年月曰公司培養基模擬灌裝試驗管理規定制定部門質量保證部制定人：年月日審核人副總經理：年月日副總經理：年月日副總經理：年月日副總經理：年月日主題內容與適用范圍本文件規定了培養基模擬灌裝試驗的程序和要求。本文件適用于培養基模擬灌裝試驗的管理。引用標準《藥品生產質量管理規范》 2010年修訂術語1培養基模擬灌裝試驗（以下簡稱試驗）：英文名稱MFMediaFillTest的英文縮寫，是用一種模擬替代物質來模擬整個無菌生產過程，在所得的模擬產品中加注培養基，再對所得的全部培養基樣品進行無菌培養。培養基模擬試驗是無菌生產工藝的驗證手段，是任何非最終無菌藥品生產必須進行的一項驗證。最差條件：導致工藝及產品失敗的概率高于正常工藝的條件或狀態，即標準操作規程范圍以內工藝的上限和下限。但這類最差條件不一定必然導致產品或工藝的不合格。4職責4.1生產部門負責試驗方案的制定、組織實施、試驗報告的撰寫、偏差的報告等。4.2質監中心負責試驗培養基的促生長試驗、灌裝物的培養等。4.3質量保證部負責試驗過程的監督管理。5管理規定5.1試驗目的：規范公司培養基模擬灌裝試驗，評估無菌原料藥和無菌制劑的生產工藝，為所生產產品無菌性的可信限度達到可接受的合格標準提供證據，證明其具有生產無菌原料藥和無菌制劑的能力并具有可重現性，符合現行 GMP要求和相關技術指南要求。5.2試驗要求5.2.1試驗頻次培養基模擬灌裝試驗的首次驗證，每班次應當連續進行 3次合格試驗。培養基模擬灌裝試驗按照生產工藝每班次半年進行1次，每次至少一批。單一規格品種再驗證周期為半年，正常生產的多規格品種每一規格再驗證周期為一年。每位無菌操作人員每年至少參加一次成功的培養基模擬灌裝試驗。空氣凈化系統、設備、生產工藝及人員重大變更后，應當重復進行培養基模擬灌裝試驗。試驗批量及容器的數量、裝量培養基灌裝批量及容器的數量、裝量應當足以保證評價的有效性。批量較小的產品，培養基灌裝的數量應當至少等于產品的批量。無菌原料藥容器數量不少于被模擬產品的實際包裝量，模擬物裝量盡量接近實際值，不超過容器體積的70%培養基裝量應能滿足微生物的生長；粉針制劑灌裝數量每種規格不少于5000支。培養基裝量不小于容器體積的10%模擬物不少于10mg/1ml培養基，具體加量根據溶解性試驗確定。灌裝體積的多少，應充分考慮容器倒轉或旋轉時，培養基能充分地接觸到容器和密封件的內表面，不能達到此要求時應適當增加灌裝體積。試驗染菌率的可接受度培養基模擬灌裝試驗的目標是零污染，發生任何微生物污染時，均應當進行調查。應當遵循以下要求：（一） 灌裝數量少于5000時，不得檢出污染品。（二） 灌裝數量在5000至10000時：有1支污染，需調查，可考慮重復試驗；有2支污染，需調查后，進行再驗證。（三） 灌裝數量超過10000時：有1支污染，需調查；有2支污染，需調查后，進行再驗證。試驗準備試驗開始前，除工藝驗證、本驗證外的其它驗證已完成且驗證合格。需完成的驗證主要有：廠房設施、設備、空調系統、水系統需經過確認和驗證；b 滅菌設備、除菌過濾器、直接接觸無菌藥品的設備、容器、管道、人員及無菌服的除菌滅菌效果經過驗證；c清潔方法、檢驗方法等經過驗證。試驗開始前，應確保環境已消毒、設備已清潔并滅菌，設施、設備、空調凈化系統已經在預期的狀態中受控運行。需建立的程序及無菌準備至少包括：a人流、物流、設備使用要求和參數的確定，無菌室消毒和維護的要求；b粒子和微生物監控的要求和頻率：包括懸浮粒子、沉降菌、浮游菌、廠房、設備表面、人員潔凈服外表面擦拭菌的采樣點、采樣頻次；c直接接觸無菌藥品的內包材滅菌：鋁桶、塑料袋、西林瓶、膠塞等；裝載容器、用品及用具火菌；無菌物料檢測儀器、物品火菌；蠕動泵、管道輸送火菌等。