動物克隆與核移植技術克隆(clone)是指用無性方式產生的后代群體。分子水平：基因克隆細胞水平：細胞克隆個體水平：動物、植物克隆動物克隆指不經過有性生殖過程，而是通過核移植生產遺傳結構與細胞核供體相同的動物個體的技術。動物克隆是一種通過核移植過程進行無性繁殖的技術。經過核移植而產生的動物，其遺傳結構與細胞核供體完全相同。動物克隆技術包括細胞核移植技術和卵裂球培養、胚胎分割技術。核移植技術：利用顯微操作技術將一個細胞的細胞核移植到另一個細胞中，或者將兩個細胞的細胞核（或細胞質）進行交換，從而可能創造無性雜交生物新品種的一項技術。

核移植技術最早由德國著名胚胎學家Spemann于1938年首次提出,研究工作主要集中在兩棲動物和魚類。哺乳動物的核移植研究始于1969年,但由于其卵母細胞較小,而且是體內發育,給研究工作帶來一定難度。1995年首次用胚盤細胞作為供體細胞培養出了2頭羊,它標志著哺乳動物體細胞核移植的開端。1997年首次以成年綿羊乳腺上皮細胞為核供體的克隆羊“多莉”成功誕生，證明了高度分化的體細胞仍具有全能性。之后相繼以體細胞為核供體培養出了克隆小鼠、牛、山羊、豬等。核移植技術簡史核移植技術類型供體細胞核的來源胚胎細胞核移植體細胞核移植核移植目的生殖性克隆（克隆人）治療性克隆（克隆胚胎）供受體種間關系同種核移植異種核移植核移植技術的一般操作程序（重點）

1．核受體細胞的準備2．核供體細胞的準備3．細胞核移植4．激活5．重組胚的體內或體外培養6．胚胎移植1．核受體細胞的準備

核移植的受體細胞常為去核卵母細胞。這是因為在卵母細胞的細胞質含有某種特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表達程序發生重新排列，使已經分化了的細胞重新回到發育過程的原點，同受精卵一樣開始個體發育過程。卵母細胞的來源有兩種方式：一是用激素對雌體進行超排處理，從輸卵管沖出體內成熟的MⅡ卵母細胞。二是收集卵巢，吸出濾泡中的卵丘—卵母細胞復合體(COCs)，在體外培養成熟后作為受體。核移植技術的一般操作程序2．核供體細胞的準備

在核移植操作中，細胞核供體細胞首先必須是完整的二倍體，該細胞必須保持有供體動物完整的基因組；供體細胞核必須能夠在受體細胞質的作用下，產生細胞分化過程的倒轉，變得如同剛受精的合子一樣，能重新完成從受精到發育成一個正常動物個體的全過程。

供體細胞主要有兩大類：胚胎卵裂球和體細胞。另外，核供體細胞的來源還有胚胎干細胞和胎兒成纖維細胞。

核移植技術的一般操作程序3．細胞核移植常用的核移植方法有兩種，即胞質內注射和透明帶下注射。胞質內注射是用一個外徑5～8μm的注核針吸取供體核后直接注射進卵母細胞胞質內的方法。透明帶下注射則是把供體細胞核注射在透明帶與卵母細胞之間的卵周隙中，核移植后用電刺激進行細胞融合。核移植技術的一般操作程序4．激活

卵母細胞的激活涉及的因素很多，無論是受精引起的卵母細胞激活還是人工的激活，都會引起卵母細胞發生一系列的反應，這些反應是胚胎發育所必需的。其激活原理是通過電刺激等方法使卵母細胞從MII期中解放出來，并轉到“受精”的狀態。

核移植技術的一般操作程序5．重組胚的體內或體外培養

經融合和激活的重組胚移入中間受體進行體內或體外培養，觀察重組胚的發育率。羊、牛、豬的核移植胚常采用體內培養方法獲得桑椹胚和囊胚，即羊和牛的重組胚用瓊脂包埋后移入休情期的母羊結扎的輸卵管中體內培養4-7d，發育至桑椹胚和囊胚。豬的核移植重組胚移入同期化受體母豬輸卵管內作體內培養7d，發育為囊胚。大鼠、小鼠和兔的核移植胚多作體外培養，發育至桑椹胚或囊胚。核移植技術的一般操作程序6．胚胎移植

重組克隆胚胎移植的受體母畜要選擇皮毛顏色與供體品種不同、繁殖性能強、體格稍大的當地品種，進行同期發情處理，按常規方法移植代孕母畜（寄母）的子宮中，待其發育到產仔。核移植技術的一般操作程序克隆羊與體細胞核移植卵細胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質細胞核細胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細胞它證明了一個已經完全分化了的動物體細胞仍然保持著當初胚胎細胞的全部遺傳信息，并且經此技術處理后，體細胞恢復了失去的全能性形成完整個體。多利羊的成功提示我們，在培育體細胞成為核供體之前，利用“基因靶”技術精確地誘發核基因的遺傳改變或精確地植入目的基因，再用選擇技術準確地挑選那些產生了令人滿意變化的細胞作為核供體，從而生產出基因克隆體。也就是說，我們可以按照人的意志去改選、生產物種。核移植技術的應用1．制備轉基因克隆動物，

進行生物藥物生產；2．培育優良畜種，擴大良種種群；3．開展異種動物克隆，拯救瀕危動物；4．與干細胞技術結合，開展治療性克隆5．利用核移植技術，研究生物學的基本問題。克隆技術存在的問題

理論問題分化的體細胞克隆對遺傳物質重編（細胞核內所有或大部分基因關閉，細胞重新恢復全能性的過程）的機理還不清楚；克隆動物是否會記住供體細胞的年齡。克隆動物的連續后代是否會累積突變基