2QB/TXXXXX—XXXXN-乙酰神經氨酸本文件規定了N-乙酰神經氨酸的原輔料、感官、理化、污染物限量、微生物限量和真菌毒素限量等要求，描述了相應的試驗方法，規定了檢驗規則和標志、包裝、運輸、貯存的內容，并給出了分子式、相對分子質量及結構式的信息。本文件適用于發酵法生產的N-乙酰神經氨酸的生產、檢驗和銷售。2規范性引用文件下列文件的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期的對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB/T601化學試劑標準滴定溶液的制備GB/T602化學試劑雜質測定用標準溶液的制備GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB4789.2食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定GB4789.3—2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸菌群計數GB4789.4食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗GB4789.10食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗GB4789.15食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數GB5009.3—2016食品安全國家標準食品中水分的測定GB5009.4食品安全國家標準食品中灰分的測定GB5009.11食品安全國家標準食品中總砷及無機砷的測定GB5009.12食品安全國家標準食品中鉛的測定GB5009.17食品安全國家標準食品中總汞及有機汞的測定GB5009.22食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1N-乙酰神經氨酸N-acetylneuraminicacid；N-acetyl-D-neuraminicacid；NANA以葡萄糖和玉米漿等為主要原料，經微生物發酵、過濾、滅菌、水解、提純等工藝制成的一種酸性氨基糖。4分子式、相對分子質量及結構式3QB/TXXXXX—XXXX4.1分子式C11H19NO94.2相對分子質量309.27（按2021年國際相對原子質量表）。4.3結構式5要求5.1原輔料要求生產菌種符合國家許可公告，發酵用營養物質和提取純化用的其他原輔料符合國家相關規定。5.2感官要求應符合表1的規定。表1感官要求項目色澤狀態氣味雜質5.3理化指標應符合表2的規定。表2理化指標≥≤≤5.4污染物限量應符合表3的規定。表3污染物限量單位：毫克每千克項目≤≤≤5.5微生物限量4QB/TXXXXX—XXXX應符合表4的規定。表4微生物限量項目≤≤≤≤5.6真菌毒素限量應符合表5的規定。表5真菌毒素限量單位：微克每千克項目≤56試驗方法6.1一般要求本方法中所用的水，在未注明其他要求時，應符合GB/T6682中水的規格，所用試劑，在未注明其他規格時，均指分析純。分析中所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的規定制備。6.2感官要求取適量樣品，置于清潔、干燥的白瓷盤中，在自然光線下，觀察其色澤和狀態，并嗅其氣味。6.3N-乙酰神經氨酸含量（以干基計）6.3.1試劑及材料6.3.1.1硫酸：色譜純。6.3.1.2N-乙酰神經氨酸標準品（C11H19NO9，CAS號：131-48-6）：純度不小于98%。6.3.2溶液配制6.3.2.1流動相：量取硫酸0.15mL于燒杯中，緩緩注入約800mL水，轉移至1000mL容量瓶中，以水定容并混勻，配制成流動相。6.3.2.2標準儲備溶液（10.0mg/mL）：稱取適量的N-乙酰神經氨酸標準品（應按實際純度折算，精確至0.1mg），加流動相配制成10.0mg/mL的標準儲備溶液。4℃條件下避光保存，保存期1個月。6.3.2.3標準工作溶液：分別移取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和1.0mL的標準儲備溶液，置于10mL容量瓶中，加流動相定容并搖勻，使其濃度分別為0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL和1.0mg/mL。6.3.3儀器及設備6.3.3.1高效液相色譜儀：配有柱恒溫系統。6.3.3.2流動相真空抽濾脫氣裝置及0.22μm或0.45μm微孔濾膜。6.3.3.3電子天平：感量0.1mg。5QB/TXXXXX—XXXX6.3.3.4移液器。6.3.4參考色譜條件16.3.4.1檢測器：紫外光檢測器。6.3.4.2色譜柱：HPX-87H陽離子交換色譜柱（300mm×7.8mm，粒徑9μm）或者具有同等性能的其他類型色譜柱。6.3.4.3柱溫：60℃。6.3.4.4進樣量：10μL。6.3.4.5流速：0.5mL/min。6.3.4.6檢測波長：210nm。6.3.5參考色譜條件26.3.5.1檢測器：紫外光檢測器。