實驗指導《中藥化學》實驗室注意事項中藥化學實驗課具有實驗周期長、使用有機溶劑品種多，用量較大等特點，所用的藥品多數是揮發性、易燃、有腐蝕性、刺激性、實驗操作經常在加溫，減壓下進行，需要使用各種熱源和電器，再加上實驗室較為擁擠，若操作不慎，易引起著火、觸電、中毒、爆炸等事故，為確保實驗安全順利進行，特作如下要求。一、實驗前必須預習實驗內容，了解實驗原理和操作程序，檢查儀器是否完整，裝置是否正確，檢查合格后方可開始實驗。二、實驗室內要保持嚴肅、安靜，不得大聲說話打鬧，室內嚴禁吸煙，實驗進行時不行擅自離開，必要時委托專人看管。三、未經教師允許不得擅自使用明火，需使用明火時，實驗臺周圍不得放置易燃有機溶劑，如發生火情應保持鎮靜，立即報告指導教師同時切斷火源，移走易燃品，用濕布悶蓋或用滅火器進行滅火，切勿輕易用水，以免擴大火勢。四、實驗時要做到整齊、清潔、用過的儀器要及時清洗并收入儀器柜內，保持水、儀器、桌面、地面四潔。五、回流、蒸餾有機溶劑時，注意檢查冷凝水是否通暢，裝置不得密閉，接收有機溶劑時不得使用廣口儀器，溶劑瓶不得敝口存放。在進行減壓操作時，必須使用安全瓶，弄清操作程序，以免造成回水等事故。六、使用揮發性試劑或噴顯色劑時，應在窗口或通風櫥內操作，不慎濺在桌面上的化學藥品必須立即清除。身體直接接觸化學物品后應及時用肥皂及大量水沖洗，如堿性試劑可用l%HAc溶液沖洗，酸性試劑可用3%NaHC03溶液沖洗。不要用酒精、丙酮等洗滌皮膚上的有機物，以免增加皮膚對有毒物質的吸收，眼睛內濺入化學試劑后，應立即用大量水沖洗，及時到校醫室就診。七、 使用電器設備（如水浴鍋、紫外燈、旋轉蒸發儀、循環水泵等）一定要按操作規程進行，不得在烘箱內干燥帶有易燃性有機溶劑的儀器或物品，儀器發生故障時及時報告指導教師，不得擅自拆卸。八、 每次實驗結果后的產品，應妥善包裝好，貼好標簽，寫明級別、產率等，放入干燥器內保存，不得隨意丟失。九、 實驗結束后，值日生應做好實驗室清潔衛生工作，整理好公共儀器、藥品，檢查水、電、門窗，經教師檢查后方可離去。實驗一粉防己中粉防己生物堿的提取、分離和鑒定粉防己為防己科千金藤屬植物粉防己的干燥塊根。又名漢防己、倒地拱、百木香。具有利水消腫，祛風止痛的功效，用于治療神經痛、關節炎等癥。粉防己的有效成分是雙芐基異喹啉型生物堿，總堿含量約1~2%，其中主要是粉防己堿、去甲粉防己堿及輪環藤酚堿。一、實驗目的要求1、掌握總生物堿的提取及脂溶性生物堿和水溶性生物堿的分離、純化方法

2、掌握脂溶性和水溶性生物堿的薄層色譜鑒定方法3、熟悉生物堿衍生物的制備方法二、實驗原理利用乙醇提取總生物堿，回收乙醇得總生物堿的浸膏，利用脂溶性生物堿在酸性條件下成鹽后，溶于水不溶于極性小的有機溶劑；在堿性條件下成游離生物堿，溶于極性小的有機溶劑不溶于水的特點，反復處理，藉此使脂溶性的粉防己甲及粉防己乙素與水溶性的輪環藤酚堿分開，并去除部分雜質。R=HCH3R=CH3粉防己堿R=HCH3R=CH3粉防己堿去甲粉防己堿三、實驗方法1、粉防己總堿的提取稱取粉防己粗粉100g，置于500ml圓底燒瓶中，加80%?95%乙醇浸沒藥材（約需300ml），水浴加熱回流1~2小時，過濾，濾液置1000ml三角燒瓶中。藥渣再加乙醇浸沒，如上法再提取2次。