涉縣夏季正常人群和發(fā)作樣病人中蓋塔病毒感染狀況調(diào)查

昆蟲病毒有很多種類和分布。它以吸收血液為手段，通過動(dòng)物和人類之間的接觸傳播。病毒學(xué)分類中包括14個(gè)科,其中與人畜疾病傳播密切相關(guān)的主要是被膜病毒科甲病毒屬、黃病毒科黃病毒屬、布尼安病毒科和呼腸病毒科。自上個(gè)世紀(jì)90年代以來,我國陸續(xù)監(jiān)測到多株甲病毒屬蟲媒病毒,對(duì)甲病毒的研究不斷有許多新的發(fā)現(xiàn)。蓋塔病毒(GETV,GetahVirus)屬于被膜病毒科甲病毒屬蟲媒病毒,作為甲病毒屬成員之一,分離時(shí)間最早,于1964年在海南首次分離到第1株GETV(M1株),但直到1992年才在美國疾病預(yù)防控制中心得到最后鑒定,在我國甲組蟲媒病毒研究中意義重大。2002年,在河北省涉縣采集的蚊標(biāo)本中,得到13株具有相同細(xì)胞病變特征的分離物,其中HB0215-3和HB0234兩株病毒經(jīng)過系統(tǒng)鑒定為GETV,這是我國分離的第2和第3株GETV,為我國內(nèi)陸地區(qū)和北方地區(qū)首次分離的GETV。GETV對(duì)人和動(dòng)物感染狀況,目前仍不十分清楚。為了解GETV是否感染人類,感染率如何,感染后是否發(fā)病以及臨床表現(xiàn)如何,在GETV分離標(biāo)本采集地涉縣,我們分別于分離病毒的當(dāng)年(2002年夏季)采集了部分正常人群血清,和2008年夏季采集了部分發(fā)燒樣病人血清,進(jìn)行GETVIgM抗體和IgG抗體篩查,并對(duì)所有觀察對(duì)象進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,現(xiàn)將抗體篩查和流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果分析如下。1材料和方法1.1調(diào)查和收集血標(biāo)本我中心于2002年夏季采集蚊標(biāo)本,同時(shí)開展正常人群流行病學(xué)調(diào)查并收集部分正常人群血標(biāo)本,采集地點(diǎn)為涉縣各鄉(xiāng)村。2008年夏季開展對(duì)發(fā)燒樣病人流行病學(xué)調(diào)查同時(shí)收集其血標(biāo)本,調(diào)查和收集地點(diǎn)包括縣醫(yī)院和各個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院。采集靜脈全血,及時(shí)分離血清,-20℃凍存?zhèn)錂z。1.2測試指標(biāo)正常人群檢測GETVIgM和IgG抗體;發(fā)燒樣病人檢測GETVIgM抗體。1.3檢測方法1.3.1抗體酶活性測定具體方法為抗體捕捉ELISA方法檢測GETVIgM抗體。具體操作步驟包括包被抗人IgMμ鏈抗體,4℃保濕過夜,洗板后加稀釋待檢血清,37℃保濕溫育,洗板后加單克隆抗體酶標(biāo)結(jié)合物,37℃再次溫育,洗板后37℃避光顯色,最后測定OD值,判讀結(jié)果。包被液為PH9.6、0.05M碳酸鹽緩沖液,洗滌液為含0.5%吐溫-20生理鹽水,底物緩沖液為PH5.0檸檬酸磷酸鹽緩沖液,封閉液為含10%胎牛血清洗滌液,終止液為2M硫酸,底物為過氧化氫和鄰苯二胺,酶標(biāo)儀選取490nm測定OD值,判讀標(biāo)準(zhǔn):(待檢血清OD值/陰性血清OD值)≥2.1為陽性,陰性血清OD值<0.05時(shí)按0.05計(jì)算。1.3.2etv產(chǎn)物的檢測具體方法為間接ELISA方法檢測GETVIgG抗體。具體操作步驟包括包被GETV抗原,4℃保濕過夜,洗板后加稀釋待檢血清,37℃保濕溫育,洗板后加酶標(biāo)記抗人IgG抗抗體,37℃保濕溫育,洗板后37℃避光顯色。