生物大分子的結構與功能學習“生物大分子的結構與功能”的關鍵點結構特性重要功能基本的理化性質與應用2生物大分子的結構與功能1、蛋白質是生命活動的基本物質基礎分布廣：所有器官、組織都含有蛋白質；細胞的各個部分都含有蛋白質。含量高：占人體干重的45％；某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達80％；占細胞干重的70%。概述蛋白質在生命活動中的重要性第一章蛋白質的結構與功能3生物大分子的結構與功能2、蛋白質的重要生物學功能3、氧化供能1）生物催化劑：酶2）代謝調節作用：激素，受體，G蛋白，等3）防御作用：免疫球蛋白，等4）物質轉運：血紅蛋白，等5）運動與支持：肌動蛋白，等6）營養和存儲：酪蛋白，卵清蛋白，等7）結構蛋白：膠原蛋白，彈性蛋白，角蛋白，等4生物大分子的結構與功能元素組成：C50-55％H6-7％O19-24％N13-19％S0-4％其他微量元素：P、Fe、Cu、Mn、Zn、Co、Mo、I等第一節蛋白質的分子組成5生物大分子的結構與功能

其中N的平均含量％＝16％蛋白質含量＝樣品含氮量/16％＝樣品含氮量×6.25凱氏定氮法測定蛋白質含量的理論依據6生物大分子的結構與功能一、蛋白質的基本結構單位——氨基酸(aminoacids)存在于自然界中的氨基酸有300多種，但組成人體蛋白質的氨基酸僅有20種，且均屬L-α-氨基酸（甘氨酸除外）。蛋白質肽氨基酸水解水解酸/堿/酶7生物大分子的結構與功能氫原子氨基羧基側鏈基團α-碳原子氨基酸的基本結構8生物大分子的結構與功能----C-C-C-C-COOHγβα----C-C-C-C(NH2)-COOHα-氨基酸----C-C-C(NH2)-C-COOHβ-氨基酸----C-C(NH2)-C-C-COOHγ-氨基酸什么是L-α-氨基酸？9生物大分子的結構與功能H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式R10生物大分子的結構與功能脯氨酸（亞氨基酸）幾種特殊的氨基酸11生物大分子的結構與功能半胱氨酸+胱氨酸二硫鍵-HH12生物大分子的結構與功能二、氨基酸的分類（p9-10表1-1）非極性脂肪族氨基酸：具有非極性R側鏈，呈疏水性，包括脂肪族氨基酸。（6種）極性中性氨基酸：具有極性R側鏈，呈親水性，通常含羥基、巰基、酰胺基等。（6種）芳香族氨基酸：含有苯環（3種）酸性氨基酸：R側鏈含羧基（2種）堿性氨基酸：R側鏈含氨基、胍基或咪唑基（3種）13生物大分子的結構與功能(zwitterion)pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸的兼性離子

陽離子陰離子三、氨基酸的理化性質1、兩性解離14生物大分子的結構與功能純晶體狀態COO-H3N+水溶后等電荷狀態總電荷0加酸H+H+H+H總電荷“+”15生物大分子的結構與功能COO-H3N+水溶后等電荷狀態總電荷0加堿OH－OH－OH－總電荷“-”

H2NH2O16生物大分子的結構與功能氨基酸的等電點pH<pIpH=pIpH>pI正電荷兩性離子負電荷負極移動（電場中）不移動正極移動等電點（isoelectricpoint,pI）：在某一pH溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，所帶凈電荷為零，呈電中性，在電場中不泳動。此時溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點。17生物大分子的結構與功能pI值決定于兩性離子兩邊的pK值的算術平均值。等電點計算2222RNHRCOOHNH2COOHpKpKpIpKpKpIpKpKpI+=+=+=----aaaa堿性酸性中性18生物大分子的結構與功能R為極性基團（兼性離子兩邊的pK值的平均值）酸性aa：pI=1/2（pK-COOH+pKR）如：天冬氨酸pI=?

（pK-COOH+pKR）=?（2.09+3.86）=2.98堿性aa：pI=1/2（pK-NH2+pKR）如：賴氨酸pI=?

