附件：全國流行性腦脊髓膜炎防治指南（試行）（Neseras，）通過呼吸道傳播所引起的化膿性腦膜炎，常在冬病。根據Nm群特異性抗原膜不般將Nm分為13個血清群，其以A、、C三群常見行的90%以染Nm主及，管Nm界。我國曾于19381949年1991967年和1977發生5以1967高達403/10萬，病死為5.49，自1985年開展規流腦A群接之000年以在0.210。我國以ABC年B和C群有增多的了C群Nm引起局行。處身》（以下簡稱《傳染病防治法《突發公共衛生事件應急條例《醫疫防隔。一報監測（一）疫告。執行職務的醫護人員和檢疫人員、疾病預防控制人員、鄉村醫生構。各級醫療機構及其執行職務的人員發現任何臨床診斷為流腦的有在農在。在2逐。（測病：1、醫療機構要盡可能在使用抗生素治療前采集病人腦脊液、血展。2、市縣級疾病預防控制機構要收集流腦病例的腦脊液或急性期例病人必須采樣，出現流行時病例的標本采集率要達到以上。市縣級疾病預防控制機構在發現流腦首例病例后應在病例密切接觸者預防集10—0人省。、發現首例病例后，對病例所在縣（市、區）的醫療機構開展。中、人m要樣1標本并的菌株一型防控。，現或上或在鎮現或以在縣現或疫：（1）當地疾病預防控制機構要立即開展主動監測和病例搜索工級、。（2）發生疫情的學校，應實施晨檢制度，監測每位學生的健康狀況報。（3）發生疫情的建筑工地，應設立務工人員進出登記制度，掌。、各級疾病預防控制機構要定期開展流腦疫情報告情況檢查和。。測查流高例流現病時由及合料果暴預病。，首。了人發過接人員綜分勢做初定或調療構作索和觀。暴露的家庭成員的流腦發生概率為0—％，難以發現病例之間的必狀做。警級實測人疫時。三疫防血清抗體水展A群流腦糖、A+C接種，有將A群、A+C群糖。動在管的。預防接種工作嚴格按照預防接種技術管理規程及國家對流腦疫。目前，根據我國薦A群與A+C：1、A群后—8月種2第2第1針于3個；3歲第3針，第2針接于1年。2、A＋C流：為2歲。（2過1針A種A+C群流腦種A群流腦多糖疫苗的時間間隔不得少于3；（22歲種2次或2上A群流腦糖苗接種A+C群種A群流腦多糖疫苗最后1間間隔不得少于1。（3種A+C接。施作》者取適的防施醫腦醫。原。各。理當取避需的隔。醫療機構要按照監測要求在對病人進行抗生素治療前采集腦脊。。理任人取下：1、醫學觀察：對密切接觸者進行醫學觀察隨訪，時間至少為7天（自最后接觸之日算起，期間內可不限制其活動，但要告知其盡其戰高、所在鄉生。2、預防服藥：發生流腦流行時，可對密切接觸者采取的應急預防。各地可以根據當地往年流腦細菌耐藥性的相關情況選擇當地預防藥類目。（）接種當《病》的人結果接。A為－地發＋為周歲兒流對童接。護地和周圍環境開展濕式清潔，必要時用1％漂白粉澄清液或其它含氯制劑消。負人交叉染播。防在兩縣或多縣交界地區，由該市衛生行政部門負責協調處理該區域疫。各級疾控機構要及時將有關疫情信息向相鄰省市縣疾病預防控。與1、堅持預防為主的方針，在流行季節前，各地可通過各種媒體眾淡室。2、在衛生部門與各有關部門參與或監督下，托兒機構、中小學空。3、發生流腦疫情后，衛生行政部門要根據國家有關規定適時公嚴行群。4、各級衛生行政部門和衛生監督部門要會同有關部門加強對轄區內學校現。附件1 表病編號： □調單位：調： 調查：采： 采集：

