百合產地加工技術研究

中藥百合來自百合科植物卷丹的rifolium。葉子是麗葉酒。海拔l。g8if。e.布朗非正式爾。細膩的葉子。性味甘寒,具有養陰潤肺、清心安神之功效。用于陰虛久咳,痰中帶血,虛煩驚悸,失眠多夢,精神恍惚等癥。中藥材都要經過產地加工和炮制才能入藥,長期以來,百合的產地加工沒有統一的標準操作規程和質量標準,都是百合產地的藥農憑經驗加工,不同的加工操作者之間差異較大。許多地區的藥農為了使加工的百合藥材外形顏色美觀,加工時經常對百合進行熏硫處理。然而,產地加工又對百合有效成分影響較大。只有科學的規范化的產地加工方法,才能保障藥材的外觀質量優良和內在質量穩定,達到《中藥材生產質量管理規范(試行)》中要求的“保持藥材質量穩定”,實現百合生產的“安全、有效、穩定、可控”。筆者在湖南省湘西自治州龍山縣開展百合規范種植研究課題時,設計了百合不同取材部位、不同燙片時間、不同干燥方法等產地加工試驗研究內容,對商品中藥材百合的主流藥材品種卷丹LiliumlancifoliumThunb.進行研究,探討百合產地加工方法對百合主要成分多糖、總磷脂成分的影響,以期確定百合的最佳產地加工方法,制定百合產地加工的標準操作規程,從而確保百合產品的質量穩定和可控。1材料、藥品和機器1.1村百合種植基地的種植成就藥材來源于湖南省湘西苗族自治州龍山縣洗洛村百合規范化種植基地的種源相同、栽培時間、施肥管理和其他田間管理一致的同一塊試驗田。2003年8月1日采收,去除莖葉和須根。1.2中片、混片、百合混片制備取同一塊試驗田的新鮮鱗莖,分別剝取外片(上年種莖的鱗葉)、心片(鱗莖中央抱合緊密的5～6枚鱗葉)、中片(去除外片,心片部分后的鱗葉)、混片(鱗莖上所有的鱗葉),洗凈,沸水中燙煮11min,澇出冷水漂凈,曬干。另取百合混片分別燙煮7、9、11、13、15min,撈出冷水漂凈,曬干。熏硫干燥法取鮮百合混片在燙煮11min后,撈出冷水漂凈,熏硫24h,然后曬干。烘干干燥法取鮮百合混片在60℃直接烘干。1.3fa/ja電儀器:UV-1600紫外可見分光光度計(北京瑞利公司);TP3000超聲波提取器(天鵬電子新科技有限公司);FA/JA電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司);TD4臺式自動平衡離心機(長沙平凡儀表有限公司);DK-600型電熱恒溫水浴槽(上海精宏實驗設備有限公司)。藥品:葡萄糖對照品由美國Sigma公司提供,硫酸、苯酚、鉬酸銨、抗壞血酸等均為分析純。2實驗方法2.1百合多糖的提取(1)標準曲線的制備:精密稱取葡萄糖對照品(105℃烘干至恒重)60mg,溶解并定容至100ml,為葡萄糖對照儲備液、含有葡萄糖0.6mg/ml。再精密吸取葡萄糖對照儲備液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5ml,分別置于25ml容量瓶中定容搖勻,精密吸取2ml各濃度溶液,加入1ml4%苯酚混勻,迅速加入7ml濃硫酸,混勻,40℃水浴30min,冰水浴5min,以第1份為空白,490nm處測其吸光度,以葡萄糖濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,計算得出回歸方程為Y=0.0128+0.5001x,r=0.9996。線性范圍為0.012～0.084mg/ml。(2)多糖的提取:精密稱取60℃烘干4h的百合粉(過40目)1.000g,精密加水100ml,稱重,超聲波提取40min,稱重,水補足減失重量,棉花過濾,取濾液2ml,小心加入95%乙醇10ml攪拌,3000r/min,離心10min,水溶解沉淀并轉移至50ml容量瓶中,定容搖勻,為樣品制備液。