1第六章 雜質與安全檢查2生物藥物分析第一章 緒論第二章 酶分析法第三章 免疫分析法第四章 高效液相色譜法及其應用第五章 生物檢定法第六章 雜質與安全檢查第七章 氨基酸、多肽、蛋白質和酶類藥品檢查第八章 糖類、脂類和核酸類藥品檢驗第九章 基因工程藥物檢驗第六章 雜質與安全檢查第一節第二節第三節第四節第五節第六節第七節第八節概述藥物中一般雜質的檢查方法特殊雜質及其檢查方法熱原檢查法毒性試驗法刺激性試驗過敏試驗降壓物質檢查法3第六章 雜質與安全檢查4第一節第二節第三節概述藥物中一般雜質的檢查方法特殊雜質及其檢查方法主要學習目的：51、掌握藥物的純度概念和一般雜質的概念；2、掌握藥物中雜質限量計算方法；3、熟悉氯化物、重金屬、砷鹽等雜質檢查的原理與注意點；4、理解特殊雜質檢查方法的選擇基礎與應用。第一節 概述6一、藥物的純度要求二、雜質的來源與種類三、雜質的限量檢查—

藥物的純度要求1.藥物的純度指藥物純凈的程度。是反映藥品質量的一項重要指標。7有毒副作用的物質本身無毒副作用，但影響藥物的穩定性和療效的物質本身無毒副作用，也不影響藥物的穩定性和療效，但影響藥物的科學管理的物質82

藥物的雜質藥物的雜質9為保證藥品質量，確保用藥安全、有效，必須檢查雜質，控制藥物純度.3

評價10綜合考慮藥物的外觀性狀、理化常數、雜質檢查和含量測定。雜質檢查

是藥物純度評價的一項重要內容。4

藥物純度與試劑純度藥物純度—又稱為藥用規格主要從用藥安全、有效和對藥物穩定性等方面考慮。只有合格品和不合格品化學試劑的純度—是從雜質可能引起的化學變化對使用的影響以及試劑的使用范圍和使用目的加以規定,不考慮雜質對生物體的生理作用及毒副作用。11藥物的純度考慮雜質的生理作用，藥品只有兩個等級：合格或不合格。化學試劑有很多等級，如基準試劑、優級純（GR）、分析純（AR）、化學純（CP）、色譜純、光譜純。12例如：硫酸鋇（BaSO4）試劑規格藥用規格對可溶性鋇鹽不做檢查。如存在可溶性鋇鹽則導致醫療事故。檢查：酸溶性鋇鹽、重金屬、砷鹽等。13例.臨床所用藥物的純度與化學品及試劑純度的主要區別是所含雜質的生理效應不同所含有效成分的量不同所含雜質的絕對量不同化學性質及化學反應速度不同所含有效成分的生理效應不同14雜質來源藥物生產過程引入藥物貯存期間引入15二、雜質的來源與種類1.生產過程中引入16原料、反應中間體及副產物試劑、溶劑、催化劑類生產中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質在藥物生產過程中引入雜質的途徑為原料不純或部分未反應完全的原料造成合成過程中產生的中間體或副產物分離不凈造成需加入的各種試劑產生吸附，共沉淀生成混晶等造成所用金屬器皿及裝置等引入雜質172.貯藏過程中產生18水解、氧化、分解、異構化、晶形轉變、聚合、潮解和發霉等19注射用脊髓灰質炎疫苗是一種滅活病毒；口服脊髓灰質炎疫苗是一種減毒活病毒。卡介苗：采用無毒牛型結核桿菌制成，安全有效。嬰兒出生后按計劃接種，是預防結核病的一項可

靠措施。傷寒疫苗是一種滅活的細菌。麻疹和其它典型“兒童期”疾病（如流行性腮腺炎、水痘和風疹的疫苗）是減毒活病毒。白喉和破傷風疫苗包含了“滅活的”毒素。流感疫苗往往包含滅活的“裂解了的”病毒（病毒外殼的蛋白質已被溶劑溶為液體）。常見疫苗的類型1、按來源可分為2類一般雜質——指在自然界中分布廣泛,在多種藥物的生產或貯存過程中容易引入的雜質.特殊雜質——指在特定藥物的生產或貯存過程中,根據藥物的性質、生產方法和工藝條件,有可能引入的雜質.20雜質的種類一般雜質：21如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘渣等。一般雜質其檢查方法收載在中國藥典的附錄中。特殊雜質：22指某一個或某一類藥物的生產或貯藏過程中引入的雜質，如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質檢查方法收載在中國藥典正文各藥品的質量標準中。23中國藥典（1995年版）中規定的一般雜質檢查中不包括的項目是硫酸鹽檢查氯化物檢查溶出度檢查重金屬檢查砷鹽檢查2、按毒性可分為2類24信號雜質——指本身一般無害,但其含量多少可反映藥物純度水平,指示生產工藝是否合理。如：氯化物、硫酸鹽等.有害雜質——對人體有毒害的雜質.在質量標準中嚴加控制,以保證用藥安全.如：重金屬、砷鹽、氰化物、氟化物等.三 雜質限量檢查251