合并3次乙醇提取液，如有絮狀物析出，再過濾1次，澄清溶液濃縮至糖漿狀。2、親脂性生物堿和親水性生物堿的分離 將糖漿狀總提取物置三角燒瓶中，逐漸加放100ml左右1%鹽酸液，同時充分攪拌，促使生物堿溶解，不溶物則呈樹脂狀析出。靜置，濾出上清液，用1%鹽酸少量多次洗滌不溶物，直至洗液對生物堿沉淀試劑反應微弱為止。合并洗液和酸性溶液，移置于分液漏斗中用氯仿洗3次，每次取用酸水液的1/3量。氯仿洗液合并，用1%鹽酸洗1~2次。將洗滌氯仿液的酸液和總酸水液合并，留取8ml作沉淀反應，其余酸液移入500ml的三角燒瓶中，滴加濃氨水中和至pH9~10,此時親脂性的叔胺堿游離出來。如有發熱現象，應設法冷卻，加氯仿50ml，再移置500ml分液漏斗中，振搖萃取，分取氯仿層，上層堿水液再以新鮮氯仿萃取數次，每次用氯仿50ml，直至氯仿抽提液生物堿反應微弱時為止（試驗時取氯仿溶液置表面皿上待溶劑揮發，殘留物中加稀鹽酸2滴使溶解，再加生物堿沉淀試紙試之，或做薄層板點滴反應）合并氯仿溶液并置分液漏斗中，先以1%NaOH液洗2次后，再用水洗耳恭聽2~3次，堿水洗液和氨性堿水液合并，留待分離水溶性生物堿。氯仿液用無水硫酸鈉脫水，回收氯仿至干，抽松，加丙酮約30ml熱溶，必要時抽濾，丙酮液冷后，析晶，抽濾，得脂溶性生物堿（粉防己甲素和乙素的混合物）。3、粉防己甲素和粉防己乙素的分離 稱取粗總堿，置于25ml三角燒瓶中，加5~6倍苯冷浸，室溫放置30min后，抽濾，苯不溶物主要含乙素，可用95%乙醇溶解，加少量活性炭回流脫色，乙醇液濃縮，析晶，抽濾，得粉防己乙素。苯液回收至干，加20倍量95%乙醇，適量活性炭回流加熱30min,抽濾，乙醇液放置，析晶，抽濾，得粉防己甲素，干燥，稱重,用丙酮（1：40，W/V）重結晶，（熱溶，抽濾）得粉防己甲素精制品，作TLC檢查。4、季胺生物堿——輪環藤酚堿的分離純化 將堿水液用NHfl固體中和至pH7,置分液漏斗中，用正丁醇提取數次，直至堿水液生物堿反應微弱為止（取數滴堿水液于試管中，用稀HCl酸化后，再加生物堿沉淀試劑試之，或作薄層板點滴反應）。正丁醇液減壓濃縮至干，用95%乙醇溶解，濾除不溶物，乙醇液濃縮至小體積，放置，析晶。反復數次，可得輪環藤酚堿精制品，作TLC檢查。5、 粉防己生物堿的鑒定（1）生物堿沉淀反應：取粉防己酸水液分別置小試管中，每份1ml，分別滴加下列各試劑2~3滴，觀察有無沉淀及顏色變化。A、 碘化鉍鉀試劑；B、 硅鎢酸；C、 苦味酸試劑（先將酸水液調至中性，再滴加試劑）（2）薄層色譜：A、 粉防己生物堿：吸附劑：硅膠-CMC-Na板展開劑：氯仿-乙醇（10：1）氨飽和；甲苯-丙酮-甲醇（4：5：1）氨飽和對照品：粉防己甲素乙醇液粉防己乙素乙醇液顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑B、 輪環藤酚堿：吸附劑：硅膠-CMC-Na板展開劑：甲醇-氨水（7：3）對照品：輪環藤酚堿水液顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑6、衍生物的制備（1）苦味酸鹽：取粉防己堿200mg溶于2ml丙酮中，滴加苦味酸的飽和水溶液，即析出黃色沉淀，滴加試劑至沉淀完全，抽濾，收集沉淀，依次以少量水、乙醇、乙醚洗滌，再經乙醇重結晶，可得苦味酸鹽，mp241?246°C。