試驗開始前，明確對人員的要求，至少應包括：a參與試驗的相關人員應進行培訓，培訓內容根據實際需要確定：更衣和無菌操作知識培訓；取樣和無菌檢驗知識培訓；生產、檢驗、計量、設備等操作規程培訓；相關設備檢修人員的無菌設備維修知識培訓等；b應把所有參與試驗的操作者和主管人的姓名、員工參與次數以及相關事項記錄在批生產記錄里，包括進出次數等。操作者的操作任務應與正常灌裝實施期間的任務相同。年月曰試驗期間所有進入生產區域的人員(包含執行環境監控人員在內)都必須正確著裝。試驗的員工數量不得小于正常生產條件下該區域允許的最大員工數量。培養基和模擬培養物5.341 培養基的準備：胰蛋白酶酪胨大豆培養基(TSB。培養基的消毒：過濾滅菌(0?2umfilter) 或蒸汽滅菌；培養基的測試：促生長性能測試合格、無菌性測試合格；滅菌后的培養基在百級層流下用西林瓶進行取樣分裝，共分裝 30支：促生長性能試驗：取10支分裝好培養基的西林瓶接種枯草桿菌，接種量V100CFU接種后蓋塞、封口，在30?35C培養7天；另取10支接種白色念珠菌，接種量V100CFU接種后蓋塞、封口，在23?28r培養7天；7天內至少50%h述接種的西林瓶中出現明顯的所接種微生物的生長。無菌性試驗：取10支分裝好培養基的西林瓶分別加5ml符合無菌要求的水，蓋塞、封口后先在23?28C培養7天，然后在30?35C培養7天，應無任何微生物生長。模擬替代物的準備：惰性粉末a惰性粉末的選擇選材要求：無活性、易滅菌、易溶解、對培養基促進生長作用無副作用，易灌裝，流動性要好；種類：聚乙二醇系列(PEG6000,PEG8000),甘露醇，乳糖，碳酸鈉等；b惰性粉末滅菌：伽馬輻照滅菌(鉆60輻照滅菌，用量15?25kGy)或干熱滅菌；c惰性粉末測試：無菌性測試合格、無抑菌性測試合格，進行溶解性試驗。無菌性試驗：用無菌操作方式取樣，并按藥典規定的無菌檢驗法檢驗其無菌性。無抑菌性試驗：將惰性粉末按無菌操作方式分別取樣，用無菌蒸餾水制備成混懸液，加入培養基形成濃度分別為1.0%、2.5%、5.0%、10%(W/V)的樣品液，將不同濃度的各種樣品液分裝于4個試管中，在其中2支試管內接種V100CFU勺枯草桿菌，在另2支試管內接種V100CFU的白色念珠菌，對照品為空白培養基接種相同的枯草桿菌和白色念珠菌， 全部樣品、對照品在相適應的溫度下培養7天。7天內所有樣品、對照品試管內均應有明顯的微生物生長。可證明所使用惰性粉末對枯草桿菌和白色念珠菌均無抑制作用。溶解性試驗：惰性粉末在一定濃度時，在輕微的攪拌下應能溶解于溫度與培養溫度相當的培養基中，若不能溶解則應在略低于該濃度下重新試驗。一般使用濃度為 5.0%?10%試驗工藝范圍及步驟根據無菌產品的生產工藝，畫出工藝流程圖，選擇恰當的試驗范圍。通常情況下，無菌原料藥的無菌工藝模擬以物料溶解開始進行模擬，主要模擬溶解、過年月曰濾、結品、過濾、洗滌、干燥、無菌物料的轉移（必要時）、粉碎（顆粒）、微粉（必要時）、分裝、密封（軋蓋或熱合，根據工藝定）。粉針制劑主要模擬西林瓶、膠塞的洗滌、滅菌、分裝、加塞、壓蓋等工藝步驟。在無菌模擬過程中，可能需要對實際操作進行一些變更，這些變更應基于風險分析的原貝IJ，相對于正常的操作，這些變更不應對模擬的結果造成影響。方案的變更參見《變更管理程序》。最差條件設計5.361 模擬正常生產最差條件灌裝運行速度：最低灌裝速度或？