雜質限量——在不影響藥物療效、穩定性及不發生毒性的前提下,藥物中所含雜質的最大允許量.限量表示方法:百分表示(%)百萬分表示(ppm)雜質量

≤ 雜質限量

＜ 雜質量26藥品合格藥品不合格2

雜質檢查方法(限量檢查法)三種檢查方法含量測定法靈敏度法標準對照法27（1）對照法限量檢查法（Limit

Test）特點：不需知道雜質的準確含量28（2）靈敏度法29系指在供試品溶液中加入試劑，在一定反應條件下，不得有正反應出現。特點：不需對照品（3）含量測定法：30測定雜質的絕對含量，如測定吸收度、pH值等。特點：準確測定雜質的量，不需對照品3

限量計算公式（對照法）注意:①單位是否統一②供試品是否有稀釋③表示方法%或ppm31例1. 對乙酰氨基酚中氯化鈉的檢查對照品溶液: 標準NaCl溶液(10μgCl/ml)方法：取5.0ml

同法操作比較,濁度不得更大.計算：氯化物限量是多少(%)？32例2. 葡萄糖中重金屬的檢查規定：含重金屬≯(不超過)百萬分之五(5ppm)計算：應取標準鉛溶液(10μgPb/ml)多少ml？33一、氯化物檢查法二、硫酸鹽檢查法三、鐵鹽檢查法

四、重金屬檢查法五、砷鹽檢查法六、溶液澄清度檢查法七、溶液顏色檢查法

八、易炭化物檢查法

九、熾灼殘渣檢查法

十、干燥失重測定法第二節 一般雜質檢查34一、氯化物檢查法（信號雜質）原理：利用氯化物在硝酸酸性條件下與硝酸銀反應,生成氯化銀白色渾濁液,與一定量標準氯化鈉溶液在相同條件下產生的氯化銀渾濁程度比較,濁度不得更大.H+Cl-+Ag+

AgCl35注意事項36平行試驗

樣品管與對照管要平行操作；加稀硝酸的目的A、避免產生碳酸銀、氧化銀、磷酸銀沉淀的干擾；B、且加速氯化銀混濁生成產生較好乳濁;C、50ml供試液含稀硝酸10mL;

3）氯化物的最適檢測濃度范圍為50ml供試液中含0.05~0.08mg的Cl

。例

1.

中國藥典

（

2000

年版）

規定，檢查氯化物 雜質時，一般取用標準氯化鈉溶液（10μgCl－/ml）5～8ml的原因是（D）使檢查反應完全藥物中含氯化物的量均在此范圍加速反應所產生的濁度梯度明顯避免干擾37例2.采用硝酸銀試液檢查氯化物時，加入硝酸使溶液酸化的目的是（ABCDE）A．加速生成氯化銀渾濁反應

B．消除某些弱酸鹽的干擾

C．消除碳酸鹽干擾

D．消除磷酸鹽干擾

E．避免氧化銀沉淀生成38二、硫酸鹽檢查法（信號雜質）（一）原理對照法藥物中微量的硫酸鹽在稀鹽酸酸性條件下與氯化鋇反應，生成硫酸鋇微粒顯白色渾濁，與一定量標準硫酸鉀溶液（100ugSO4/ml）在相同條件下產生硫酸鋇渾濁程度比較，判定供試品硫酸鹽是否符合限量規定。（二）測定條件40反應需在鹽酸酸性條件下進行鹽酸可防止碳酸鋇或磷酸鋇等沉淀生成，影響比濁。但酸度過大可使硫酸鋇溶解，50ml供試溶液中含稀鹽酸2ml為宜。比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。三、鐵鹽檢查法41（一）硫氰酸鹽法（二）巰基醋酸法但試劑較貴）（靈敏度較高，（一）硫氰酸鹽法ChP（2005）1.原理對照法討論43標準鐵溶液——硫酸鐵銨(含硫酸)濃度10

