65.020.01CCS

B

0115 DB15/T

3185—2023山藥根尖染色體制片和核型分析技術規程Technical

for

preparation

and

karyotype

analysis

inroot

tip

of

yam2023-10-30

發布 2023-11-30

實施內蒙古自治區市場監督管理局 發

布DB15/T

3185—2023 本文件按照GB/T

1.1—2020《標準化工作導則

第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由內蒙古自治區農牧廳提出。本文件由內蒙古自治區農業標準化技術委員會（

20）歸口。本文件起草單位：內蒙古農業大學、內蒙古自治區農牧業科學院、鄂爾多斯市農牧業科學研究院、巴彥淖爾市農牧業科學研究院所。本文件主要起草人：霍秀文、張艷芳、郭樹春、菅志亮、劉小燕、張曉蒙、張勇、邵盈、趙令敏、喬慧蕾、邢麗南、葛明然、黃小龍。DB15/T

3185—20231 范圍本文規定了山藥根尖染色體制片的試劑溶液配制、制片方法以及核型分析方法。本文件適用于山藥根尖染色體玻片制備和核型分析。2 規范性引用文件文件。DB15/T

2788 向日葵根尖染色體制片和核型分析技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。著絲粒 centromere染色體主縊痕部位的染色質，是染色體中將兩條姐妹染色單體結合起來的區域。核型 karyotype染色體組在有絲分裂中期的表型，是染色體數目、大小、形態特征的總和。隨體satellite色質組成，含高度重復的

DNA

序列，不具有常染色質的功能活性。染色體核型分析

對染色體進行分組、比較、排隊、配對，并進行形態分析的過程。4 試劑配制本文件用到的試劑參見附錄

A

。DB15/T

3185—20235 染色體標本的制備樣本的獲取

2

度

60%，光照強度

3000

的培養室中培養生根。預處理剪取

cm～1

cm的根尖材料自來水沖洗后，置于羥基喹啉預處理液中14

℃處理1

h。固定將預處理的根尖蒸餾水沖洗后放入卡諾固定液中4

℃固定24

h。前低滲將固定后的根尖蒸餾水沖洗后置于0.075

mol/L氯化鉀溶液中，室溫處理30

。解離將低滲處理后的根尖蒸餾水沖洗后置于0.25

mol/L的鹽酸溶液37

℃水浴12

。再蒸餾水沖洗min后用乙酸-乙酸鈉緩沖液浸泡4

3%纖維素酶和果膠酶酶解液37

℃水浴18

。后低滲室溫條件下蒸餾水后低滲處理30

min以上。染色壓片將處理后的根尖置于干凈的載玻片，滴改良卡寶品紅染液染色2

。蓋上蓋玻片輕壓。鏡檢及圖像采集在100倍的顯微鏡下觀察中期分裂相，對染色體充分分散的分裂相進行拍照。6 染色體核型分析分析方法取30個以上中期分裂相進行染色體計數。選擇背景清晰、染色體形態清晰的5個細胞進行染色體長BStebbins的標準劃分見附錄BB.3。測量圖像相關指標測量使用光學顯微圖像處理，測量方法參見附錄A。Excel

計算對每個細胞分別計算每條染色體的臂比和絕對長度總長，并列出著絲粒位置類別。同源染色體配對及排列按染色體形態大小和著絲粒位置進行染色體配對，方法見附錄B。DB15/T

3185—2023核型模式圖繪制分析方法按照DB15/T

2788的規定。使用染色體分析軟件進行染色體核型圖的制作，運用Microsoft

Excel制作核型模式圖；結果見附錄B。0.002

0.29

1000

15

60

1000

mL

0.01

1000

mL0.075

5.59

1000

83

1000

(pH=4.75)

mL

mL

R-100.1

Y-23

mL表A.1表A.1

試劑及配置方法DB15/T

3185—2023

附錄 A（資料性）染色體長度測量步驟及本技術規程用到的試劑和配置方法A.1 染色體長度測量步驟A.1.1 掃描修整圖像用

OLYMPUS

BX

51

顯微鏡觀察染色體制片，在

×物鏡下對染色體充分分散的中期分裂相進行拍照。對河南鐵棍山藥材料取

40

個中期分裂相進行染色體計數。選擇背景清晰、染色體形態清晰的

5

個細胞進行拍照，圖像采集使用奧特光學顯微圖像處理系統

OPTPro

2008v2.0

完成。A.1.2 整理同源染色體并測量選擇染色體形態清晰的

5

個細胞進行染色體長度的測量。按染色體形態大小和著絲粒位置進行染色體配對。使用軟件中“圖像測量”菜單里“直線”或“曲線”測量工具測量染色體長臂、短臂及隨體的絕對長度。對每個細胞分別計算每條染色體的臂比和絕對長度總長，并列出著絲粒位置類別，由此進行同源染色體的配對。對每個細胞配對后計算每對同源染色體的長臂、短臂平均值，得到這個細胞的長臂值、短臂值。對細胞的長臂值、短臂值再對應地求平均值。得到該材料的長臂值、短臂值。由該材料的長短臂值，計算染色體總長并做記錄，由此進行染色體排序。各指標的測量使用奧特光學顯微圖像處理系統

完成。核型不對稱系數的計算按照

ARANO

的方法，即核型不對稱系數=長臂總長/全組染色體總長。相對長度指數(indexof

relativelength)

的方法計算并對染色體進行分類，即

IRL=染色體長度/全組染色體平均長度。A.2 染色體參數計算按染色體形態大小和著絲粒位置進行染色體配對，并根據染色體臂長計算出染色體絕對長度、相對長度和臂比等核型參數。使用

VideoTesT-Karyo

染色體分析軟件進行染色體核型圖的制作，運用Microsoft

office

制作核型模式圖。A.3 試劑及配置方法試劑及配置方法見表

A.1。

mL

mL55

mL

10

DB15/T

3185—2023表A.1試劑及配置方法（續）m)(%)(sat)1.001.01-1.701.71-3.00sm3.01-7.00st7.01

(L/S)>2:

0.00.01-0.50.51-0.991.00<21A2A3A4A1B2B3B4B>41C2C3C4C1-4M14-10M210-30DB15/T

3185—2023

附 錄B（規范性）著絲粒位置B.1 著絲粒位置見表

B.1。表B.1

著絲粒位置B.2表B.1

著絲粒位置表B.