6.3.5.2色譜柱：AQ-C18色譜柱（250mm×4.6mm，粒徑5μm）或者具有同等性能的其他類型色譜柱。6.3.5.3柱溫：30℃。6.3.5.4進樣量：10μL。6.3.5.5流速：1.0mL/min。6.3.5.6檢測波長：210nm。6.3.6分析步驟6.3.6.1標準曲線的繪制將標準工作溶液分別進樣后，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。6.3.6.2樣品處理稱取樣品25.0mg（精確至0.1mg），加入50mL容量瓶中并用流動相定容至刻度，搖勻，用0.22μm或0.45μm微孔膜過濾，濾液備用。6.3.6.3樣品測定將待測樣液進樣后，根據標準品的保留時間，對待測液中N-乙酰神經氨酸進行定性，根據樣品的峰面積，以外標法計算N-乙酰神經氨酸含量。N-乙酰神經氨酸標準品及樣品的參考色譜圖見附錄A。6.3.7結果計算樣品中N-乙酰神經氨酸含量（以干基計）按式（1）計算：-3··············································（1）-3-2式中：X——樣品溶液中N-乙酰神經氨酸的含量，單位為克每百克（g/100g）；c——由標準曲線查得樣品溶液中N-乙酰神經氨酸的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V——樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL）；10-3——毫克與克的換算系數；6QB/TXXXXX—XXXXm——樣品質量，單位為毫克（mg）；w——樣品中水分含量，6.5中實際測量值，單位為克每百克（g/100g）；10-2——克與百克的換算系數。計算結果表示到小數點后一位。6.3.8精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過其算術平均值的1%。6.4pH6.4.1儀器酸度計：精度0.01，備有玻璃電極和甘汞電極（或復合電極）。6.4.2分析步驟按儀器使用說明書調試和校正酸度計。用新煮沸冷卻的中性蒸餾水配制2%（w/w）的N-乙酰神經氨酸液待測液。然后，用水沖洗電極探頭，用濾紙輕輕吸干，將電極插入待測樣液中，調節溫度調節器，使儀器指示溫度與溶液溫度相同，穩定后讀數。6.4.3結果表示所得結果表示到小數點后一位。6.4.4精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過0.1。6.5水分按GB5009.3—2016中“第二法減壓干燥法”測定。6.6總灰分按GB5009.4中規定的方法測定。6.7鉛（Pb）按GB5009.12中規定的方法測定。6.8總砷（以As計）按GB5009.11中規定的方法測定。6.9總汞（以Hg計）按GB5009.17中規定的方法測定。6.10菌落總數按GB4789.2中規定的方法測定。6.11霉菌和酵母按GB4789.15中規定的方法測定。6.12大腸菌群按GB4789.3—2016中“MPN計數法”測定。6.13金黃色葡萄球菌7QB/TXXXXX—XXXX按GB4789.10中規定的方法測定。6.14沙門氏菌按GB4789.4中規定的方法測定。6.15黃曲霉毒素B1按GB5009.22中規定的方法測定。7檢驗規則7.1組批同原料、同配方、同工藝、同一生產線連續生產的，質量均一的產品為一批。7.2抽樣每批產品的檢驗按表6抽取樣本。表6產品抽樣表2141>500617.2.1取樣方法取樣時，用清潔、干燥的取樣工具插入包裝袋的三分之二。每袋取樣100g，將抽取的樣品迅速混勻，用四分法縮分，然后分裝于兩個潔凈、干燥的取樣袋中，密封。貼上標簽，一份用于檢測，一份留存備查。7.3出廠檢驗7.3.1產品出廠前，應按本文件規定逐批進行檢驗。檢驗符合本文件要求后方可出廠。7.3.2出廠檢驗項目為感官、N-乙酰神經氨酸含量、pH、水分、總灰分。7.4型式檢驗型式檢驗項目為本文件要求中規定的全部項目，一般情況下，型式檢驗每半年進行一次。有下列情況之一時，亦應進行型式檢驗：a)原輔材料有較大變化時；b)更改關鍵工藝或設備時；c)新試制的產品或正常生產的產品停產三個月以后，重新恢復生產時；d)出廠檢驗與上次型式檢驗結果有較大差異時；e)國家監督機構按有關規定需要抽檢時。7.5判定規則7.5.1抽取樣品經檢驗，檢驗項目全部符合要求，判定該批產品符合本文件。7.5.2檢驗項目如有一項至兩項不符合要求，應重新自同批產品中抽取兩倍量樣品進行復驗，以復驗結果為準。若仍有一項不符合要求，判定該批產品不符合本文件。檢驗結果如有三項及以上指標不符合要求，判定該批產品不符合本文件。8QB/TXXXXX—XXXX8標志、包裝、運輸、貯存8.1標志包裝儲運圖示標志應符合GB/T191的要求。8.2包裝包裝容器應整潔、衛生、無破損，并符合相關規定。8.3運輸8.3.1運輸工具應清潔。8.3.2不應與有毒、有害、有腐蝕性、有堿性和含有異味的物品混裝、混運，宜避免受潮、受壓、曝曬。裝卸時，應輕拿輕放，不應直接鉤扎包裝。8.4貯存8.4.1應貯存在室溫下通風、干燥、清潔的倉庫內，嚴防曝曬雨淋，避免火種。8.4.2不應與有毒、有害、有腐蝕性、有堿性和含有異味的物品放在一起。1QB/TXXXXX—XXXX（資料性）高