啤酒酵母葡聚糖制劑和維生素c組合對斑節對蝦生長和抗病力的影響

在水產養殖條件下，高密度繁殖所帶來的各種污染物的熱量和污染破壞了水產養殖動物的防御系統，增加了動物對疾病的感知。已發現有20多種病毒可以感染蝦類,而對付這些病毒至今尚沒有有效的方法,其它傳染性細菌病在蝦類養殖中也很常見。據最近的研究報導,應用免疫刺激物如β_1,3葡聚糖或維生素C來提高蝦類的抗病力是一條很具吸引力的途徑。通過口服β_1,3葡聚糖對蝦類具有免疫刺激效果。Rao在飼料中添加β_1,3葡聚糖增強了斑節對蝦對弧菌和SEMBV的抗病力。Liao發現每kg飼料添加0.5～1g的一種來源于絲狀真菌Schizophyllumcommuneβ_1,3葡聚糖,斑節對蝦攝食10和20d后對注射V.damsela攻毒的抵抗力增強。Song在蝦苗培育期用β_1,3葡聚糖浸泡而在蝦養殖期在飼料中添加β_1,3葡聚糖使斑節對蝦對V.vulnificus和WSBV的抵抗力增強。Verlhao研究了虹鱒飼料中添加酵母β_葡聚糖和維生素C的綜合免疫刺激效果,發現飼料維生素C和酵母β_葡聚糖以4g∶1g/kg飼料時顯著提高補體激活的旁路途徑和吞噬細胞的化學發光反應,并在接種疫苗后增加抗體的產生。Madsen則發現虹鱒攝食富含酵母β_葡聚糖和維生素C的飼料在暴發由Flavobacteriumpsychrophilum引起的虹鱒幼魚綜合癥(RTFS)時脊柱畸形程度減少,但這類研究在對蝦中尚未見報導。本研究的目的是在飼料中添加酵母β_葡聚糖制劑和維生素C的組合通過飼養和注射致病細菌或病毒做攻毒試驗以探討酵母β_葡聚糖和維生素C的組合對斑節對蝦生長和抗病力的效果。1材料和方法1.1可溶性動物群落啤酒酵母β_葡聚糖制劑:一種由廣東省農科院畜牧所水產研究室提供,商品名為“特免王”,主要成分為β_1,3葡聚糖和甘露聚糖;另一種為本研究室自制,參考文的步驟,啤酒酵母先采用次氯酸鈉氧化,然后用二甲亞砜抽提所制得的一種可溶性細胞壁β_1,3葡聚糖制劑(SBG),主要成分為β_1,3葡聚糖。維生素C采用多聚VC磷酸酯,商品名“三寶高穩C”,VC效價10%,惠州三寶生物化學科技有限公司生產。根據斑節對蝦的營養需要設計了5組飼料(組成見表1),采用雙螺桿擠壓機制成粒徑為1.2mm的顆粒,自然曬干,貯存于-15℃的冰箱中備用。1.2重復飼養體質量為2～3g左右的斑節對蝦苗70尾飼養在室外水泥池(3m×2m×1m)中,每天按體質量的5%分3次投喂飼料,每個試驗組設計2個重復,養殖期間每天充氣8h(0:00-8:00),試驗期間不換水。飼養時間為30d,30d后檢查每池的蝦數量并稱重,每池隨機抽取3尾蝦取血淋巴于5000r/min下離心10min,測定血淋巴比容,同時取上層血清用微量凱氏定氮法檢測蛋白質含量。全部數據采用單因素方差分析處理,若有顯著差異存在則用Duncans多重比較法確定組間差異。1.3尾蝦多次注射斑節蝦實踐飼養結束后,徹底清洗并用漂白粉將水泥池消毒,將池水加至30cm深,每池取20尾蝦,每尾蝦注射50μL海水活溶藻弧菌液(108CFU/mL);另取20尾蝦放于另一水泥池內,每尾蝦注射50μL出現斑節對蝦白斑綜合癥典型癥狀且處于瀕死狀態的病蝦勻漿病毒粒子濾過液;再取20尾蝦放于第3水泥池內,每尾蝦注射50μL生理鹽水。檢查24h內可能由于操作機械損傷而非感染至死的蝦,每組繼續投喂原來的實驗飼料,記錄7d內蝦的累計死亡情況,計算相對存活百分比(RPS)。