實(shí)驗(yàn)使用的包被液、洗滌液、底物緩沖液、終止液、底物及檢測條件和結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)與IgM抗體檢測都相同。1.3.3用包被液液液膜凍存將HB0215-3和HB0234兩株病毒接種到BHK-21細(xì)胞,病變收獲后凍存,經(jīng)病毒滴定、熱滅活后,以10-1用包被液稀釋后1∶100使用。2結(jié)果2.1發(fā)病時(shí)間及血清采集情況正常人群采血時(shí)間為2002年7、8、9月,采血數(shù)量為300份,男女比例為137∶163。發(fā)燒樣病人血標(biāo)本采集時(shí)間為2008年夏季7、8、9、10月份,共采集血清317份。其中7月上、中、下旬各23份、15份、15份;8月上、中、下旬各47份、41份、35份;9月上、中、下旬各30份、54份、53份;10月上旬4份。2.2年齡及性別分布正常人群年齡范圍為1～30歲,分為6個(gè)年齡組,1歲～,5歲～,10歲～,15歲～,20歲～,25～30歲,每個(gè)年齡組數(shù)量各50份。發(fā)燒樣病人年齡范圍1～86歲,其中1歲～組18例,11歲～組30例,21歲～組40例,31歲～組50例,41歲～組59例,51歲～組64例,61歲～組35例,71～86歲組21例。2.3熱點(diǎn)難度檢測情況正常人群分布于涉縣3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的4個(gè)村,4個(gè)村分別采集102份、89份、84份和25份血清,其中分離到GETV的2個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)分別采集114份和84份血清。317例發(fā)燒樣病人來自全縣17個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)119個(gè)行政村,占全縣行政村總數(shù)的38.64%;就診于全縣14所醫(yī)院,其中涉縣縣醫(yī)院就診100例(占31.55%),分離到GETV的2個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院分別為64例(占20.19%)和59例(占18.61%),4所鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院病例數(shù)在15～27例之間(4.73%～8.52%),有8所衛(wèi)生院就診數(shù)在10例以下。2.4感染及并發(fā)癥317例發(fā)燒樣病人中,上呼吸道感染最多,為89例,(急性)扁桃體炎34例,肺炎32例,咽炎及咽喉炎24例,腹瀉17例,發(fā)熱及發(fā)熱待查15例,感冒12例,(急性)腎盂腎炎6例,感染性發(fā)熱、泌尿系感染各5例,鼻炎、腸炎、(急性)菌痢、闌尾炎、支氣管炎各4例,腹膜炎、感染性腹瀉、咳嗽、原發(fā)性肝炎、胃炎、乙型腦炎各3例,布病、膽結(jié)石、風(fēng)濕熱、急性腸炎、頭痛、膝關(guān)節(jié)炎、中暑或血小板減少性紫癜各2例,病毒性心肌炎、單純皰疹病毒性腦炎、腸梗阻、惡性腫瘤、肺氣腫、分娩、關(guān)節(jié)炎、急性淋巴結(jié)炎、角膜炎、結(jié)核性胸膜炎、頸椎病、口腔潰瘍、囊腫切除、腦部循環(huán)缺血、腦出血、貧血、脂肪瘤術(shù)后、雙下肺炎、糖尿病上感、未痰檢、下肢外傷、心臟病、牙術(shù)后、腰椎間盤突出、葉胸梗塞、自發(fā)性腹膜炎各1例。2.5中草藥、設(shè)專類型病例選擇選擇為1位患者臨床診斷及治療效果明顯300份正常人群血清經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測,有1份IgM抗體陽性,陽性率為0.30%,年齡組為25～30歲,人員失訪;300份正常人群血清中有49份IgG抗體陽性,陽性率為16.30%,IgG抗體陽性血清也分布在大年齡組。