（pK-NH2+pKR）=?（8.95+10.53）=9.74R為非極性基團（R為非游離基團）pI=1/2（pK1+pK2）如：甘氨酸pK-COOH=2.34，pK-NH2=9.60pI=1/2（2.34+9.6）=5.9719生物大分子的結構與功能2、紫外吸收Trp、Tyr和Phe在280nm波長附近具有最大吸收峰，其中Trp的最大吸收最接近280nm蛋白質定量20生物大分子的結構與功能3、顯色反應：茚三酮反應氨基酸與茚三酮水合物共熱，生成藍紫色化合物，其最大吸收峰為570nm，可用于氨基酸定量分析。例外：Pro黃色；Asn棕色21生物大分子的結構與功能四、肽鍵和多肽鏈+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵22生物大分子的結構與功能1、肽鍵：一個氨基酸的羧基和另一個氨基酸的氨基之間脫去一分子水形成的酰胺鍵，是蛋白質中氨基酸間最基本的連接方式。23生物大分子的結構與功能肽分類、命名*肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。*兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽……*

肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。*由十個以內氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。甘氨酰甘氨酸24生物大分子的結構與功能多肽鏈——蛋白質的基本結構形式多肽鏈(…NHCHCONHCHCO…)多肽鏈的方向性：從N末端指向C末端。肽鏈的兩端：氨基末端（N-端）和羧基末端（C-端）25生物大分子的結構與功能Ser-Val-Tyr-Asp-Gln

絲－纈－酪－天－谷

SVTDE如下述五肽可表示為：26生物大分子的結構與功能2、生物活性肽：谷胱甘肽(glutathione,GSH)GSH過氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSG

GSH還原酶NADPH+H+NADP+27生物大分子的結構與功能神經肽：腦啡肽、內啡肽、強啡肽、P物質、Y肽肽類激素：催產素、加壓素等其他：生長因子；短桿菌S；甜味肽等28生物大分子的結構與功能

+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-

+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-Met-腦啡肽Leu-腦啡肽

L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val

L-OrnL-Orn

L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu

短桿菌肽S(環十肽)由細菌分泌的多肽，含有D-氨基酸和一些稀有氨基酸，如鳥氨酸（Ornithine,縮寫為Orn）。

29生物大分子的結構與功能第二節 蛋白質的分子結構30生物大分子的結構與功能一、蛋白質的一級結構(primarystructure)蛋白質分子中從N端到C端的氨基酸排列順序31生物大分子的結構與功能

510152025301AASXDXSLVEVHXXVFIVPPXILQAVVSIA31TTRXDDXDSAAASIPMVPGWVLKQVXGSQA61GSFLAIVMGGGDLEVILIXLAGYQESSIXA91SRSLAASMXTTAIPSDLWGNXAXSNAAFSS121XEFSSXAGSVPLGFTFXEAGAKEXVIKGQI151TXQAXAFSLAXLXKLISAMXNAXFPAGDXX181XXVADIXDSHGILXXVNYTDAXIKMGIIFG211SGVNAAYWCDSTXIADAADAGXXGGAGXMX241VCCXQDSFRKAFPSLPQIXYXXTLNXXSPX271AXKTFEKNSXAKNXGQSLRDVLMXYKXXGQ301XHXXXAXDFXAANVENSSYPAKIQKLPHFD331LRXXXDLFXGDQGIAXKTXMKXVVRRXLFL361IAAYAFRLVVCXIXAICQKKGYSSGHIAAX391GSXRDYSGFSXNSATXNXNIYGWPQSAXXS421KPIXITPAIDGEGAAXXVIXSIASSQXXXA451

XXSAXXA酵母己糖激酶的一級結構32生物大分子的結構與功能N末端C末端牛核糖核酸酶二硫鍵33生物大分子的結構與功能一級結構體現生物信息：20n………….多樣一級結構是空間結構及生物活性的基礎…..特異一級結構的連接鍵：肽鍵（主要）、二硫鍵小結34生物大分子的結構與功能二、蛋白質的二級結構(secondarystructure)蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，也就是該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，不涉及氨基酸殘基側鏈的構象。肽鏈主鏈骨架原子即N（氨基氮）、Cα（α-碳原子）和CO（羰基碳）3原子依次重復排列。35生物大分子的結構與功能α-螺旋(α-helix)β-折疊(β-

pleatedsheet)β-轉角(β-turn)無規則卷曲（randomcoil）36生物大分子的結構與功能肽鍵具部分雙鍵性，不能自由旋轉肽鍵中的四個原子（-CO-NH-）和與之相鄰的兩個α碳原子（C1、C2）位于同一剛性平面內，稱為肽單元