年 月日 □□年 月日 □□室填： 填日期： 年月日 □□基況1患者姓名：2性別：男 ⑵女 □3出生日期：年月日□□4如無出生日期，年齡：歲月□5職業：：6戶籍地：7家庭現住址： 省 ） ） 鄉、）居）8居住情況：居9家長姓名：

（、）口他祥□聯系：1告單位：1病地點：1診醫療機構：1治醫療機構：1斷醫療機構：1院日期： 年1亡日期： 年

報告： 年月發病： 年月初診： 年月住院： 年月診斷： 年月月 日月 日

日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□17流腦疫苗免疫史：無 有 詳 □1接種次數：次詳□1據 接卡⑵接證⑶憶 □17多糖疫苗接種時間：第針：：：

年月日□□□□□□□□年月日□□□□□□□□年 月 日□□□□□□□□17多糖疫苗接種時間：第一針：二：18同類（流腦）病人接觸史

年 月 日□□□□□□□□年 月 日□□□□□□□□18地點近期是否有同（流腦病人：有無詳 □18前一周與同（流腦病人接觸史：有無詳 □18接觸接觸方式：⑴同住護⑶同校⑷位它 □18內同類（流腦）病人： ⑴有無⑶詳 □18邊（同宿舍、同班、同校）有同類（流腦）病人，根據情況填寫下表：者名 性別 年齡 與者關系 病況臨現1主要癥狀：1.病： 急緩⑶詳 □1.熱：1.呼吸道感染癥狀：

有無⑶詳 □有無⑶詳 □1.痛： 烈微無⑷詳 □1.心：1.吐：1.風：1.厥：

有否⑶詳 □有否⑶詳 □有否⑶詳 □有否詳 □1.志：1.10.癥狀：2主要體征：2.溫： ℃2.部唇周色澤2.膚出血點

楚睡躁⑷迷詳 □白⑵紺常 □多⑵少無⑷詳 □2.有其部位是：肢⑵干⑶它：□2.膚瘀點瘀斑多少無詳□2.項強直：2.識障礙：2.弓反張：2.鹵隆起：2.征：2.征：2.體征：3診療情況3.1離

⑴有⑵否詳 □⑴有⑵無詳 □⑴有⑵無詳 □⑴有⑵無詳 □⑴有⑵無詳 □有⑵無詳 □⑴有 ⑵無 詳 □3.2離隔離地點⑴醫療機構⑵家⑶其：□3.3生素類藥物：有無詳□3.使用藥物名稱：□3.使用效果：效⑵明顯⑶無效□3.6愈轉⑶未轉化亡□實檢果1血常規： ⑴有 無 □1.檢驗日期：□□□□□□□□1.液白細胞總數個/；1.性粒細胞 ％2腦脊液常規：⑴有 無 □2.脊液標本采集日期： 年 月 日2.驗日期：

□□□□□□□□□□□□□□□□2.觀 晰 混⑶濁 □2.脊液蛋白質（正常值<0.4L⑴常⑵增高 □2.細胞個μL正常值0-μ)常多□2.萄糖2.化物3病原培養:3液

mmL少高□mmo常少高□⑴有 無 □⑴有 無 □NmNmNm3.1.培養結果性群性查□3.1.特異抗原檢查⑴性群陰性⑶查□3.1.特異DNA性群陰性查□3.液或出血點有無□NmNmNm3.采集日期： 年 月 日NmNmNm3.2.培養結果 性群NmNmNm

□□□□□□□□性⑶查 □3.2.特異抗原檢查陽性血群性查□3.2.4異DNA查性群陰性⑶查□Nm3.3.⑴有無 □3.采集日期：年月日□□□□□□□□Nm3.3.培養結果 ⑴陽性群 ⑵陰性⑶查 □3.4. 有無□3.采集日期： 年 月 日NmNm3.4.特異抗原檢查陽性血群NmNm