（2）粉防己甲素二碘甲烷鹽（漢肌松）的制備：取粉防己甲素200mg，加甲醇10ml溶解，加碘甲烷1ml，回流加熱15min,蒸去甲醇，殘留物以水或乙醇重結晶，得白色鱗片狀結晶，即粉防己甲素二碘甲烷鹽（漢肌松），mp216.5C。四、操作要點1、 提取總堿時，回收乙醇至稀浸膏即可。過干時，當加入1%鹽酸水后，會結成膠狀團塊，影響提取效果。2、 滴加濃氨水中和至pH9?10時，若有發熱現象，應設法冷卻，以免加入的氯仿揮發。3、 去甲粉防己堿雖然也有酚羥基，但不溶于一般濃度的NaOH液，故稱之為隱性酚羥基，用2%NaOH萃提時，仍留在CHCl3液中。4、 純化時，若溶劑量太大，不易析晶，可再蒸去一些溶劑后，放置，以利結晶析出。五、思考題1、 提取總生物堿的常用方法有哪幾種？各有何缺點？2、 粉防己堿和去甲粉防己堿在結構上有哪些異同點？實驗中如何利用它們的共性和個性？3、 什么叫生物堿的假陽性反應？能消除嗎？4、 萃取操作的好壞對實驗結果有什么影響？怎樣防止產生乳化？怎樣消除乳化？為什么有機溶劑必須洗至中性方能濃縮或放置？實驗二大黃中大黃素的提取、分離和鑒定

大黃為蓼科多年生草本植物掌葉大黃，藥用大黃和唐古物大黃的根莖。具有瀉下、健

胃、抗菌、清熱、解毒、收斂和利膽等作用。此外，還有止血、降低血清膽甾醇的作用。大黃中含有多種羥基蒽醌類化合物，其中有較少量的游離羥基蒽醌（約為大黃的0.5%左右），它們在植物中主要以苷的形式存在。一、 實驗目的和要求1、 掌握PH梯度萃取法的原理和操作技術

2、 學習用硅膠柱色譜法分離精制大黃素3、學習羥基蒽醌類化合物的鑒定方法、實驗原理根據大黃中蒽醌類成分酸性強弱不同的特性，以乙醚提取脂溶性成分后，利用堿度遞增的堿水液，自乙醚提取液中萃取酸度遞減的游離蒽醌類成分，本實驗主要分離甘I?廿?于其大黃素。1，8-二羥基蒽醌衍生物1，8-二羥基蒽醌衍生物HCH3大黃酚AOHCH3大黃素BOCH3CH3大黃素甲醚CHCH2OH蘆薈大黃素DHCOOH大黃酸ER1R酸性：E>B>D>C、A極性：E>D>B>C>A三、 實驗方法1、酸水解取大黃粉log,加20%硫酸水溶液100ml,在水浴上加熱3~4小時，抽濾，濾餅水洗后于70°C左右干燥。2、總羥基蔥醌苷元的提取濾餅經干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚150ml,回流提取3~4小時，得乙醚提取液。乙醚提取液經薄層色譜檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠-CMC-Na，展開劑為石油醚（沸程60?90C）-乙酸乙酯（7：3），近水平或直立展開，在可見光下可看到4個斑點，Rf為0.9的黃色斑點為大黃酚和大黃素甲醚混合物，在此條件下分不開，其余3個斑點，依Rf值由大到小分別為大黃素（橙色斑點）、蘆薈大黃素（黃色斑點）、大黃酸（黃色斑點）。3、 pH梯度萃取分離（1）置乙醚提取液于250ml分液漏斗中，以2.5%碳酸氫鈉水溶液120ml分3次萃取，乙醚層經薄層色譜檢查（薄層條件同上），知大黃酸己除去。合并3次碳酸氫鈉萃取液酸化，可得大黃酸沉淀。