北師大版選修3現(xiàn)代生物科技專題《利用花粉管通道法將目的基因?qū)朊藁ā方虒W(xué)設(shè)計一、背景介紹本教學(xué)設(shè)計是針對北師大版選修3現(xiàn)代生物科技專題中的“利用花粉管通道法將目的基因?qū)朊藁ā边@一內(nèi)容進行的教學(xué)設(shè)計。現(xiàn)代生物科技是近年來科學(xué)發(fā)展的一個重點領(lǐng)域，而基因工程技術(shù)是現(xiàn)代生物科技的核心技術(shù)之一。利用基因工程技術(shù)可以實現(xiàn)對生物體內(nèi)基因的精準調(diào)控，進而實現(xiàn)對生物組織與器官的改良與優(yōu)化。在此過程中特別需要掌握基因?qū)爰夹g(shù)的基本原理與操作方法。針對這一內(nèi)容，本設(shè)計將從實驗的目的、原理、實驗步驟、實驗材料、實驗方法等方面對實驗進行詳細的介紹和說明，以及對實驗中有可能出現(xiàn)的問題進行分析和解決。通過本次實驗，學(xué)生可以了解基因?qū)氲幕驹恚趯嵺`操作中體驗，加深對生物科技實踐操作的認識。二、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗，實現(xiàn)如下目的：理解基因?qū)氲幕驹恚徽莆栈ǚ酃芡ǖ婪▽γ藁ㄟM行基因?qū)氲牟僮骷夹g(shù)；了解常見的轉(zhuǎn)基因材料及其特性；學(xué)習(xí)實驗記錄和結(jié)果分析的方法。三、實驗原理基因?qū)胧腔蚬こ碳夹g(shù)的核心內(nèi)容之一，基因?qū)敕椒ǖ脑砗喴爬閷?gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入到目標細胞中，然后令它在細胞內(nèi)差異性地表達。常用的基因?qū)爰夹g(shù)有基因槍法、化學(xué)法、電轉(zhuǎn)法和冷凍法等多種。本次實驗將采用花粉管通道法進行棉花的基因?qū)耄湓硎菍⒛繕嘶驑?gòu)建的質(zhì)粒載體直接轉(zhuǎn)化到棉花花粉管內(nèi)，以實現(xiàn)對棉花目標基因的導(dǎo)入。四、實驗步驟實驗前準備將載體質(zhì)粒進行線性化處理，獲取純凈的DNA片段；制備轉(zhuǎn)基因棉花一次培養(yǎng)基，并加入激發(fā)劑，通過調(diào)整pH值來使其接近于中性；環(huán)氧乙烷處理培養(yǎng)器和工作臺，制備相關(guān)試劑；實驗步驟將處理過的花粉和獲取的質(zhì)粒DNA片段混合。這種質(zhì)粒常被用于穩(wěn)定地表達目的基因，而花粉則被廣泛用于植物基因轉(zhuǎn)化研究中，很容易地被轉(zhuǎn)化；將花粉管切割成適當?shù)拈L度，并浸入混合液中；將浸入混合液中的花粉長期膨脹，之后便會捕獲質(zhì)粒，然后帶著其進入花粉管內(nèi)部；通過顯微鏡觀察細胞的基因表達情況，根據(jù)現(xiàn)有條件和實驗數(shù)據(jù)進行試驗優(yōu)化；生長剛被改造過的棉花植物。實驗后處理固定棉花植物的形態(tài)特征和細胞特征，例如葉子形狀、細胞結(jié)構(gòu)、花形，表明目標基因是否被表達；對棉花植物的細胞進行PCR擴增，以檢測目的基因在棉花細胞內(nèi)的表達情況；五、實驗材料載體質(zhì)粒；花粉；棉花；轉(zhuǎn)基因培養(yǎng)基；PCR擴增試劑盒；花粉管。六、實驗方法制備轉(zhuǎn)化材料：線性化的載體質(zhì)粒和花粉。制備轉(zhuǎn)基因棉花一次培養(yǎng)基，滴入適量花粉，并通過針頭將花粉吸入花粉管內(nèi)。處理好每一個花粉管，使其較長，讓其能夠在某個位置穩(wěn)定。在花粉管顯微鏡下觀察每一個花粉管與花粉處理的情況，并進行試驗優(yōu)化。更換滴管并調(diào)整培養(yǎng)基pH值，以達到最佳轉(zhuǎn)化效果。生長被改造的棉花植物。對棉花植物進行形態(tài)特征和細胞特征的固定和檢測，以檢測目的基因是否被表達。七、教學(xué)評估通過學(xué)生實驗操作記錄以及實驗結(jié)果分析，對學(xué)生進行評估。評估內(nèi)容主要包括以下兩個方面：評估學(xué)生是否理解基因?qū)氲脑聿⑶夷軌颡毩⑦M行基因?qū)雽嶒灒辉u估學(xué)生實驗后對實驗結(jié)果的分析能力和實驗記錄的規(guī)范性。八、實驗注意事項實驗室內(nèi)工作時一定要佩戴好個人防護裝備，特別是手部和眼睛；實驗前對實驗儀器設(shè)備以及實驗試劑進行全面指導(dǎo)，保證