臨床檢驗基礎

鶴壁職業技術學院醫學檢驗教研室

血液一般檢驗醫學檢驗臨床基礎檢驗臨床生化檢驗臨床血液學檢驗臨床微生物檢驗臨床免疫學檢驗專業核心課程臨床寄生蟲檢驗臨床檢驗者準入、獲取專業技術資格考試的必考課程之一，該考試設置“基礎知識”、“相關專業知識”、“專業知識”和“專業實踐能力”四個科目，其中臨檢所占題量和分值約20%，位居各檢驗之首。臨床檢驗基礎又稱為實驗診斷學，是通過實驗室的各種檢查方法，包括感官檢查、理學檢查、化學檢查、顯微鏡檢查以及自動化儀器檢查，對離體的血液、體液、分泌物和排泄物、脫落細胞等標本進行化學、病原生物學、顯微鏡形態學的檢查、分析，以獲得有關病原、病理生理變化及臟器功能狀態等實驗資料，從而協助臨床對疾病進行篩檢、診斷和鑒別診斷。臨床檢驗基礎的概念緒論自動化儀器檢查:電子計算機技術、自動化檢驗儀器取代手工法。速度快、精度高、操作易、參數多、易質控、信息大等。感官檢查:直接觀察標本：顏色、透明度、性狀，有無凝塊或寄生蟲臨床檢驗的一般方法理學檢查:液體的相對密度、血液比粘度、紅細胞沉降率、紅細胞比積等病理變化化學檢查:定性或定量檢測標本化學成分的病理變化顯微鏡檢查:觀察有形成分的數量和形態手工法自動化儀器法緒論現代臨床檢驗的特點:檢驗操作的自動化、檢驗技術的現代化、檢驗方法的標準化、檢驗試劑的商品化、計量單位的國際化、質量管理的全程化臨床檢驗工作流程與質量控制SCMCRME-biztransformationERP/EIP檢驗前醫生申請

患者準備標本采集標本標記標本運輸標本收檢

檢驗中

檢驗后

標本檢測報告結果審核報告單發放

標本儲存及復檢質量信息反饋正確的標本采集和轉運是降低結果差錯率（可減少70%以上）的關鍵。標本采集原則：保持當時生理或病理狀態下離體標本質和量的完整性。及時送檢臨床檢驗在醫學中的應用1、為疾病診斷和鑒別診斷提供客觀的實驗室檢查依據

發熱、出血、貧血傾向的患者：血涂片檢查到大量原幼紅細胞可診斷為急性白血病。白細胞（中性粒細胞）數量增多、血沉增快：支持急性心肌梗死的診斷，可與心絞痛相鑒別。顯微鏡發現病原體是確診感染性疾病的依據。2、為疾病療效監測和預后判斷提供動態變化數據尿蛋白檢測：檢測腎臟疾病患者的病情變化；網織紅細胞計數：對貧血患者、進行發射治療或化學治療的患者骨髓造血功能判斷具有實際可靠的指導作用。3、為疾病預防提供檢測依據

預防為主是基本方針，從標本中檢測寄生蟲，可對感染人群進行必要的治療和隔離，防止疾病的傳播和傳染。緒論學習的基本要求1.熟練掌握臨檢的基本理論。（生理學、病理學基礎，檢驗基本理論）2.掌握檢驗的基本實驗技能。（標本的采集、規范操作、質量控制等）3.熟悉檢驗方法學的評價。（評估和選擇靈敏度高、特異性強的檢驗方法，正確分析比較手工檢驗方法和儀器檢驗方法的優缺點）4.熟悉檢驗項目的參考值和臨床意義。(記憶常用檢驗項目的參考值，以便結合臨床，對檢驗結果進行有效的分析）勤學苦練重點：1.血標本采集方法和血涂片制備技術2.抗凝劑的應用難點：血細胞染色原理項目一