μgFe/ml最佳比色濃度儀器分析線性范圍5~

90μgFe/50ml目視比色濃度范圍10~50μgFe/50ml標準鐵溶液中硫酸作用——防止鐵鹽水解鹽酸酸性反應條件——防止Fe3+的水解加過量硫氰酸銨，使反應向正反應方向進行加過硫酸銨：可氧化Fe2+為Fe3+，同時可防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。檢查Fe2+和Fe3+44討論四、重金屬檢查法45（一）重金屬的概念在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用呈色的金屬.如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、As、Ni、Co、Zn等.重金屬存在影響藥物的穩定性及安全性.鉛在生產中容易引入，易在體內積蓄中毒，以Pb為代表.一、硫代乙酰胺法適用于溶于水、稀酸、乙醇的藥物，最常用方法.二、微孔濾膜法.適用于重金屬限量低(2-5μg)藥物.46（二）重金屬鹽檢查方法以鉛為代表一、硫代乙酰胺法在實驗條件下供試液澄清、無色,對檢查無干擾或經處理后對檢查無干擾的藥物.1.原理47討論①標準鉛溶液濃度②硫代乙酰胺試液③溶液的pH④供試品溶液有顏色時的處理⑤干擾物的排除方法48二、微孔濾膜法49當重金屬含量低時, 在比色管中難于目視觀察,采用本法。本法適用于重金屬限量低的藥物(重金屬限量2-5μg)。原理：50重金屬限量低時，用納氏比色管難以觀察，用微孔濾膜濾過，重金屬硫化物沉積于微孔濾

膜上形成色斑，與一定量標準鉛溶液同法處理

后產生的色斑比較，確定重金屬是否超過限量。該法可提高檢查靈敏度。(一)古蔡氏法（Gutzeit）1.原理：利用金屬鋅與酸作用產生新生態的氫，與藥物中微量砷鹽反應生成具揮發性的砷化氫,遇溴化汞試紙產生黃色至棕色的砷斑,與同條件下一定量標準砷溶液所生成的砷斑比較,判斷砷鹽的含量.51五、砷鹽檢查法反應式如下：522.操作1）裝置：檢砷瓶：砷化氫發生瓶A導氣管C配套具孔塞DE533.討論1)試劑的作用a.KI的作用——還原劑As5+→As3+

增大AsH3的生成速度b.酸性SnCl2的作用還原劑Ⅰ.將五價砷還原為三價砷(As5+→As3+)54b.酸性SnCl2的作用55碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應中生成的Zn2+能形成穩定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應不斷進行；氯化亞錫與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，使氫氣均勻而連續地發生；可抑制微量Sb的干擾，在實驗條件下，100μgSb存在不干擾。c.PbAc2棉花的作用(60-80mm)——排除硫化物的干擾(1mgS2-)56d.HgBr2試紙的作用57HgBr2試紙較HgCl2試紙靈敏;但生成砷斑不夠穩定;保持干燥避光,立即比較。(二)

二乙基二硫代氨基甲酸銀法

(Ag-DDC法)silver

diethyldithiocarbamate砷鹽的限量檢查微量砷鹽的含量測定.58原理：

金屬鋅與酸作用產生新生態氫，與微量砷鹽反應生成具揮發性的砷化氫，還原二乙基二硫代氨基甲酸銀，產生紅色膠態銀，同時在相同條件下使一定量標準砷溶液呈色，用目視比色法或在520nm波長處測定吸光度進行比較。59原理第一步：同古蔡氏法生成砷化氫第二步：砷化氫還原Ag-DDC的吡啶溶液,產生紅色的膠態銀,與同條件下一定量標準砷溶液所呈顏色用目視比色法或在

510nm波長處測定吸收度進行比較判斷.60一、氯化物檢查法二、硫酸鹽檢查法三、鐵鹽檢查法

四、重金屬檢查法五、砷鹽檢查法六、溶液澄清度檢查法七、溶液顏色檢查法

八、易炭化物檢查法

九、熾灼殘渣檢查法

十、干燥失重測定法第二節 一般雜質檢查61六、澄清度檢查法檢查藥物中的微量不溶性雜質，用作注射劑的原料藥一般應作此項檢查。62濁度標準液的配制63中國藥典規定用濁度標準液作為澄清度檢查的標準。濁度標準液的配制：是利用烏洛托品在偏酸性條件下