□□□□□□□□⑵陰性查 □3.4.特異DNAPCR性血清群 ⑵陰性⑶查 □血清學檢測：Nm4.一份血清：有無 □4.1.1采集日期： 年月日□□□□□□□□4.1.特異抗體滴度∶XNmNm4.1清分群⑴群⑵群□4.二份血清：⑴有⑵無□4.2.1采集日期：年月日□□□□□□□□Nm4.2.特異抗體滴度∶X4.2清分群⑴群⑵群□5藥敏結果：有無□5.1群感藥品：⑴ ⑵ ⑶⑷ ⑸5.2群感藥品：⑴ ⑵ ⑶ ⑷⑷ ⑸病類1最終病例診斷結果 似⑵臨床診斷⑶診 □密記表名

性年別齡

業 住 址

觸況 疫苗住位居種史

注表報期： 年 月 日 □□□□□□□□填表說明1.您用圓珠筆或鋼筆填寫。2凡是數字，都填寫阿拉伯數字如：、、、、……。3請將所選擇答案的序號寫在題后的“□”內。4第－位為縣級國標碼，－位為縣級單位的病例順序編號。5調查日期：所有日期需填寫到日，填寫公歷時間。6第1項中初診單位如果是正規醫療機構，應詳細填寫醫療機構名稱，如果是個體，細。附件2 流行性腦脊髓膜炎的樣品采集和運送適宜的檢測樣品為腦脊液血液皮膚粘膜出血點擠出液血清及鼻咽拭子等病例的腦脊液血液皮膚粘膜出血點擠出液中檢出腦膜炎奈瑟菌可直接作為確診依據。一、樣品采集：咽拭子：用長柄棉拭子采咽后壁兩側分泌物立即接種于卵黃雙抗培養基（E或巧克力血平板，也可將咽拭子放入液體雙抗增菌管內，增菌8-12小時以后分離培養。2：采集3-毫升腦脊液，可直接接種于巧克力或E板，也可。3血3-毫升，立即加于5毫升的葡萄；．淤血點：選病人皮膚上的新鮮淤斑或淤血點，消毒后用針頭挑破，擠出組織液，用無菌棉簽蘸取先接種含雙抗的葡萄糖增菌肉湯管中增菌8-時后分離培養或直接接種E板再涂片染色直接鏡檢制成涂片干后革蘭染色，直接鏡檢；涂片也可做免疫熒光檢查。．血清：采集病人發病早期和恢復期（1-周內）雙份血清，檢測血清中特異性抗體呈倍或倍以上升高。二、樣品的處理和運送．及時處理樣品：腦膜炎奈瑟菌比較脆弱，采集樣品后，應盡可能地做到床邊接種，若無可能則應再最短的時間內送至實驗室進行接種培養。2．早期采集樣品：應盡可能采集病人用藥前的早期樣品，這可以明顯提高病原的撿出水平。3．保溫運送：腦膜炎奈瑟菌對溫度較為敏感，溫度過低或過高均可導致菌株死亡。在運送樣品或培養物時，應保持樣品處于20℃36℃之間，切記不能低。要求每份血液標本不少于3毫升分離血清后低溫(<2保存待檢測流腦抗體測定和或細菌分離與鑒定。附件－A流行性腦脊髓膜炎病原學診斷方法A1病原體腦膜炎奈瑟氏菌Neissminｄｉs)離從疑似流腦患者采集C急性期血液分離NmA1.標本的采集A1.1.C無菌操作，吸出CSFm即放到無菌試管內離心(20003000rmim滅菌過的毛細管吸取沉淀物直接接種到1％羊血巧克力色瓊脂上(C清液部分供檢測N特異抗原，亦可將其置于－2℃待測，％二氧化碳環境3℃培養2～7每日檢查細菌生長的情況及時分離純培養物。A1.1.血液：采取病人急性期靜脈血液6m，無菌操作，向盛有30m增菌用葡萄糖肉湯的三角瓶內注入4m血液余下的2m血液離心后吸出血清，供檢測N特異抗原和抗體，亦可將其置于一2℃待測，％二氧化碳環境，培養2～7每日進行觀察、。A1.接種和菌種鑒定A1.2.細菌形態N應為革蘭陰性，呈卵圓形或腎形，0.μ6μm。。A1.2.