。肽鍵上H與O的方向幾乎總是相反，稱反式肽單元（trans-peptideunit），該構型更穩定。CNHHHORRCNHHHORR（一）肽單元（peptideunit）37生物大分子的結構與功能38生物大分子的結構與功能（二）、-螺旋（-helix）特點（1）多肽鏈主鏈圍繞中心軸螺旋式上升，3.6個氨基酸/圈，螺距0.54nm；39生物大分子的結構與功能（2）氫鍵維系：鏈內氫鍵（AA1…AA4,第1個肽平面羰基上的O，與第4個肽平面亞氨基上的H形成氫鍵)，方向與螺旋長軸平行；（3）一般為右手螺旋。側鏈伸出，在螺旋外側40生物大分子的結構與功能1、多肽鏈充分伸展，每個肽單元以C為旋轉點，依次折疊成鋸齒狀結構，氨基酸殘基側鏈位于鋸齒狀結構的上下方；2、兩條以上肽鏈或一條肽鏈內的若干肽段平行排列，其結構靠鏈間氫鍵維系（羰基上的氧和亞氨基上的氫），方向垂直長軸特點（三）、β-折疊(β-pleatedsheet)41生物大分子的結構與功能3、順平行折疊：兩條肽鏈走向相同；反平行折疊：兩條肽鏈走向相反。反平行折疊順平行折疊

反平行折疊順平行折疊

42生物大分子的結構與功能（四）、-轉角一般由四個氨基酸組成，常見氨基酸：Pro,Gly以主鏈間氫鍵維持穩定。多肽鏈中180度回折處形成的特定構象。沒有確定規律性的肽鏈結構

無規卷曲43生物大分子的結構與功能1、α-螺旋(α-helix)右手螺旋：3.6個AA/圈，螺距0.54nm；氫鍵維系：鏈內氫鍵（AA1…AA4），平行長軸；側鏈伸出螺旋蛋白質的二級結構是指多肽鏈骨架中原子的局部空間排列，不涉及側鏈的構象，也就是該肽段主鏈骨架原子的相對空間位置，主要有α-螺旋、β-折疊、β-轉角和無規卷曲。維持二級結構的力量為氫鍵。小結44生物大分子的結構與功能2、β-折疊(β-pleatedsheet)多肽鏈充分伸展，肽平面折疊成鋸齒狀；側鏈交錯位于鋸齒狀結構的上下方；氫鍵維系：氫鍵的方向垂直長軸；可有順平行片層和反平行片層結構。3、其它（1）肽鏈主鏈出現的180°回折部分稱β-轉角。（2）蛋白質分子中那些沒有確定規律性的部分肽鏈構象稱為無規卷曲。45生物大分子的結構與功能

蛋白質分子中，2個或2個以上的具有二級結構的肽段在空間上相互接近，形成規則的二級結構組合。有三種形式：-螺旋組合（

）、-折疊組合（）、-螺旋-折疊組合（

）（五）、超二級結構46生物大分子的結構與功能鈣結合蛋白中結合鈣離子的模體鋅指結構模體（motif）

是具有特殊功能的超二級結構，是由二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象。一個模體有其特征性的氨基酸序列，并發揮特殊的功能。

47生物大分子的結構與功能三、蛋白質的三級結構

（TertiaryStructure）

（一）

整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置，也就是所有原子在三維空間的整體排布，稱為三級結構，包括主、側鏈構象。48生物大分子的結構與功能特點（Features）:空間長度縮短，呈球狀、棒狀、纖維狀三級結構主要靠次級鍵（非共價鍵）維系固定：疏水鍵、鹽鍵、氫鍵、范德華力；二硫鍵（共價鍵）也參與維系三級結構疏水基團在分子內部，親水基團在分子表面功能區形成：三級結構形成后，生物學活性必需基團靠近，形成活性中心或部位。49生物大分子的結構與功能次級鍵介導蛋白質高級結構形成50生物大分子的結構與功能51生物大分子的結構與功能（二）、結構域（Domain）分子量較大的蛋白質可折疊成多個結構較為緊密的區域，并各行其功能，稱為結構域。70結構域與分子整體以共價鍵相連具有相對獨立的空間構象和生物學功能同一蛋白質中的結構域可以相同或不同，不同蛋白質中的結構域也可能相同或不同52生物大分子的結構與功能（三）、分子伴侶（Chaperon）能提供保護環境，從而加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構的蛋白質分子。53生物大分子的結構與功能Features:具有獨立三級結構的多肽鏈單位，稱為亞基或亞單位（subunit），亞基可以相同，亦可以不同次級鍵維系，主要是氫鍵和離子鍵單獨亞基，多無生物學功能，二個以上亞基聚合成為有完整四級結構的蛋白質，才有功能四、蛋白質的四級結構