的最低灌裝速度；手工灌裝；c最長時間的確認：培養基的灌裝時間一般要大于等于最長的生產時間； 延長完成滅菌至開始過程模擬的時間；灌裝的設備，儲罐，滅菌后原料，膠塞等儲存的最長時間；使用最長時間間隔的容量、設備、取樣工具；d模擬日常班次輪換，暫停/休息和更衣過程：2班或3班的變化，中午/晚飯的休息時間，進出的更衣等；模擬員工最疲備時的操作；對無菌人員連續工作強度進行模擬；e 設備的安裝和連接：培養基灌裝時設備的安裝和連接應和日常時設備的安裝連接一e致；更換氣體。5.3".2 模擬常規干預操作：裝量的核對、裝量的調節、物料的添加（橡塞，粉子等） ；瓶子堵塞，橡塞堵塞，粉子堵塞等的操作；模擬非常規干預操作：斷電、設備維修等情況；更換灌裝頭，更換或調節劑量盤，修理傳送帶等；驗證設計時，應綜合考慮生產線可能造成污染的各種因素， 盡量模擬這些可能的情況，盡可能模擬生產時的無菌操作；在無菌工藝模擬試驗中，每一次干擾都要記錄在批生產記錄里，指明干擾時間。試驗程序試驗方案根據確定的工藝范圍及步驟，在分裝模擬替代物后、密封或加塞前灌裝培養基，形成培養基模擬灌裝試驗方案。方案經審核批準后由生產單位組織實施。過程中如實記錄各步驟及產生的偏差，并形成培養基模擬灌裝試驗批生產記錄。取樣在方案中應明確規定無菌模擬灌裝試驗實施過程中的取樣方法及取樣量；在包裝后，應由取樣人員根據實際取樣原則按無菌操作方式模擬取樣，并進行同條件培養。5M.3 培養基灌裝產品的培養和測試所有密閉性完整的容器都應進行培養并檢查。培養條件：第一階段：23?28C,7天培養；第二階段：30?35E,7天培養；培養箱要進行溫度分布的驗證；培養基的檢查：a嚴格控制丟棄任何已經灌裝的培養基，任何丟棄都應有充分的理由并做好記錄。例如，在灌裝過程中正常產品的灌裝量控制精度需要很高，但培養基灌裝時，只要符合最低灌裝量，而不應該丟棄。但如果是膠塞上位不正確的培養基，由于密閉系統不完整，必須進行丟棄。一般在第三，七和十四天進行檢查，檢查人員應進行專門的培訓；檢查的要求：明亮的燈光、慢慢地旋轉、陽性容器必須主管進行復核；灌裝試驗后培養基生長試驗：必須在產品培養結束（14天）后進行；b 測試所用的菌為：常規菌（藥典要求）：枯草生產現場中經常發現的菌、對該產品比較敏感的標準菌； 芽抱桿菌、白色念珠球菌；非常規菌：c接種的濃度：小于100CFU/瓶。失敗調查工藝模擬試驗中如果出現陽性結果，應對其開展調查，確定失敗的最可能的原因。必須對調查進行記錄，至少包括對以下內容的檢查：a空氣監測結果：沉降菌、浮游菌、懸浮粒子監測數據；表面擦拭菌監控數據；b過濾前后完整性測試數據；使用的設備、物品、組件的滅菌數據及儲存條件；c評估人員是否遵循操作規程和檢驗操作規程（如：若培養基灌裝被視頻記錄下來了，檢查視頻）；若全部按規定操作，評估現有工藝及操作規程是否適用；調查結果和糾正措施應以報告的形式記錄在文件中，報告經過審核批準后，重新開展模擬灌裝試驗。再驗證要求出現下列情況之一時，應至少進行一次再驗證：設備、人員、工藝等發生重大變更時；產品出現無菌檢測失敗或無菌原因的投訴，但未查清具體原因時;無菌生產設備出現3個月以下停產時；連續生產半年時。無菌模擬試驗后的清潔無菌模擬操作結束后，應進行清潔，以避免培養基或模擬物的存在對下步生產產品質量的影響，清潔方法應進行驗證。試驗報告報告中應包含的記錄a生產記錄：清潔記錄、消毒記錄、滅菌記錄、灌裝記錄、目檢記錄等；b驗證記錄：整個驗證過程應進行詳細地記錄，包括灌裝的開始和結束時間、任何的過程模擬、任何的異年月曰常情況；C實驗記錄：培養基消毒滅菌記錄、環控記錄、樣品定期檢查記錄、人員培訓記錄、促進生長記錄；報告相關要求培養基模擬灌裝試驗完成后，應