青蒿素片的研發過程

姓名：XXX學號：...........專業：@@@@@@@@@@@@@2023/10/14

Contents1234研究歷史1實驗方案2臨床前研究3臨床實驗4政府審批5上市后研究6一、研究歷史

青蒿素的故事原來始于中國文化大革命和援越抗美戰爭時期。當年在越南戰爭的戰場上，由于瘧疾的流行，作戰雙方的士兵紛紛感染瘧疾，嚴重地影響了部隊戰斗力。抗氯喹的惡性瘧原蟲(Plasmodiumfalciparum)的出現更成為當時瘧疾防治的主要難題.1967年5月23日，在毛澤東主席和周恩來總理的指示下，一項具有國家機密性質、代號為“523項目”的計劃就此啟動了。項目短期的目標是要盡快研制出能在戰場上有效控制瘧疾的藥物，而它的長遠目標是通過篩選合成化合物和中草藥藥方與民間療法來研發出新的抗瘧藥物。1969年1月，屠呦呦被任命為北京中藥研究所523課題組的組長,領導對傳統中醫藥文獻和配方的搜尋與整理。

歷經380多次鼠瘧篩選，1971年10月取得中藥青蒿素篩選的成功。1972年從中藥青蒿素中分離得到抗瘧有效單體，命名為青蒿素，對鼠瘧、猴瘧的原蟲抑制率達到100%。

1973年經臨床研究取得與實驗室一致的結果，抗黃花蒿瘧新藥青蒿素由此誕生。

1981年10月在北京召開的由世界衛生組織主辦的“青蒿素”國際會議上，中國《青蒿素的化學研究》的發言，引起與會代表極大的興趣，并認為“這一新的發現更重要的意義是在于將為進一步設計合成新藥指出方向”。

1986年，青蒿素獲得新一類新藥證書，雙氫青蒿素也獲一類新藥證書。這些成果分別獲得國家發明獎和全國十大科技成就獎。

2011年9月23日，青蒿素的研究者屠呦呦獲得美國紐約拉斯克獎，這是中國科學家首次獲得這一國際醫學大獎。

2011年11月15日，中國中醫科學院在京舉行“2011年科技工作大會”。會上授予屠呦呦中國中醫科學院杰出貢獻獎，獎勵青蒿素研究團隊100萬元人民幣。

2012年7月4日，上海交通大學宣布，在世界上首次實現了抗瘧藥物——青蒿素的常規人工化學合成。

二、實驗方案方法一、CO2超臨界流體萃取法實驗步驟：

1、粉碎-裝料：將黃花蒿粉碎成中粉，裝入料筒中，在整體裝入萃取釜中。2、CO2超臨界流體萃取：CO2經熱交換器冷卻進入貯罐；冷CO2經壓縮機壓縮至20MPa，再經熱交換器加熱至50℃進入萃取釜中；兩萃取釜間歇交替工作，每個萃取釜萃取4個小時后切換，保證萃取液連續從萃取釜中抽出；萃取液先通過過濾器除去可能夾帶出的固體顆粒，然后經熱交換器加熱至60℃，進入一級分離釜，萃取液析出部分雜質后進入另一熱交換器，調節溫度至所需值，再進入二級分離釜析出青蒿素等溶質。分離釜采用兩組并聯，當一組解析溶質時，另一組放空取出提取物。3、硅膠柱凈化：從二級分離釜出來的CO2帶有少量的溶質和水分，經熱交換器將溫度調至預設值后進入硅膠柱。硅膠柱采用兩柱并聯操作，一個硅膠柱進行吸附操作時；另一個硅膠柱進行再生。凈化后的CO2經熱交換器進入貯罐，完成一次循環操作。4、補充新鮮CO2：由于萃取釜卸料、分離釜放料以及硅膠柱再生等過程都需要放空，不可避免的會損失，故需要不斷補充。工藝流程工藝原理：