QuaternaryStructure

二個或二個以上具有獨立的三級結構的多肽鏈，彼此借次級鍵相連，形成一定的空間構象，稱為四級結構。54生物大分子的結構與功能血紅蛋白（Hb）兩個α鏈與兩個β鏈組成的四聚體

α鏈：141aa；β鏈：146aa;每條鏈各含一個血紅素輔基α鏈β鏈55生物大分子的結構與功能五、蛋白質的分類1、按照組成分類：單純蛋白質、結合蛋白質單純蛋白：只有氨基酸組分結合蛋白：氨基酸組分＋其他組分（輔基）2、根據形狀分類：纖維狀蛋白、球狀蛋白3、按照結構分類：單體蛋白、寡聚蛋白單體蛋白：只有一條多肽鏈寡聚蛋白：數條多肽鏈非共價相互作用超家族（super-）、家族（family）、亞家族（sub-）

4、按照生物功能分類：酶、調節蛋白、轉運蛋白、運動蛋白、防御蛋白、營養蛋白、儲存蛋白、結構蛋白、毒蛋白56生物大分子的結構與功能六、蛋白質組學（proteomics）

定義：以細胞內全部蛋白質的存在及其活動方式為研究對象研究內容：蛋白質表達譜、翻譯后修飾譜、亞細胞定位圖、相互作用圖、生物信息學及數據庫技術平臺：雙向電泳蛋白質點的定位、切取蛋白質點的質譜分析研究意義57生物大分子的結構與功能RNase是由124aa殘基組成的單肽鏈，分子中8個Cys的-SH構成4對二硫鍵，形成具有一定空間構象的蛋白質。（一）一級結構是空間構象的基礎第三節蛋白質結構與功能的關系

一.蛋白質一級結構是高級結構與功能的基礎

58生物大分子的結構與功能

天然狀態，有催化活性

尿素、β-巰基乙醇

去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態，無活性59生物大分子的結構與功能人VETSISLYQNFVNQSHEAYGERTPKT馬---G---------------------A豬–------------------------A牛--A-V--------------------T羊--AGV--------------------A天竺鼠-DAGT*RH-S--SR-N-TSQDDI--D鯨–------------------------A雞--HNT-----AA----------S--A3489101213141518123491013141620212227282930A鏈B鏈某些脊椎動物胰島素一級結構部分氨基酸殘基差異“-”為與人相同；*為芳香族氨基酸；未列出的為相同序列（二）一級結構相似，高級結構和功能也相似60生物大分子的結構與功能

生物名稱不同氨基酸數生物名稱不同氨基酸數黑猩猩0恒河猴1豬、牛、羊10馬12雞13海龜15金槍魚21小蠅25小麥35酵母44不同生物和人的細胞色素c中氨基酸組成的差異（三）氨基酸序列提供重要的生物進化信息

生物界不同種屬來源的蛋白質，比較一級結構，可反映物種進化關系61生物大分子的結構與功能62生物大分子的結構與功能N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSHbAN-val·his·leu·thr·pro·val

·glu·····C(146)分子病（moleculardisease）

：由于蛋白質分子發生變異所導致的疾病。病因為基因突變所致。鐮刀形紅細胞貧血病（四）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾病63生物大分子的結構與功能正常紅細胞鐮刀形紅細胞64生物大分子的結構與功能65生物大分子的結構與功能肌紅蛋白

血紅蛋白α

血紅蛋白β二、蛋白質的功能依賴特定空間結構（一）血紅蛋白與肌紅蛋白的結構相似66生物大分子的結構與功能肌紅蛋白血紅蛋白67生物大分子的結構與功能血紅素結構68生物大分子的結構與功能肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線Hb與Mb一樣能可逆地與O2結合，Hb與O2結合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白亞基構象變化影響亞基與氧結合

