免疫學檢測技術Immunodiagnosis第一節抗原或抗體檢測I.Detectionofantigensorantibodies一、抗原-抗體反應的特點Specificity（一）高度特異性

Cross-reaction:commonantigen

交叉反應：共同抗原

Antiserumabsorption

抗血清吸收

1stantibody&2ndantibody

一抗；二抗Reversibility/invertibility:（二）可逆性non-covalent,surface-binding,dissociable

非共價、表面結合，可解離complementarycapacity:affinity;avidity互補程度：親和力；親合力Visibility（三）可見性的條件Compatibleconcentrationsofantigenandantibodycombinedinproportionatornearequivalence[Antigen:multivalent;Antibody(IgG):divalent]

比例適合：抗原多價，抗體2價。交織成網。Phvalue;Temperature;Ionicconcentration

條件適宜：酸堿度、溫度、離子濃度Adequateconcentration,bindingstrength;reactiontime

足夠濃度、結合強度和反應時間Prozonephenomenon

前帶現象二、抗原-抗體反應的應用Terms術語Serologicalreaction血清學反應Qualitativeanalysis定性Quantitation定量Orientation定位Titration滴定Titer效價/滴度三、常用的抗原-抗體反應技術經典技術中和反應補體結合反應凝集反應沉淀反應I)Agglutination（一）凝集反應：顆粒性抗原或包被有可溶性抗原的顆粒

+相應抗體

肉眼可見的凝集塊1.直接凝集顆粒性抗原+相應抗體玻片凝集：抗原定性（ABO血型）試管凝集：抗體定量（肥達反應）2.間接凝集包被有可溶性抗原的顆粒

+相應抗體

紅細胞（間接血凝）；乳膠（間接乳凝）

Coombs’Test:紅細胞（Rh抗原）+不完全抗體+抗人球蛋白3.派生的試驗

反向間接凝集反應：包被抗體的顆粒+抗原間接凝集抑制反應：（乳膠妊娠試驗）

抗體+未知抗原+包被有相應可溶性抗原的顆粒凝集？HaemagglutinationII)Precipitation（二）沉淀反應可溶性抗原+相應抗體

肉眼可見的沉淀物

使用半固體瓊脂凝膠為介質——瓊脂擴散/免疫擴散1.單向免疫擴散：抗原的定量（Ig、C3）2.雙向免疫擴散：抗原/抗體的定性、組成及Ag相關性分析3.免疫電泳：電泳+雙向免疫擴散（抗原分析）4.對流電泳：雙向免疫擴散+電泳（抗原/抗體定性）5.火箭電泳：單向免疫擴散+電泳（抗原定量）免疫比濁：抗體+遞增量抗原比濁（抗原定量）III)ImmunolabellingTechniques

（三）免疫標記技術標記物：熒光素、酶、放射性核素、電子致密物質、化學發光物質標記對象：抗原或抗體用途：定性、定量、定位免疫熒光法（IFA）

熒光素可雙色；使免疫復合物呈熒光；可定性、定位（1）直接熒光法（2）間接熒光法：熒光素一抗熒光素二抗對每種抗體作標記不必標記每種抗體特異敏感測Ag測Ag/Ab免疫熒光法2.酶免疫測定（EIA）:ELISA與酶免疫組化（1）雙抗體夾心法ELISA：查抗原（2）間接法ELISA：查抗體（3）BAS-ELISA：Biotin-Avidin-酶放大系統（4）ELISPOT測定法：__包被物待測物測定結果___

抗CK抗體CK分泌細胞單一CK已知抗原B細胞特異B細胞（5）酶免疫組化*酶標抗體+組織/細胞（未知抗原）+形態學檢查*免疫組化技術：可對抗原定性、定量、定位酶免疫組化：HRP免疫金銀組化：膠體金顆粒免疫電鏡技術：HRP、膠體金、鐵蛋白雙抗體夾心法、間接法ELISA間接法ELISAELISA操作圖可調移液器8孔道可調移液器3.放射免疫測定（RIA）常用125I，測定微量物質4.化學發光免疫分析常用魯米諾，測定超微量物質5.免疫印跡法（WesternBlotting）先做凝膠電泳將蛋白質分區再將蛋白質轉移至固相載體后用酶免疫、放射免疫等技術加以測定第二節免疫細胞的測定一、淋巴細胞的分離與類型鑒定（一）血細胞分離

外周血密度梯度離心法外周血單個核細胞（淋巴細胞+單