血液標本采集和血涂片制備一.掌握血液標本的采集方法及注意事項。

二.熟悉常用的血液抗凝劑種類及其應用。三、掌握血涂片的制備與細胞染色原理。血液組成概述概述血液理化性質1.血量：成人4～5L，占體重6%～8%2.顏色：動脈鮮紅，氧合血紅蛋白多靜脈暗紅，還原血紅蛋白多3.PH：7.35～7.45，動脈稍高，靜脈稍低4.比密和滲透濃度：血液比密取決于血細胞比容和hb量：男：1.055～1.063;女：1.050～1.060;血漿比密與其血漿蛋白質含量有關：1.025～1.030；血細胞比密：1.090

血漿滲量（滲透壓）=290～310mOsm/kg.H2O，5.血液特性：懸浮穩定性；粘滯性；凝固性概述血液生理功能1.運輸功能（基本功能）2.協調功能（輸送激素、酶類到各個臟器）3.維護機體內環境穩定性（酸堿平衡、電解質代謝、體溫恒定）4.防御功能（白細胞、抗體、補體等）任務一血液標本的采集及抗凝一、采血部位毛細血管采血法成人：左手無名指或中指指端內側(WHO)嬰幼兒：大拇趾血液標本的采集耳垂：不宜使用手指適用于需血量少(<0.1ml)的檢查。或

內外側緣足跟嚴重燒傷患者：皮膚完整處？毛細血管采血法血液標本的采集二、器材與試劑：無菌一次性采血針、一次性微量吸管、消毒干棉球、無菌干棉球、小試管、75%乙醇、生理鹽水等。按摩：輕輕按摩采血部位，使其自然充血。消毒：用75%乙醇消毒棉球消毒。針刺：待酒精揮發干后，用左手拇指和食指

捏緊采血部位，右手持采血針，迅速刺入2～3mm。拭血：待血自然流出后，無菌干棉球擦去第一滴血。吸血：按需要依次采血采血完畢，用干棉球壓住傷口片刻。稀釋：無菌干棉球擦凈吸管外余液，將吸管伸入裝有生理鹽水的試管底部，慢慢排除吸管內的血液，上清液清洗管內余血2～3次。將試管內的液體混勻。三、操作步驟毛細血管采血法血液標本的采集1、準備2、按摩3、消毒4、針刺5、拭血6、吸血7、稀釋四、注意事項1.采血部位不能有凍瘡、紫紺、水腫和炎癥等。2.消毒后，待酒精干后采血。3.取血時切忌用力擠壓。4.進行多項檢查時，采集標本的順序依次為:PLT計數、RBC計數、Hb測定、WBC計數及分類、血型鑒定等。毛細血管采血法血液標本的采集毛細血管采血法血液標本的采集五、方法學評價1.操作方便；2.每人的皮膚厚度不同，無法控制采血刺入的深度；3.常需擠壓誘導，導致組織液混入，影響結果準確性；4.標本不能重復應用；5.取血量少(<0.1ml)。1.毛細血管采血時應注意些什么？2.選擇題：1）新生兒做血細胞計數，多用下列哪個部位采血A.手背B.耳垂C.足跟D.左手無名指2）關于毛細血管采血法，下列正確的是

A.耳垂血的紅細胞、白細胞、血細胞比容結果均比靜脈血低10%左右B.手指采血時流出的第一滴血即可用于檢查C.嬰兒宜用耳垂或手指采血D.成人推薦用手指采血，因其檢查結果比較恒定復習思考題一、采血部位常用肘部靜脈,也可手背或外踝靜脈等。二、器材與試劑注射器、壓脈帶、墊枕、75%酒精、碘酒、無菌棉簽(球)等。靜脈采血法血液標本的采集用于需血量較多或全自動血液分析儀測定。四、注意事項1.防止標本溶血。2.壓脈帶壓迫時間不能過長。3.切忌將注射器往靜脈內推。三、采血步驟靜脈采血法血液標本的采集毛細血管采血靜脈采血缺點限制了重復實驗和追加實驗，標本量少，局部炎癥可得假結果，可混入組織液。不同抗凝劑的使用，改變血液性質，影響有形成分的形態優點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性大，無組織液影響，適用于臨床研究，可重復實驗和追加其他實驗。毛細血管采血與靜脈采血優缺點比較血液標本的采集優點：防溶血防標本污染防交叉感染可多管采集缺點：成本較高血液標本的采集一次性使用靜脈采血針