（2）經2.5%碳酸氫鈉水溶液萃取后的乙醚層，以2.5%碳酸鈉水溶液120ml分3次萃取,乙醚層經薄層色譜檢查，知大黃素己除去。合并3次碳酸鈉萃取液，酸化，主要得大黃素沉淀，另含有少量大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等。水洗沉淀物至洗出液呈中性低溫干燥后作為柱色譜樣品。經2.5%碳酸鈉水溶液萃取后的乙醚層，繼續用2.5%碳酸鈉水溶液120ml分4次萃取，乙醚層經薄層色譜檢查，知蘆薈大黃素己除去。合并4次碳酸鈉萃取液，酸化，得蘆薈大黃素沉淀。經2.5%碳酸鈉水溶液萃取后的乙醚層，再以0.5%氫氧化鈉水溶液100ml分4次萃取至堿水層無色為止，合并氫氧化鈉萃取液，酸化得沉淀，為大黃酚和大黃素甲醚混合物。4、 硅膠柱色譜分離精制大黃素裝柱：取100~200目的硅膠約10g，按干法裝柱加樣：將樣品溶解于5ml石油醚(沸程60?90°C)-乙酸乙酯(7：3)中，用吸管吸取樣品溶液于色譜柱柱床頂端。洗脫：用石油醚(沸程60~90C)-乙酸乙酯(7：3)為洗脫劑洗脫，分段收集，每份10ml，用硅膠薄層板跟蹤檢查(被洗脫的成分先后順序為：大黃酚和大黃素甲醚、大黃素、蘆薈大黃素等)。合并大黃素部分，適當濃縮，放置析晶，過濾，即得純品大黃素。5、 大黃素的鑒定在薄層板上用點滴反應檢查大黃素對NaOH、MgAc2試液的反應測定大黃素的熔點。四、 操作要點1、 本實驗多次使用乙醚，因此需注意安全防火，絕對禁止有明火的情況下使用乙醚。2、 采用梯度pH萃取法分離萃取各游離蔥醌成分時，操作不宜過分劇烈振搖，以免乳化，難以分層。3、 硅膠柱色譜整個操作過程硅膠柱表面應保持一定高度的洗脫劑，不使柱面溶液流干。4、 柱色譜洗脫時流速不應太快，以免柱交換來不及達到平衡，影響分離效果。5、 柱色譜時所用的儀器要干燥。五、 思考題1、 大黃中五種羥基蒽醌化合物的酸性和極性大小應如何排列？為什么？2、 梯度pH萃取法的原理是什么？適用于哪些中藥化學成分的分離？3、 試分析薄層色譜圖譜中各羥基蔥醌類成分的結構與Rf值的關系。

實驗三槐花米中蘆丁的提取、分離和鑒定槐花米系豆科槐屬植物sophorajaponicaL的花蕾，自古作為止血藥。其中所含主要化學成分為蘆丁，亦稱蕓香苷，藥理實驗證明蘆丁具有減少毛細血管的通透性作用，臨床上主要用為防治高血壓病的輔助治療藥物。此外，蘆丁對于放射線傷害所引起的出血癥亦有一定作用。蘆丁廣泛存在于植物界，已發現的含蘆丁植物至少在70種以上，其中以槐花米和蕎麥葉含量較高，可作為提取蘆丁的原料。一、 實驗目的和要求1、以蘆丁為實例學習黃酮類化合物的提取分離方法2、掌握黃酮類化合物的主要性質及黃酮苷、苷元和糖部分的鑒定方法3、通過槲皮素的乙酰化反應，要求得到純品槲皮素五乙酰化物4、掌握紙色譜和薄層色譜的方法及黃酮類化合物的色譜特點二、實驗原理1、蘆丁可溶于熱水，難溶于冷水。其分子結構中具有較多的酚羥基，顯弱酸性，在堿中易溶解，而在酸性條件下易析出沉淀。故可采用堿提酸沉法提取蘆丁。2、利用蘆丁可被稀酸水解，生成苷元和糖。通過紙色譜和薄層色譜及苷元的乙酰化衍生物進行鑒定和確認。