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文檔簡介

細胞內細胞因子染色法中山醫學院免疫學教研室編輯ppt實驗原理細胞因子跨膜分泌阻滯劑BFA，使新產生細胞因子滯留在細胞內；破膜劑使熒光抗體可以進入細胞內，并可以檢測相應細胞因子；流式細胞記數技術可以記數細胞，分析相應細胞的質和量。

編輯ppt方法特點1.單細胞水平計數

2.簡單、快捷、靈敏3.實驗結果客觀

編輯ppt實驗過程取淋巴細胞，刺激劑作用，37℃孵育1小時

參加BFA繼續培養5小時，用PBS洗滌。4%多聚甲醛室溫固定8分鐘后，PBS洗滌。編輯ppt重懸細胞，4℃放置幾小時或過夜。參加熒光標記抗體,4℃避光30分鐘，洗滌。緩沖液2重懸，流式細胞記數儀檢測。結果分析編輯ppt需要的緩沖液

1.1×PBS1升〔洗細胞用〕2.PBS+0.1%BSA+NaN30.05%500ml(用于染色后FACS前)3.PBS+BSA+NaN3+0.1%Saponin250ml(封閉染色后用)4.PBS+BSA+NaN3+Saponin+5%milk40ml編輯ppt流式細胞儀〔FLOWCYTOMETER，FCM〕對于處在流動狀態的細胞或生物顆粒進行多參數的快速的定量和分析的技術。編輯ppt檢測儀器：流式細胞記數儀編輯pptFCM結構組成局部液流系統;將細胞引導至檢測位點光學系統;產生并收集光學信號電子系統;將光信號轉換成電信號,使之數字化,輸入計算機并分析。細胞分選系統。編輯ppt編輯pptFLOWCELL(流動室)InjectorTip熒光信號聚焦的激光光束鞘液編輯ppt熒光信號每種熒光染料均有特定的激發波長,并激發后會有發射波長,流式細胞儀檢測的即是它特定的發射波長.利用各種不同波長的光學濾片來收集(檢測)這些光學信號編輯ppt熒光染料的特性激發波長(EXCITING)發射波長(EMISSION)編輯ppt激發光源與熒光標記物編輯pptFALSSensorLaser前向角散射光信號

編輯pptFALSSensor90LSSensorLaser側向角散射光信號編輯pptFluorescenceFALSSensorFluorescencedetector(FL1,FL2,FL3,FL4)編輯ppt檢測信號編輯ppt雙參數點圖編輯ppt標本制備標本來源:外周血、骨髓、培養細胞、組織(經尼龍網300目過濾)制成單細胞懸液標本濃度：106/ml-外周血白細胞計數，白血病人血標本需PBS稀釋抗凝劑：EDTA、肝素-假設抗凝不佳，有凝塊，那么不可檢測。溶血劑：保持細胞形態、紅細胞裂解完全。反響溫度：26~27oC，室溫避光。 編輯ppt結果示范1.560.258.230.26左圖顯示在抗原刺激前，CD4+和CD4-細胞中能產生IFN-γ的細胞占PBMC的0.2

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