水解產生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色渾濁。判斷

藥典中規定的

“澄清

”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過0.5號濁度標準液。64溶劑：水、酸、堿、有機溶劑有機酸的堿金屬鹽類藥物強調用“新沸過的冷水”七、溶液顏色檢查法65控制藥物中有色雜質限量的方法。第一法 目視比色法第二法 分光光度法

單一波長八、易炭化物檢查法66檢查藥物中遇H2SO4易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質稱為易碳化物。方法（1種）：H2SO4炭化后與規定標準比色液比較，不得更深。九、熾灼殘渣檢查法67檢查有機藥物或揮發性無機藥物中混入的無機雜質(金屬氧化物或無機鹽類)。原理樣品炭化后+H2SO4濕潤→700～800℃熾灼至恒重→熾灼殘渣（硫酸灰分）限量一般為0.1%～0.2%

。十、干燥失重測定法68干燥失重是指藥物在規定條件下經干燥后所減失的重量，主要是水分，也包括其它揮發性物質。測定方法：（一）常壓恒溫干燥法69適用于受熱較穩定的藥物。干燥溫度一般為105℃。干燥失重：供試品連續兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下即達到恒重，干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均應在規定條件下繼續干燥1h后進行。（二）減壓干燥法70適用于熔點低，受熱不穩定或水分難趕除的藥物。除另有規定外，壓力應在2.67kPa

（

20mmHg

）以下，溫度60℃。（三）干燥劑干燥法適用于受熱易分解或揮發的供試品。干燥劑：硅膠、濃硫酸、P2O5

。（四）熱分析法71在程序控制溫度的情況下,測定物質的物理、化學變化與溫度關系的一類儀器分析方法.研究其受熱過程所發生的晶型轉變、熔融、升華、吸附等物理變化和脫水、熱分解、氧化還原等化學變化，對物質進行物理常數（如熔點和沸

點）的確定、鑒別和純度檢查的方法。包括熱重分析法差示熱分析法差示掃描量熱法1.

熱重法（TGA）熱重法是在程序控制溫度下，測量物質質量與溫度關系的一種技術。記錄質量變化對溫度的關系曲線即熱重曲線。熱重曲線的縱坐標為質量(m)，橫坐標為溫度(T)或時間(t)。72m73特點：準確測量物質的質量變化及變化速度、樣品用量少、速度快本法適用于藥物結晶水的測定和貴重藥物或在空氣中極易氧化藥物的干燥失重分析。742.

差熱分析法（DTA）差熱分析法是在程序控制溫度下，測量待測物質和參比物之間的溫度差（△T）與溫度(或時間)之間的關系的一種技術。75差熱分析曲線記錄的縱坐標為樣品與參比物的溫度差(

T)，

T與熱容量差

(CR—Cs)成正比，橫坐標為溫度。76△T77本法可鑒別藥物或其多晶形，可78檢查藥物的純度。3.

差示掃描量熱法（DSC）差示掃描量熱法是在程序控制溫度下，測量輸給待測物質和參比物的能量差與溫度(或時間)關系的一種技術。7980本法可鑒別藥物或其多晶形、純度81檢查以及熔點和水分等的測定。第三節 特殊雜質的檢查方法82特殊雜質：是指在該藥物生產和儲藏過程中，根據其生產方法、工藝條件及藥物本身結構性質可能引入的特有雜質。第三節特殊雜質檢查方法83一、利用藥物和雜質在物理性質上的差異（一）臭味及揮發性的差異（二）顏色的差異（三）溶解行為的差異（四）旋光性質的差異（五）對光吸收性質的差異84紫外分光光度法原子吸收分光光度法紅外分光光度法熒光分析法薄層色譜法紙色譜法高效液相色譜法氣相色譜法85（六）吸附或分配性質的差異二、利用藥物和雜質在化學性質上的差異（一）酸堿性的差異（二）氧化還原性的差異（三）雜質與一定試劑反應產生沉淀（四）雜質與一定試劑反應產生顏色（五）雜質與一定試劑反應產生氣體（六）藥物經有機破壞后檢查雜質86課堂小練習：練習1

藥物中氯化物雜質檢查，是使該雜質在酸性溶液中與硝酸銀作用生成氯化物渾濁，所用的稀酸是（

）A.硫酸C.鹽酸E.磷酸B.硝酸D.醋酸872：藥物中硫酸鹽檢查時，所用的標準對照液是（

）標準氯化鋇標準醋酸鉛溶液標準硝酸銀溶液標準硫酸鉀溶液以上都不對883.