菌落N接種于巧克力色瓊脂平皿上％二氧化碳3℃培養2，其菌落直徑約1m，表面突起、光滑、濕潤、圓整、略帶灰白色、半透明、不溶中。A1.2.生長及抗原特性絕大多數N菌株分解葡萄糖和麥芽糖產酸不產氣。。Nm新分離菌株具有下列主要抗原：血清群特異性莢膜多糖，主要外膜蛋白－OMP(血清型特異的23O亞型特異的類O及與類OMP)鐵調節蛋白，脂寡糖(L蛋白、菌毛抗原等，根據群特異性莢膜多糖的結構與組成成分，N可分為1個血清群(A、、、2、、、、W135、、Z)其中9％以上的病例是由、B和C群Nm引起的。根據2/3OMP可將群與群N分成2個血清型但差不多半數菌株目前尚不能分型在可分型菌株中，以1、和型，P1P1P1.、21.P1.型多見；對于群N現有與2兩個血清型，以P1P1型多見。N還可以分成1個L疫型，其中群以L0L多見，群中以L，，復合型多見。N群特異性莢膜多糖、型和亞型的OMPL抗原成分對流腦發病與流行及其菌苗的研究均具有重要價值。附件－B 流行性腦脊髓膜炎血清學診斷方法B1玻片凝集試驗B1.1的應用玻片凝集試驗對N病原菌株或帶菌者菌株進行血清學分群。B1.2料B1.2.1的N菌株純培養物。B1.2.診斷血清：多價I包含、、、D群，多價Ⅱ〔包含188(Y)18992，9E)［包含319(811(K)群］及1群單價血清，共計1種。B1.2潔凈載玻片。B1.2生理鹽水。B1.試驗方法B1.3先將診斷血清按說明書稀釋成所需的濃度，滴一滴在潔凈的玻片上。B1.3用白金耳刮取菌苔少許在玻片上沾取少量血清在一旁研磨均勻再與清勻。B1.3輕輕搖動玻片數次，在～2m出現明顯凝集者，即為陽性。B1.3檢查從病人分離的疑似N時，先試群血清，若不與其發生凝集，則試用或群血清，仍不凝集時，則試用多價Ⅱ或多價Ⅲ血清。若發生凝集，再似N對現有診斷血清皆不凝集者則送研究單位進一步鑒定。B1.3.5片上與各群診斷血清鹽水或正常兔血清皆發生凝集者即定為自凝菌。B2酶聯免疫吸附試驗(EL試劑盒說明書進行操作。B3殺菌力試驗B3.1的應用微量殺菌力試驗(T測定病人急性期和恢復期血清中對N的殺菌抗體水平。此方法也可用于健康人群的血清抗體測定。B3.2料B3.2靶菌：對補體的自然殺菌作用具有耐受性，但對殺菌抗體反應敏感的Nm群29群和C群N)B3.2.2稀釋液：Dulbe緩沖鹽水液：氯化鈉(NaCl)80氯化鉀(KCl)0.2，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)115g磷酸二氫鉀(KH2PO4)02蒸餾水800L液：氯化鈣(CaCl2)0.1，蒸餾水100m；C水100m。上述三液分別滅菌121℃，15m，n℃備用。需用時按液份，液和C液各1份的比例混合，p為7.。使用時每100m稀釋液加滅活兔血清1m萬古霉素50μg多粘菌素2500單位或硫酸抗敵霉素500單位。稀釋液盛于小瓶中，置℃備用，可存放2周。B3.2.滴定板底部“U”形的9孔有機玻璃微滴板并備用同樣大小的普通玻璃作蓋板將它們平放在80的烤箱內烤2后備用試驗完畢以約80的熱水泡板1殺死靶菌，再以自來水沖洗干凈，并用棉棒拭凈不潔凈的孔。最后以蒸餾水沖洗一次，37烤干后同上于8℃干烤。滴定板使用一段時間后或遇到雜菌污染較嚴重時可用熱水殺死靶菌并沖洗干凈；在比較稀的硫酸重鉻酸鉀清潔液內浸泡4h沖洗干凈后同上處理備用。B3.2.兔補體：可以購買成品。B3.2.