利用CO2超臨界流體的可調溶解性能，選擇性地提取青蒿素。通過硅膠柱色譜，進一步提高青蒿素的收率。方法二、大孔吸附樹脂法實驗步驟：

1.滲漉提取：黃花蒿粗粉加60%乙醇室溫浸泡6小時，滲漉，收集滲漉液。

2.大孔吸附樹脂分離：滲漉液經活性炭脫色，抽濾，濾液上ADS-17樹脂柱，水洗后用30%的乙醇洗脫，收集洗脫液。3.回收溶劑-重結晶：將洗脫液于60℃減壓濃縮，回收乙醇，靜置得青蒿素粗品，再經70%的乙醇重結晶，制得青蒿素。工藝原理：

青蒿素在大孔吸附樹脂的表面吸附和氫鍵吸附的作用下，吸附量大，易解析。三、臨床前研究藥理學毒理學藥代動力學藥理學1（1）抗瘧作用實驗證明：青蒿素對紅細胞內期瘧原蟲無性體有較強殺滅作用。對抗氯喹和奎寧的瘧原蟲有良好的療效。但對原發性和繼發性紅細胞外期及蚊體內的孢子增殖無影響。本品的抗瘧作用與葉酸代謝無關，也不像氯喹等抗瘧藥那樣干擾DNA的復制，其抗瘧作用主要是破壞瘧原蟲滋養體的膜系結構，干擾瘧原蟲的表膜-線粒體功能，使原蟲體無法攝取宿主紅細胞內的營養物質而發生腫脹、死亡，并不斷排出體外。青蒿素被瘧原蟲體內的鐵催化,其結構中的過氧橋裂解,產生自由基,與瘧原蟲蛋白發生絡合,形成共價鍵,使瘧原蟲蛋白失去功能,從而死亡李銳等認為青蒿素及其衍生物通過抑制細胞色素氧化酶,干擾原蟲膜系線粒體功能,阻止原蟲消化酶分解宿主的血紅蛋白成為氨基酸,使瘧原蟲無法得到供給自身蛋白質的原料,而迅速形成自噬泡,導致蟲體瓦解死亡。Steven等認為青蒿素與原蟲內的氯化高鐵血紅素反應導致副產物活性氧的產生,而活性氧的產生導致瘧原蟲膜系統的損害,從而原蟲代謝功能紊亂直至死亡。藥理學1（2）抗癌作用青蒿素可顯著降低急性白血病K562細胞端粒酶活性，抑制癌細胞生長和誘導細胞凋亡。端粒酶是一種特殊的核糖核蛋白多聚酶。端粒酶活性增加與腫瘤的發生、發展密切相關，大量研究資料表明，造血系統的惡性腫瘤均表現高端粒酶活性，其活性的高低對判斷白血病的療效、惡性程度、預后及復發均有重要的臨床意義。故抑制端粒酶的活性，不僅可增加腫瘤細胞凋亡，還可增加其他化療物質的療效。（3）抗吸血蟲作用（4）抗心律失常（5）增加免疫功能毒理學22.1小鼠的急性毒性

用體重18~22克的小鼠分組.以不同劑量的青篙素混懸液一次灌胃,記錄三天內死亡數.按Burn一Karbe氏法計算半數致死量,LD50=4530士672.7mg/kg。不同種類動物大劑量單次注射雙氫青蒿素的急性癥狀有：動物懶動、發抖，運動失調，呼吸緩慢，感覺遲鈍及反正反應消失。鴿子、豚鼠、兔、貓及狗可表現出痙攣性和強直性的驚厥，死前均有頻繁抽搐，先呼吸停止然后心跳停止。鴿子對雙氫青蒿素的毒性對敏感，大鼠最耐受。存活動物一般在10h~24h后逐漸恢復正常。毒理學22.2大白鼠的長期毒性

取體重80~I00克的大鼠32只,分為四組,雌雄配搭均勻.第一組大劑量為1000mg/kg,第二組為500mg/kg,第三組為250mg/kg,第四組為對照.每天給藥一次,連續14天.給藥前稱體重.測心電、血像.給藥期間,每三天稱體重一次.觀察一般表現及食欲.最后一次給藥后1~2小時內測心電.停藥24小時測血像后各組處死一半.取心、肝、脾、肺、肺、腎、腦、胃作病理切片檢查.其余動物一周后再處死作病理切片檢查,結果指出:三個實驗組與對照組的體重增長率是一致的.說明青篙素對大鼠的食欲和生長沒有影響.且心電、血像和各組的病理學檢查,均無異常改變.毒理學22.2恒河猴的長期毒性