RPS%=注射細菌或病毒的蝦存活率注射生理鹽水的蝦的存活率×100RΡS%=注射細菌或病毒的蝦存活率注射生理鹽水的蝦的存活率×1002.結果與討論2.1對不同試驗組飼料系數的影響斑節對蝦飼養30d后,其特定生長率、存活率和飼料系數見表2。由表2可知,特定生長率和存活率以SBG組、特免王組和高VC組顯著高于低VC組和對照組,但各試驗組之間以及低VC組和對照組之間沒有顯著差異。飼料系數則正好相反,以SBG組、特免王組和高VC組顯著高于低VC組和對照組,但各試驗組之間以及低VC組和對照組之間沒有顯著差異。由此可見,飼料中添加β_葡聚糖制劑以及高劑量VC有助于斑節對蝦的生長和存活,有利于提高飼料效率,使飼料系數降低,但低劑量的VC顯然對斑節對蝦的生長和存活在本試驗期間內沒有表現出有益效果。2.2血淋巴比容的檢測斑節對蝦攝食不同試驗飼料30d后,其血清蛋白質含量和血淋巴比容見表3。由表3可知,血清蛋白含量以特免王組、SBG組、高VC組和低VC組顯著高于對照組,特免王組、SBG組、高VC組和低VC組之間沒有顯著差異。血淋巴比容在各組之間無顯著差異。從以上數據可以認為,飼料中的VC對血清中的蛋白含量有顯著提高的作用,添加葡聚糖制劑對血清蛋白的含量沒有表現出協同效果。甲殼類的防御體系主要由兩部分組成,細胞防御包括血淋巴細胞和定居的吞噬細胞,形成小結以及包囊;體液防御包括酚氧化酶(PO)和酚氧化酶原(proPO)激活體系,殺菌素和凝集素。添加VC和葡聚糖制劑雖然使血清蛋白含量提高,但是否使酚氧化酶激活體系的活性增強尚待進一步的實驗驗證。2.3對斑節蝦葡聚糖飼料2d存活率結果見表1斑節對蝦攝食不同試驗飼料30d后分別注射弧菌或白斑病毒濾過液7d內的累計死亡率和相對存活率見表4。由表4可知,各試驗組在注射50μL弧菌液后,12h內的累計死亡率分別以對照組>低VC組>高VC組=特免王組>SBG組,相對存活率則正好相反,以對照組<低VC組<高VC組=特免王組<SBG組,但24h后,所有試驗組的累計死亡率均達100%,說明飼料中高含量的VC或添加β_葡聚糖制劑對注射弧菌這種急性的攻毒都只有有限的保護作用。攝食不同啤酒酵母β_葡聚糖制劑、不同含量VC磷酸酯飼料30d后注射斑節對蝦白斑病毒,72h內對照組和低VC組的累記死亡率已達100%,比特免王組、SBG組和高VC組要高得多。72h后,累計死亡率以高VC組>特免王組>SBG組,而相對存活率以高VC組<特免王組<β葡聚糖組,但特免王組和SBG組之間的差異不是很明顯。到168h,高VC組的累計死亡率已達98.3%,而特免王組和SBG組的累計死亡率也達71.7%和65.0%,可見飼料中高含量的VC或添加β_葡聚糖制劑對注射病毒這種急性的攻毒都也只有有限的保護作用,但飼料中高含量的VC或添加β_葡聚糖制劑的這種保護作用相對于對照來說是很顯著的。β_葡聚糖對斑節對蝦生長和抗病力的效果很可能是刺激血淋巴的結果,已證實蝦浸泡于MacroGard混懸液中時血淋巴產生更多的超氧游離基和過氧化氫。Sung也報道了相同的結果,用β_1,3葡聚糖浸泡處理斑節對蝦可加速體內V.vulnificus清除,增強酚氧化酶的活性和過氧化物的產生。3與高含量的vc磷酸酯配合使用對斑節對蝦抗病力的影響通過以上的結果我們可以認為,在飼料中添加啤酒酵母β_葡聚糖制劑對斑節對蝦的增重、存活率有顯著的提高,能顯著降低飼料系數,這種效果和添加高含量的VC磷酸酯的效果是相當的。飼料中添加VC磷酸酯能顯著提高斑節對蝦