氯化三苯四氮唑(TriphlrazCloriTe)脂培養基(TC脂)B3.2.5.1C脂配方：牛肉膏0.％，氯化鈉0.％，日本蛋白胨3.％，可溶性淀粉0.2％，以蒸調pH77.，瓊脂0.％。B3.2.5.TC脂制作上述培養基成分熔化后按每10m或20m分裝于大試管121℃滅菌15min冷卻后置℃備用。臨用前將培養基加熱熔化，每10m培養基加50葡萄糖注射液0.1mL1％TC溶液(℃避光保存)0.1mL混勻放在4℃水溶液中待用。B3.2.5.陽性參考血清用N免疫兔制備的診斷血清，未加防腐劑，經預試測定其殺菌抗體滴度較高(1∶320以上)。B3.殺菌抗體測定步驟B3.3.靶菌液的制備B3.3.1.1開啟B或群N菌種接種到巧克力色瓊脂平皿上37二氧化碳孵箱或燭缸培養1～20挑取～個菌落涂于另一平皿同上培養10～15hB3.3.1.用N診斷血清和生理鹽水進行玻片凝集及顯微鏡檢查以核實菌種。B3.3.1.菌種被確證以后取其菌苔混勻于2菌脫脂牛奶管中制成濃菌液，分裝若干支小試管，每管約0.2置—20以下保存，N可存活～6個月。B3.3.1.需用靶菌時，取出一支上述牛奶菌種管，熔化后立即轉種并放在℃冰箱內保存，供每日分離靶菌制作菌懸液，可備用周。在測定抗體的過程中，。B3.3.1.從所分離的靶菌平皿上挑取～個典型菌落，涂抹轉種1/巧克力色瓊脂平皿，3℃燭缸培養～6，刮取菌苔，于盛有3.5右稀釋液的試管壁上用白金耳將其充分研磨，制成輕度混濁的均勻菌懸液，其光密度值相當于0.。B3.3.1.取出上述菌懸液2到0.5比色杯內在波長為540分光光度計上測其光密度值。B3.3.1.稀釋液用量按(B1)計算：＝OD×10—0.1……………(B1)式中——稀釋液用量，mLO——光密度值。按照(B1計算稀釋液用量然后往里加入0.1m靶菌懸液此時相當于光密度值為0.1的靶菌液作了10倍稀釋吹吸均勻后由其開始再連續作10倍稀釋至10－稀釋度，以菌液的最終濃度為每毫升400個菌落形成單位為宜。B3.3.1.稀釋好的靶菌懸液在1內用完。B3.3.殺菌抗體的測定B3.3.2.1在微滴板每孔內加1滴相當于25的稀釋液。B3.3.2.2移液器從每排第一孔內加25經5630m活的待檢血清吹吸～10次后吸出25至下一孔如此作連續倍比稀釋至最后一孔每份血清分別用一支移液槍頭。B3.3.2低溫冰箱內取出補體，于3℃溫水中搖動將其速溶，每孔加一滴。后即刻使用。B3.3.2.4一滴稀釋成合適濃度的靶菌菌液微滴板置微型振蕩器上中速振蕩5min在3℃培養25出后重復上述振蕩。B3.3.2.5滴已熔化冷至45左右的T脂后，微滴板置37燭缸內培養152觀察結果。B3.3.2.6驗需做下列對照：陽性參考血清對照；4孔補體對照稀釋液、補體、菌液各一滴，檢查補體自然殺菌活性；孔細菌生長對照稀釋液、滅活補體和靶菌菌液各滴。每次檢測時至少每塊微滴板中應有一組上述三種對照試驗。B3.3.2.7滴完靶菌菌液之后應將該菌液兩滴分別滴加到一個巧克力色瓊脂平皿的一端，沿著劃好的兩條線傾斜下流，于37燭缸內同時培養，次日檢查每滴靶菌的菌落數及其純度。B3.3.2.8果時先檢查上述三種對照試驗的結果補體的和細菌生長對照的各孔應出現眾多的紅色點狀小菌落陽性參考血清應達到原來確定的殺菌滴度若所試各孔中紅色點狀菌落數目明顯地少于補體對照孔或不出現紅色點狀菌落時則判斷為殺菌陽性如果所試孔中的菌落數目接近補體對照孔的一半或更多時，則判斷為殺菌陰性。