內部包括白色背景紙、高透光塑料膜片和玻璃片，上、下金屬框架依靠螺釘連接緊固。高透光塑料膜片孔位與標準96孔微孔反應板一致，結構如圖A.1所示，其中四角的4個孔為定位孔，孔內印有可識別2004),孔內分布直徑為(50±8)μm黑色的模擬斑點，量值分別為(50±1)個、(100±1)個、(200±1)個、(500±2)個(k=2),如圖A.2所示。28E圖A.1模擬斑點計數標準物質示意圖5(b)B6孔內畫面圖(d)E9孔內畫面圖圖A.2模擬斑點計數標準物質孔內畫面圖JJF2035—20236附錄B校準原始記錄參考格式送校單位校準地址儀器型號儀器編號制造廠商校準日期環境溫度℃相對濕度%校準人核驗人技術依據主要測量設備名稱/型號測量范圍不確定度/準確度等級/最大允許誤差檢定/校準證書編號/有效期B.1斑點計數示值誤差孔位斑點個數標準值個斑點個數測量值/個平均值個斑點計數示值誤差%擴展不確定度/%(k=2)E350B6100G6200E9500B.2重復性孔位斑點個數標準值個斑點個數測量值/個平均值/個重復性/%G6200JJF2035—20237附錄C校準證書內頁推薦格式C.1校準證書內頁證書編號××××××—××××校準環境條件及地點:溫度℃地點相對濕度%其他校準使用的主要設備名稱/型號測量范圍不確定度/準確度等級/最大允許誤差檢定/校準證書編號/有效期第×頁共×頁JJF2035—20238C.2校準證書校準結果頁證書編號××××××—××××校準結果被校項目及校準結果:校準項目校準結果斑點計數示值誤差標準值個測量平均值個示值誤差%%擴展不確定度(k=2)%重復性/%以下空白第×頁共×頁JJF2035—20239附錄D斑點計數示值誤差測量結果的不確定度評定示例D.1測量模型ΔNr×100%(D.1)式中:ΔNr—斑點計數相對示值誤差,%; N—斑點個數測量平均值,個;Ns—斑點個數標準值,個。D.2合成標準不確定度計算公式分析儀測量重復性引入的不確定度u(N)、模擬斑點計數標準物質引入的不確定度u(Ns)之間不相關,所以標準不確定度可按式(D.2)得到:uc=2u2(N)+-2u2(Ns)(D.2) D.3.1重復性引入的不確定度 D.3.1重復性引入的不確定度u(N)。D.3.2標準物質引入的不確定度u(Ns)。D.4不確定度分量的計算D.4.1重復性引入的不確定度u(N)對模擬斑點計數標準物質中的同一孔位,重復進行6次測量,考察測量方法由重復性引入的實驗標準偏差,檢測數據及計算結果見表D.1。表D.1斑點計數的6次測量結果單位:個標準值Ns測量值實驗標準偏差s505050504950500.4110010099991001001000.522001991982002001991990.755004974984994994985001.05斑點計數示值誤差的實際校準工作中,以3次測量平均值為測量結果計算示值誤差,因此斑點計數示值誤差校準中測量重復性引入的不確定度計算見公式(D.3),計算結果見表D.2。u(N)=(D.3)JJF2035—202310表D.2斑點計數示值誤差校準中重復性引入的不確定度單位:個標準值Ns測量值平均值N u(N)50504949490.241001009999990.312001992001991990.445004984994974980.61D.4.2標準物質引入的不確定度u(Ns)根據模擬斑點計數標準物質證書提供的擴展不確定度Us和包含因子ks,按照公式(D.4)計算,計算結果見表D.3。表D.3u(Ns)標準物質引入的不確定度(D.4)單位:個標準值Ns擴展不確定度Us包含因子ksu(Ns)50120.50100120.50200120.50500221.00D.5標準不確定度一覽表標準不確定度見表D.4。表D.4標準不確定度一覽表標準值Ns/個u(N)/個靈敏系數u(Ns)/個 靈敏系數-500.240.020.50-0.01961000.310.010.50-0.00992000.440.0050.50-0.00505000.610.0021.00-0.0020D.6合成標準不確定度以標準值50為例,按照公式(D.2)進行計算合成標準不確定度uc,其他計算結果見表D.5。uc=2u2(N)+-2u2(Ns)==1.1