三、實驗方法1、蘆丁的提取 于1000ml燒杯中加入500ml蒸餾水，煮沸2~3min后，稱取40g槐花米（粗粉），投入沸水中，直火加熱煮沸約5min，在攪拌下小心加入石灰乳調至pH8?9,加熱微沸30min后，注意添加水，保持原體積并維持pH8~9，趁熱過濾，濾渣再加入200ml水，加石灰乳調pH8~9，煮lOmin，趁熱過濾，合并濾液，稍冷（60?70°C）,用濃HCl調至4~5,放置后析出沉淀，抽濾，用水洗3?4次，置空氣自然干燥得淡黃色粗制蘆丁。2、蘆丁的精制將蘆丁粗品置500ml燒杯中，加適量（約100ml）蒸餾水，再用石灰水調至pH8。加熱煮沸數分鐘，使充分溶解。趁熱抽濾，濾液滴加3mol/LHCl調至pH7，放置18小時以上，即析出沉淀。減壓過濾，用少量蒸餾水洗滌沉淀2~3次。然后用少量乙醇洗1次。抽干，于70?80°C干燥1小時，即得精制蘆丁。稱重，計算產率，測mp。3、蘆丁的水解 取精制蘆丁2g,研細，置于500ml圓底燒瓶中，加2%HS0溶液150ml，24于直火上加熱微沸30min（要補充蒸發掉的水分），析出的黃色沉淀為槲皮素，趁熱抽濾，濾液保留作糖部分的鑒定。沉淀經水洗后再用95%乙醇重結晶1次，得黃色針狀結晶，于70~80C以下干燥，即得精制槲皮素。測mp。4、糖的紙色譜鑒定 取水解母液20ml，用Ba（OH）的細粉（約2.6g）中和至pH7，濾去2生成的BaSO沉淀（可用滑石粉助濾），濾液濃縮至約1ml，供紙色譜點樣用。4樣品：水解濃縮液色譜濾紙：新華一號濾紙對照品：葡萄糖、鼠李糖水溶液展開劑：正丁醇-乙酸-水（4：1：5上層）顯色：苯胺-鄰苯二甲酸鹽試劑噴后105C烘10min,顯棕色和棕紅色斑點。苯胺-鄰苯二甲酸的配制：將1.66g苯二甲酸和0.93g的苯胺溶于100ml水飽和的正丁醇中。5、 蘆丁、槲皮素的紙色譜和聚酰胺薄層鑒定樣品：自制蘆丁、槲皮素的乙醇溶液色譜濾紙：新華一號濾紙對照品：蘆丁、槲皮素的乙醇溶液展開劑：（1）正丁醇-乙酸-水（4：1：5上層）（2）15%乙酸水溶液顯色：（1）可見光下觀察及紫外燈下觀察（2） 經氨氣薰后再觀察（3） 噴三氯化鋁試劑后再觀察聚酰胺薄層的鑒定，用90%乙醇或乙醇-水（7：3）展開，在紫外燈下觀察斑點顏色，或采用紙色譜的顯色方法。6、槲皮素五乙酰化物的制備取槲皮素結晶200mg，置于圓底燒瓶中，加4ml無水吡啶溶解，再加5ml乙酸酐搖勻，接上空氣冷凝管，水浴上加熱回流30min，放冷。將反應液在攪拌下傾入100ml冰水中，一直攪拌至油滴消失，白色固體沉淀析出為止，抽濾，濾餅用水洗滌，干燥后用95%乙醇重結晶，得針狀結晶，測其熔點（文獻值為193?195C）。四、操作要點1、 提取中加入硼砂，即能調節水溶液的pH,又有與蘆丁分子中的鄰二酚羥基結合，達到保護蘆丁減少氧化的目的。但硼砂價格較貴，工業上用較大量的石灰加少量的硼砂，同樣達到提高質量的要求。2、 攪拌下用石灰乳調節pH8~9，既可達到堿溶解蘆丁的目的，又可除去槐花米中含有的大量果膠、粘液質、多糖等，使這些成分生成鈣鹽沉淀不致溶出。但pH不可過高，否則鈣離子能與蘆丁形成螯合物析出而降低收率。3、 用濃鹽酸酸化調pH4~5，pH不宜過低，以免蘆丁形成钅羊鹽，重新溶解，降低收率。4、 槲皮素五乙酰化衍生物制備中，所有儀器均要干燥。五、思考題1、 提取蘆丁工藝中影響產量與質量的因素是什么？為什么要加硼砂水沸溶液？2、 使用去離子水或蒸餾水的目的？為什么？