69生物大分子的結構與功能Hb的4個亞基與4個O2結合的平衡常數不同，第一個亞基結合O2后，可促進其它亞基與O2的結合。協同效應90一個亞基與其配體（Hb中的配體為O2)結合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體的結合能力，稱為協同效應(cooperativity)。正協同效應(positivecooperativity)：促進作用負協同效應(negativecooperativity)：抑制作用70生物大分子的結構與功能Hb結合氧的理論解釋71生物大分子的結構與功能變構效應變構劑變構蛋白由一個O2與Hb亞基結合后引起亞基的構象變化變構效應（allostericeffect）：蛋白質分子的特定部位與小分子化合物結合后，引起蛋白質分子空間構象改變，從而促使生物學活性變化的現象。小分子O2或其它化合物稱為變構劑。Hb或其它構象改變的蛋白質稱為變構蛋白。72生物大分子的結構與功能瘋牛病由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一組人和動物神經退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。疾病與核酸無關。PrPcα-螺旋PrPscβ-折疊正常瘋牛病（三）蛋白質構象改變引起疾病73生物大分子的結構與功能朊病毒致病過程中的構象變化示意圖蛋白質構象疾病：錯誤構象相互聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產生毒性而致病。老年癡呆(Alzheimer’sdisease)瘋牛病(Madcowdisease,orbovinespongiformencephalopathyorBSE)亨汀頓舞蹈病(Huntington’sdisease)74生物大分子的結構與功能一、蛋白質的兩性電離性質體內多數蛋白質pI為pH5.0，體液pH7.4,陰離子？陽離子?pH<pIpH=pIpH>pI蛋白質的等電點（pI）：在某一pH溶液中，蛋白質解離成陰、陽離子的趨勢相等，成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的pH值稱為該蛋白質的等電點。第四節蛋白質的理化性質75生物大分子的結構與功能二、蛋白質具有膠體性質1.有許多高分子溶液的性質（Mr1萬-100萬kD，直徑1-100nm，為膠粒范圍之內），如：擴散慢易沉降粘度大不能透過半透膜2.蛋白質膠體溶液的穩定因素：水化膜顆粒表面電荷76生物大分子的結構與功能三、蛋白質的變性（Denaturation）

在某些物理和化學因素作用下，蛋白質特定的空間構象被破壞，即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性喪失。77生物大分子的結構與功能變性因素：1）物理因素：高溫、高壓、射線等2）化學因素：強酸、強堿、重金屬鹽等變性后的表現：1）生物學活性消失2）理化性質改變變性的意義：1）利用變性：酒精消毒，高溫高壓滅菌，血濾液制備2）防止變性：低溫保存蛋白質制劑3）取代變性：乳品解毒(用于急救重金屬中毒)78生物大分子的結構與功能復性-恢復活性：

去除變性因素后，變性蛋白恢復原來的空間結構，恢復生物活性的現象。是否所有的蛋白質變性都是可逆的？為什么？

理論上可以，但很難使外界因素完全復原。有些蛋白質的變性作用是可逆的，其變性如不超過一定限度，經適當處理后，可重新變為天然蛋白質。79生物大分子的結構與功能四、蛋白質的紫外吸收特征由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的色氨酸和酪氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質的A280與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定量測定。80生物大分子的結構與功能1、茚三酮反應(ninhydrinreaction)

蛋白質水解后產生的氨基酸可發生茚三酮反應。2、雙縮脲反應(biuretreaction)蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，稱為雙縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解程度。五、蛋白質的呈色反應

OOO||||||2H2N—C—NH2---------→2H2N—C—NH—C—NH2+NH3

尿素雙縮脲氨雙縮脲

紫色

NaOHCuSO481生物大分子的結構與功能一、透析及超濾法分離蛋白質與小分子化合物*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。*超濾法

(ultrafiltration)應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。第五節蛋白質的分離、純化與結構分析82生物大分子的結構與功能血液透析小分子溶出小分子被帶出透析機透析液加壓血液透析：利用蛋白質分子較大，不能透過半透膜的性質，用半透膜將蛋白質與無機鹽、單糖等小分子物質分開83生物大分子的結構與功能二、有機溶劑沉淀、鹽析及免疫沉淀*丙酮、乙醇等有機溶劑，可破壞蛋白質的水化層，在0～4℃低溫下，使蛋白質沉淀。環境溫度高等不良因素影響下，有機溶劑可促使蛋白質變性。*鹽析(saltprecipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和且水化膜被破壞，導致蛋白質沉淀。*

免疫沉淀法：利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，并形成抗原抗體復合物的性質，可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。84生物大分子的結構與功能三、電泳法分離蛋白質蛋白質在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術,稱為電泳(elctrophoresis)

。根據支撐物不同，分為薄膜電泳、凝膠電泳等85生物大分子的結構與功能86生物大分子的結構與功能幾種重要的蛋白質電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質分子量的測定。*等電聚焦電泳，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。*雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技術。87生物大分子的結構與功能四、層析(chromatography)或色譜法分離蛋白質待分離蛋白質溶液（流動相）經過一種固態物質（固定相）時，根據待分離蛋白質的顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質組分在兩相中反復分配，并以不同速度流經固定相而達到分離蛋白質的目的。