瓶塞穿刺針套（防止血液泄漏）抗凝：用物理或化學的方法，去除或抑制某些凝血因子，阻止血液凝固。概念血液標本的抗凝物理方法抗凝：脫纖維蛋白將血液注入到有玻璃珠的器皿中，轉動，纖維蛋白纏繞凝固在玻璃球上，從而防止血液凝固成塊。適用于免疫學檢驗、紅斑性狼瘡細胞和細菌培養血培養基的制備。常用抗凝劑：枸櫞酸鈉、草酸鈉、二草酸鹽、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA)、肝素抗凝劑(anticoagulant)：能夠阻止血液凝固的化學試劑或物質。一.枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）適用項目：凝血象檢查、紅細胞沉降率、血液保養液常用的抗凝劑血液標本的抗凝抗凝原理：與血中鈣離子結合形成螯合物二.草酸鈉三.雙草酸鹽抗凝劑抗凝原理：與鈣離子形成草酸鈣沉淀。適用項目：血細胞比容、紅細胞(計數）草酸鉀(鈉)使RBC皺縮，草酸銨使RBC脹大。常用的抗凝劑血液標本的抗凝不適于血小板計數和白細胞分類計數四.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽抗凝原理：與鈣離子結合形成螯合物適用項目：EDTA-K2用于血細胞計數(ICSH)

血細胞比容測定常用的抗凝劑血液標本的抗凝不適于凝血象檢查及血小板功能試驗。五.肝素適用項目：紅細胞滲透脆性試驗、血細胞比容測定血液流變學檢查、多種生化分析抗凝原理：加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成、抑制血小板聚集。不適于白細胞計數及分類計數常用的抗凝劑血液標本的抗凝臨床常用的采血試管血液標本的抗凝檸檬酸鈉抗凝（抗凝比例1：9）用于凝血象檢查

加入促凝劑，用于普通生化檢查EDTA-K2抗凝，用于血常規檢查肝素鈉抗凝，用于血流變學檢查等檸檬酸鈉抗凝（抗凝比例1：4）用于紅細胞沉降率的測定1.毛細血管采血時應注意些什么？2.常用的血液抗凝劑有哪些？3.選擇題：1）新生兒做血細胞計數，多用下列哪個部位采血A.手背B.耳垂C.足跟D.左手無名指2）關于毛細血管采血法，下列正確的是

A.耳垂血的紅細胞、白細胞、血細胞比容結果均比靜脈血低10%左右B.手指采血時流出的第一滴血即可用于檢查C.嬰兒宜用耳垂或手指采血

復習思考題

3）不與Ca2+作用,但能阻止血液凝固的抗凝劑是A.草酸鹽B.EDTA-K2

C.肝素D.枸櫞酸鈉4）下列幾種抗凝劑，哪種最適宜用于血細胞計數

A.

乙二胺四乙酸二鉀(EDTA－K2)B.枸櫞酸鈉C.草酸鈉D.草酸鉀

5）肝素作為抗凝劑,下列敘述錯誤的是A.具有較強的抗凝能力B.不影響血細胞體積C.過量使用可引起白細胞聚集

D.適用于做白細胞分類計數

血涂片的顯微檢查是血液細胞學檢查的基本方法，臨床上應用極為廣泛，特別是對于各種血液病的診斷具有重要的價值，近年來血細胞分析儀的廣泛應用，血涂片的觀察也可作為判斷儀器結果的簡易方法。血涂片的用途：血細胞形態學檢驗、網織紅、寄生蟲檢驗。

任務二血涂片制備和細胞染色一、手工推片法將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動。圖1-3血涂片制備示意圖（上：側面觀，下：正面觀）

血涂片制備推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）一張滿意的血涂片應厚薄均勻頭體尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號李四B123血涂片的觀察低倍鏡觀察1.染色情況(滿意、偏酸、偏堿）2.細胞分布情況油鏡下分類計數：體尾交界處。油鏡分類時應按一定走向，不要重復計數。李四123

嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞姬姆薩染色法

[原理]

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲著色較好，結構顯示更不清晰，而胞質和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀釋吉姆薩復染。吉姆薩染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.將血膜在染液中浸染10-30min3.流水沖洗,待干后鏡檢