(3)樣品的含量測定:從樣品液中精密吸取2ml,加入1ml4%苯酚混勻,同標準曲線項下操作,測定百合樣品的吸光度值,計算百合樣品液濃度。多糖含量(%,以葡萄糖計)=(百合樣品液濃度×50×25×10-3/樣品重)×100%2.2磷酸鹽磷酸檢測(1)標準曲線的制備:將磷酸二氫鉀105℃烘干至恒重,干燥器內冷卻至室溫,精密稱取,配置成含磷0.01mg/ml的磷標準液,備用。精密吸取磷標準液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml于不同試管中,加入0.25ml消化液,電爐上消化至顏色由棕黑變為無色透明,冷卻,轉移至25ml容量瓶中,磷顯色劑(3mol/L硫酸-水-2.5%鉬酸銨-10%抗壞血酸=1:5:1:1,按序配置當天使用)定容,搖勻,65℃水浴10min,冷卻至室溫,以標0為空白,700nm處測定磷脂磷酸的吸光度。以磷濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,自由度為6,p<0.05,有相關性,用最小二乘法求出回歸方程,即Y=-2.24×10-3x+0.3276r=0.9986,x為含磷濃度,Y為吸光度,線性范圍為0.04～0.32×10-3mg/ml。(2)樣品的提取:精密稱取百合粉5.000g,精密加入Folch試劑(氯仿:甲醇=2:1)50ml,蓋塞稱重,超聲波提取40min,補足減少溶劑,迅速過濾,密閉,冰箱保存,為樣品制備液。(3)樣品的含量測定(采用鉬藍比色法):精密吸取百合樣品液2.5ml,水浴揮干,加入0.5ml消化液,同標準曲線項下操作測定百合樣品的磷脂磷酸濃度。百合樣品的總磷脂含量(mg/100g)=(mg/ml×25ml×40×25×10)/5.000,其中25為磷脂轉化系數。3結果與分析3.1結果經過計算,百合各藥材樣品中有效成分百合多糖和總磷脂含量見表1。3.2百合干燥和燙片時間的確定(1)從表1中的樣品編號1、2、3、8可以看出,在百合剝片處理時,不同取材部位的百合鱗葉,其有效成分百合多糖和總磷脂含量存在差異,其中百合多糖含量為中片>外片>混片>心片,以中片含量最高,心片含量最低;百合總磷脂含量為心片>混片>中片>外片,以心片含量最高,外片含量最低。因此百合產地加工時,應將外片、中片、心片分開盛放,便于燙片加工時能準確地把握燙片的時間,也便于臨床處方用藥時的準確定量和制藥企業的準確投料。(2)熏硫干燥法在中藥材百合傳統加工時經常使用,熏硫后的百合容易干燥,折干率高,藥材的外觀顏色潔白如玉,晶瑩透明,同時熏硫可以殺菌、防霉,便于百合藥材的貯藏。從表1中的樣品編號4和8反映出產地加工時熏硫與否雖然對百合多糖的含量沒有太大影響,但是對百合總磷脂的含量影響較大,熏硫后百合總磷脂含量明顯降低。另外,熏硫后的百合藥材中殘留有大量的硫化物,使藥材的毒性增大,且熏硫加工過程中對環境造成一定程度的污染。因此為了確保百合藥材的內在品質和臨床用藥的安全,百合產地加工時應徹底改變傳統的熏硫干燥法,生產“綠色”百合藥材產品。(3)藥材樣品5采用烘箱烘烤百合新鮮鱗片,此法對百合多糖和總磷脂含量沒有多大影響,百合多糖和總磷脂含量和曬干法相當,同時該方法具有干燥時間短,省時省力和不受采收季節天氣陰雨的影響等優點,但由于烘烤過程發生梅拉德反應,百合干燥后顏色變成深褐色,外觀性狀較差,而且烘干干燥法設備投資大,加工成本高。故百合藥材干燥時不宜采用此方法進行干燥。(4)百合產地加工過程中,如何把握好燙片時間的長短,是百合產地加工過程中的一項關鍵技術。燙片時間過短,百合顏色呈現褐色,外觀顏色較差;燙片時間過長,百合的鱗片易破碎,不成片形,外觀性狀較差。同時,表1中的樣品編號6、7、8、9和10反映出燙片時間的長短對百合多