西紅花苷和西紅花苷-1在小鼠體內抗氧化活性的對比研究

西紅酸和西紅酸是一種特殊的水生胡葵。這是梔子和西紅鴨葉酸的主要成分和藥理活性的物質基礎。西紅花酸(crocetin)為一系列西紅花苷的苷元,西紅花苷-1(crocin-1)為兩個藥材中含量最高的西紅花苷,占西紅花總苷約70%(Fig1)。文獻報道西紅花苷及其苷元西紅花酸具有廣泛的藥理活性,如保護心血管作用,抑制腫瘤細胞,神經保護作用和肝細胞保護作用。近年來的研究證明老化和其他多種疾病的發生過程都與活性氧有關,而類胡蘿卜素的藥理作用機制中,抗氧化活性被認為具有重要意義。日本學者Asai等的研究表明,西紅花苷在小鼠腸道內被水解成西紅花酸,然后吸收入血,在體內又被轉化成西紅花酸的葡萄糖醛酸代謝物,并推測這種體內代謝物可能是西紅花酸和西紅花苷在體內發揮療效的活性分子形式。而且使用相同量的西紅花酸和西紅花苷后,觀察到體內血藥濃度曲線明顯不同。因此,西紅花苷在體內代謝過程是否會影響其體內藥理活性的發揮,西紅花苷的藥理活性是否不同于西紅花酸,這是一個值得探討的課題。鑒于本類化合物發揮藥理療效的重要基礎是其抗氧化活性,本研究采用測定普通小鼠體內抗氧化系統指標的方法,來對比評價西紅花酸和西紅花苷-1體內抗氧化活性。1材料和方法1.1抗氧化酶taoc、谷胱甘肽研究試劑西紅花苷1和西紅花酸的分離見課題組前期發表文獻。超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和總蛋白測定試劑盒購于南京建成生物工程有限公司。維生素E(Sigma,USA)作為體內抗氧化活性測定的陽性對照藥。1.2gsh-px和mda含量的測定SOD的測定方法參考文獻,TAOC的測定方法參考文獻,GSH-Px的測定方法參見文獻,MDA含量測定參見thiobarbituricacid方法?？偟鞍缀康臏y定方法參見Bradford等方法。1.3動物分組、給藥與測定昆明種小鼠(5mon,35～40g)購于四川大學實驗動物中心。動物在整個實驗過程中飼養于溫度恒定在23℃的動物房內,并能自由取食和飲水。所有小鼠隨機分為6組,每組6只,灌胃給藥。第1組為空白對照組,每次只給溶劑sodiumCMC(0.3%),第2組為陽性對照維生素E組(15mg·kg-1·d-1),第3、5、7組為西紅花酸(6.25、12.5、25mg·kg-1·d-1)組;第4、6、8組為西紅花苷(18.7、37.5、75mg·kg-1·d-1)組。連續給藥6wk。最后1次給藥24h后處死動物,收集血漿和5個器官(心、肝、脾、腎和大腦)用于生化測定。以上5個器官的生理鹽水勻漿液(0.1g·ml-1)在低溫離心機中離心10min(4℃,4000×g),上清液分別用于各項生化測定,而血漿的SOD和MDA含量測定也采用相同的方法。1.4統計方法實驗數據以xˉ±sxˉ±s表示。采用ANOVA統計分析法分析,顯著性檢驗采用Students-NewmanKeul檢驗法。2結果2.1各組小鼠臟器相關活性的比較2顯示西紅花酸和西紅花苷-1都能明顯改變肝臟和腎臟SOD水平。肝臟SOD測定結果顯示,后4組都顯示SOD活性上升,5、6兩組的P<0.01,而7、8兩組為P<0.05。統計結果顯示,在中劑量和高劑量組中,西紅花酸與西紅花苷活性差異沒有顯著性;腎臟的測定結果表明,兩個成分的活性都隨著劑量的增加而逐漸增強,后4組SOD活性明顯強于空白組和維生素E組(P<0.01),而兩個藥物的低劑量組活性P<0.05。3個相同劑量的紅花酸與西紅花苷活性差異均沒有顯著性。2.2gsh-px活性西紅花酸和西紅花苷-1只明顯改變肝臟的GSH-Px活性(Fig3),并且只有5、6、7和8組的GSH-Px活性高于空白對照組和維生素E組(P<0.05)。在兩個劑量水平上,西紅花酸與西紅花苷活性差異沒有顯著性。2.3組差異顯著性比較西紅花酸和西紅花苷改變心臟和腎臟的TAOC值(Fig4),最后4組差異有顯著性(P<0.05)。同樣,在兩個劑量水平上,西紅花酸與西紅花苷活性差異沒有顯著性。此外,維生素E在這個模型中顯示出活性(P<0.05),而給藥組與陽性對照組的活性差異無顯著性。2.4降低mda活性只有第7組和第8組表現出降低血漿MDA含量的抗氧化活性,而第8組降低MDA活性更明顯(P<0.01),強于第7組(P<0.05)。見Fig5。3相同劑量的西牡丹花酸和西牡丹花苷-1對不同抗氧化活性的影響相對課題組前期體外抗氧化研究實驗結果,本實驗結果顯示,西紅花酸和西紅花苷-1在體內顯示出相對體外更強的抗氧化活性(與維生素E比較)。在所有抗氧化指標中,除了MDA測定結果外,相同劑量的西紅花酸和西紅花苷-1都顯示相同的活性,即相同劑量的西紅花酸和西紅花苷抗氧化活性差異無顯著性。西紅花酸和西紅花苷-1都具有一定的體內抗氧化能力,西紅花苷-1在體內水解后再吸收不會明顯改變這種成分