3、 蘆丁水解不完全時將產生什么結果？4、 黃酮類化合物有哪些提取方法？蘆丁的提取還可以用什么方法？5、 蘆丁和槲皮素用不同展開劑系統展開，將出現什么結果？為什么？6、 蘆丁和槲皮素聚酰胺薄層將出現什么結果？為什么？7、 槲皮素乙酰化衍生物的制備應注意什么？如何證明蘆丁分子中只含有葡萄糖和鼠李糖？如何證明苷元、葡萄糖、鼠李糖的連接位置？實驗四薯蕷皂苷元的提取、分離和鑒定我國薯蕷皂苷元資源極為豐富，薯蕷略的八十多種植物中大多含有薯蕷皂苷，其中可用于生產薯蕷皂苷元的植物原料有穿山龍，盾葉薯蕷，山萆解等，用其根莖提取薯蕷皂苷元。薯蕷皂苷屬于甾體皂苷，經水解后可以得到屬于甾體結構的薯蕷皂苷元，是合成甾體激素的重要原料。一、實驗目的和要求1、 掌握苷類的酸催化水解方法2、 掌握甾體皂苷元的提取方法3、 掌握甾體皂元的檢識方法4、掌握索氏提取器的應用二、已知主要成分的理化性質穿山龍根中含有多種甾體皂苷，其中薯蕷皂苷含量最高。這些皂苷水解后大多能生成薯蕷皂苷元。1、薯蕷皂苷無定形粉末或針狀結晶，mp288°C,[a]D-95°。可溶于乙醇、甲醇、醋酸、難溶于乙醚等弱極性有機溶劑，不溶于水。2、 薯蕷皂苷元白色針狀結晶（乙醇），mp204~207C（丙酮）或202?204,[a]D2-129.3°（氯仿）。可溶于一般有機溶劑及醋酸中，不溶于水。三、實驗原理薯蕷皂苷元在植物體內與葡萄糖、鼠李糖結合成薯蕷皂苷，經酸水解生成薯蕷皂苷元和單糖。由于薯蕷皂苷元不溶于水，留存于植物殘渣中，所以可用有機溶劑直接從植物原料殘渣中連續回流將其提取出來。四、實驗方法（一）薯蕷皂苷元的提取分離方法1、苷的酸水解取穿山龍25g，切成碎片，置500ml圓底燒瓶中，加8%酸水（水-濃硫酸230：20V/V）,然后直火加熱（石棉網上），回流6小時（開始用小火，以防泡沫沖出）。倒去酸水，加入常水洗滌兩次，然后將藥渣倒在乳缽內，加固體碳酸鈉粉研磨，調pH至中性，常水洗，過濾（用尼龍布），濾渣研碎，低溫干燥（不超過80C），得干燥藥渣。2、 薯蕷皂苷元的提取將上述干燥藥渣裝入濾紙筒置索氏提取器內，用石油醚（沸程60?90C）300ml，在水浴上連續回流提取4~6小時，提取液常壓回收石油醚至約10?15ml,迅速用吸管轉入小錐形瓶中，冷卻，析出結晶，抽濾，固體用少量新鮮石油醚洗滌兩次，抽干，即得薯蕷皂苷元粗品。干燥，稱重，計算得率。3、 精制將上述粗品用20?30ml95%乙醇加熱溶解（色深時可加1?2%的活性炭脫色），趁熱抽濾，濾液放置，析出結晶。濾集結晶，干燥，即得薯蕷皂苷元精品。稱重，計算得率，測定熔點mp204?207°C。（二）薯蕷中皂苷與皂苷元的鑒定1、皂苷的鑒別（1）泡沫試驗取穿山龍的水浸出液2ml,置小試管中，用力振搖lmin,如產生多量泡沫，放置lOmin,泡沫沒有顯著消失，即表明含有皂苷。另取試管二支，各加入穿山龍熱水浸出液lml，一管內加入2mlO.lmol/L氫氧化鈉溶液，另一管加入2mlO.lmol/L鹽酸溶液，將兩管塞緊用水振搖lmin，觀察兩管出現泡沫的情況。如兩管的泡沫高度相近，表明為三萜皂苷，如含堿液管比含酸管的泡沫高過數倍，表明有甾體皂苷。（2）溶血試驗2、皂苷元的顯色反應（1）硫酸-醋酐試劑薯蕷皂苷元結晶少許，置白磁板上，加硫酸-醋酐試劑2?3滴，觀察顏色由紅?