317例發(fā)燒樣病人血清有2份IgM抗體陽性,陽性率為0.63%。1位患者臨床診斷為中暑合并血小板減少性紫癜,女性,55歲,臨床癥狀表現(xiàn)為低熱、乏力、頭暈、精神差、全身皮膚黏膜散在出血點(diǎn)、十指甲床變黑、下肢腫脹,白細(xì)胞為8.5×109/L,沒有肌炎或腦炎、皮疹、皮炎、關(guān)節(jié)炎等臨床癥狀,采用抗炎、補(bǔ)液和激素及中草藥綜合治療后,效果明顯。另1位患者臨床診斷為單純皰疹病毒性腦炎合并高血壓Ⅰ級(jí),女性,61歲,臨床表現(xiàn)為高熱、頭暈或昏睡、抽搐和驚厥及呼吸衰竭等,布氏征和克氏征陰性;白細(xì)胞為12.5×109/L,中性粒細(xì)胞為82.6%;腦脊液壓力增高為180mmHg,肉眼可見外觀清晰,有核細(xì)胞為260×109/L,主要為中性粒細(xì)胞,無淋巴細(xì)胞。病例經(jīng)抗病毒和抗感染以及脫水降顱壓等綜合治療后,效果明顯。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查,2位患者居住地都沒有發(fā)現(xiàn)類似病人,也沒有發(fā)現(xiàn)馬、牛、羊等動(dòng)物異常的疾病發(fā)生和流行。3與受試人群的關(guān)系研究結(jié)果顯示,甲病毒在我國廣泛存在。在自然界中甲病毒感染主要發(fā)生在脊椎動(dòng)物,某些表現(xiàn)為無癥狀、長期的、高滴度的病毒血癥,以利于病毒傳播,一旦傳播到人和家畜可引起疾病流行,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、皮炎、關(guān)節(jié)炎、肌炎或腦炎,嚴(yán)重的還可造成死亡。目前,GETV已在亞洲地區(qū)多個(gè)國家采集的標(biāo)本中被分離到,這些國家包括馬來西亞、日本、印度、巴基斯坦和俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)。日本研究表明,GETV可感染馬造成流行,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、流產(chǎn)、皮疹和后腿水腫等。但還沒有研究表明蓋塔病毒可感染人引起人的疾病和流行。該研究結(jié)果揭示,在河北省涉縣GETV循環(huán)地區(qū),人群對(duì)GETV是易感的,而且感染率較高,不僅對(duì)30歲以下人群易感,而且對(duì)高齡人群也易感,感染后還可引起發(fā)熱、病毒性腦炎或出現(xiàn)皮膚粘膜散在出血等疾病癥狀,以及頭暈、乏力、昏睡、抽搐等精神疾病癥狀。鑒于觀察數(shù)量有限,有待于更多的或進(jìn)一步調(diào)查研究。研究結(jié)果提供了GETV感染人和動(dòng)物以及疾病流行的重要數(shù)據(jù),具有非常重要的意義。研究表明,我國甲病毒的分離主要出現(xiàn)在南方和新疆等地,這次在我國北方地區(qū)分離到GETV并發(fā)現(xiàn)感染人類,而且感染率如此之高,具有非常重要的流行病學(xué)意義,為進(jìn)一步研究GETV的流行病學(xué)奠定了基礎(chǔ)和提供了寶貴的資料。以往海南和廣東11個(gè)地區(qū)GETV血清抗體檢測結(jié)果表明,廣東省未發(fā)現(xiàn)GETV抗體陽性者;海南省的6個(gè)地區(qū)中只有瓊中地區(qū)發(fā)現(xiàn)有GETV抗體陽性,陽性率分別為1.95%和2.37%。然而,此次對(duì)河北省涉縣人群GETV感染率調(diào)查中,正常人群的總感染率為16.67%,大大高于海南瓊中地區(qū)的感染率,結(jié)果具有重要的流行病學(xué)意義。從本研究結(jié)果來看,正常人群分布于