B3.3.2.9色點狀菌落數目的多少，以符號“＋”記錄試驗結果。若補體，，＋。當所試各孔與其比較，菌落數減少30以下，記為“＋＋＋；減少50左右記“＋＋減少70左右記“＋每孔少于1個菌落則記“±。菌。附件－C 流行性腦脊髓膜炎膠乳凝集試驗C1目的應用膠乳凝集試驗測定病人C急性期血清和尿中N群特異抗原，輔助流腦臨床診斷。C2材料可購買成品膠乳檢測試劑，按照說明書進行操作。C3.2膠乳凝集試驗檢測疑似流腦病人標本內N群特異性抗原。C3.2.1標本的處理：CSF心(3000，/minn)清，沉淀部分作細菌培養；急性期血液(2離血清，置5℃將其滅活30性期尿液5mL20水乙醇，置℃～2，離心(3000，15m，棄上清，收集沉淀部分加0.2將其溶解，同前離心，小心地吸取上清液待測，不要。C3.2在上述病人標本中只要有一種標本與抗任何一群N的I致敏的Lx有N相應群特異的抗原，即可輔助臨。附件－D 定對于不能用血清學分群的腦膜炎奈瑟菌疑似菌株或無法進行腦膜炎奈瑟菌分離培養的腦脊液血液血清標本可采用ＰＣＲ方法進行ＤＮＡ擴增輔助檢測鑒定。3.1的基因：唾液酸轉移酶基因si因：可以作為P增的目的片段來區分Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ等五個常見流腦血清群Cror：可作為流腦奈瑟菌屬的特異性基因。3.2聚核苷酸引物序列crgAF:5’-gctggcgccgctggcaa,R:a’ttc-3-cttctgcagatt’cggcgtgccgt-3Orf-2(A’F:5cgcaataggtgtatatattc5t’c-3,-cgtaatagtttc’tatgccttctt-3SiaD(B)F:5-ggatcatttcagtgttttcR:5a-3-gcatgctggagg’ataagcattaa-3SiaD(C)F:tcaaatgagtttgc’aatagaaggt-3-caatcacgatttgcccaattgac-3SiaD(Y)F:5-ctcaaagc，aaggctttggR:5’3-ctgaagcgttttcattataattgctaa-3SiaD(W135)F:5-cagaaag’gagggatttcc’ta-3-cacaaccattttcattatagttactgt-33.3品處理可采用目前市售的ＤＮＡ提取試劑盒提取樣品ＤＮＡ也可采取直接煮沸方法，將樣品煮沸３０分鐘，離心，取上清作為擴增樣品。3.4增及檢測條件92，540，2。3個循環，反應產物用1.5瓊2%脂糖凝膠檢測，電壓6Vcm別 業2女) ）A+C;歲)別 業2女) ）A+C;歲) 3.AAC編號（位，前位為國標為）

類名(;齡見（1.A;+2.接種次數4未種;祥）

最后一次接種日期月日年)A群

抗體滴度（：）B群 C群

養果（1.A;2.B;注3.C;4.Y;5.W-135;Y群6其他;分）監群測庫中。編號：為位，前位為國標碼，后三位為對象編號。性別：、男；、女職業編碼：1幼托兒童;散居兒童;3.（大中小學）;4.;5.員及保姆;6.食品業;7.服務;8.人員;9.;;;;船）民;職員;人員;及待業;及不詳附件4 表 ：集日菌 菌種來源種期編原菌株離分分標檢號編來（病離離本定號人密接/地 日