恒河猴肌注青蒿素溶液亞急性毒性病理學研究表明：恒河猴連續14天肌注青蒿素溶液，按每天肌注24mg/kg、48mg/kg、96mg/kg、192mg/kg，分別為小、中、大、特大劑量組。于停藥后3天，發現96mg/kg、192mg/kg組引起多種臟器組織的損傷。表現為骨髓紅系和粒系細胞減少、成熟發育障礙、巨核細胞增生、心肌細胞變性或灶性壞死（以超微結構病變為主）；肝、腎營養不良性改變；淋巴組織萎縮；注射部位損傷等。其中以骨髓和心肌損傷較為明顯。停藥后35天，上述病變明顯減輕或消失。表明青蒿素的毒副作用是可逆的。每天肌注青蒿素24mg/kg、48mg/kg，為輕微中毒劑量；96mg/kg為嚴重中毒劑量；192mg/kg為致死劑量。致死原因為嚴重心肌損傷。毒理學22.3生殖毒性

大鼠與孕后第1~6天（d1~6）灌胃青蒿素1/25LD50值（223mg/kg），幾乎全部胎鼠發育正常；孕d6~8給藥,6.1%的胎鼠出現臍疝，其余發育正常；孕d9~11給藥，胎鼠全部被吸收。以小鼠進行實驗，也有類似的結果。小鼠與孕d6~15后每天肌注蒿甲醚5.4mg/kg，對胎鼠的生長發育無明顯影響，肌注10.7mg/kg和21.4mg/kg則分別有30%和100%胚胎被吸收。大鼠和兔在相應的低劑量時對胎仔生長發育亦無影響，在相應高劑量時被胚胎大量吸收。由以上結果可知：青蒿素及其衍生物有較明顯的胚胎毒性作用，在較小劑量時即可引起胚胎吸收，對存活動物致畸性較小或無致畸性。且在不同孕期給藥時對胚胎的作用亦不同。毒藥理學22.4致突變作用經Ames試驗、微核試驗未發現青蒿素具有誘變性。經Ames試驗、微核試驗及哺乳動物培養細胞染色體畸變試驗均未發現青蒿素有致突變作用。藥代動力學3中國青蒿素實驗小組經大鼠實驗表明，大鼠口服青蒿素150mg/kg后，吸收迅速完全，但血藥濃度低，維持時間短，顯示有首過效應。靜脈注射青蒿素混懸水溶液150mg/kg，血藥時程符合二室模型，t?β為30min，Vd為4.1L/kg，表明青蒿素在體內分布廣泛，消除迅速。3.1大鼠的藥代動力學藥代動力學3健康犬10只，隨機分為2組，一組采用口服方式連續給藥5日，每日1000mg，另一組采用靜脈注射方式連續給藥5日，每日60mg。各組分別于第1日、第5日采血，應用液相色譜-質譜聯用方法測定血漿中青蒿素的含量并計算主要藥動學參數。口服組達峰濃度（Cmax）和達峰時間（Tmax）為實測值。以半對數作圖法，由消除相末幾個濃度點計算消除速度常數k，并根據k計算t?。第一日口服給藥后Cmax為29.1±9.9ng/mL，Tmax為1.9±0.7h，t?為2.6±0.6h。連續5日口服給藥后血藥濃度已基本測不出，未求算藥動學參數。3.2健康犬的藥代動力學藥代動力學3靜注組以血藥濃度的對數對時間作圖得直線，由直線斜率和截距求出初始濃度C0和消除速度常數k，并計算t?。第1日靜注給藥后的t?為0.9±0.7h。靜注連續給藥5日后的t?為0.2±0.04h。口服第口服第5日組給藥后血藥濃度明顯低于單次給藥組，靜注組第5日給藥后t?無明顯差別。結果表明多劑量口服給藥后，血藥濃度呈現顯著的時間依賴性降低，而靜注給藥未發現類似現象，表明自身誘導代謝主要影響了首過代謝過程，此外該藥在犬體內的口服生物利用度很低，口服給藥的